一種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法及檢測試劑盒的製作方法

2023-07-01 17:35:21 1

專利名稱：：一種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法及檢測試劑盒的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種乳中摻假的檢測方法及其檢測試劑盒，特別是乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法以及根據該方法的檢測試劑盒。
背景技術：
：收購的鮮奶由於各種原因可能會混入某些對人體有害的物質，當其含量超過規定的數值時就應當視其為不合格奶而處理掉。另外，所收購的鮮牛奶也存在一些摻假的情況，例如在鮮牛奶中摻入亞硝酸鹽等可以使收購的鮮牛奶保鮮，通常摻假亞硝酸鹽含量不超過5mg/kg;為了使亞硝酸鹽不被檢出，又向牛奶中加入亞硝酸鹽屏蔽劑，例如抗壞血酸鈉、抗壞血酸等，這會導致鮮奶中的亞硝酸鹽不能被正常的檢測出來，對摻假的檢測和人體健康均十分不利。因此，在對鮮牛奶的摻假檢測過程中，除了需要檢測是否含有亞硝酸鹽外，還需要檢測是否添加了亞硝酸鹽屏蔽劑。目前關於牛奶摻假檢測的國家標準中還沒有關於乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的標準檢測方法，不能滿足實際需求。
發明內容本發明要解決的技術問題在於提供一種對乳中摻入亞硝酸鹽屏蔽劑以掩蓋摻入亞硝酸鹽的檢測方法及檢測試劑盒。其成本低廉、操作方便快速，且現象明顯、靈敏度高，能夠滿足生產企業的廣泛需要。本發明提供了一種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法，包括如下步驟1)取空白乳樣和待測乳樣，分別加入亞硝酸鹽溶液，混勻；2)分別檢測所述空白乳樣和待測乳樣中的亞硝酸鹽含量；3)所述待測乳樣與所述空白乳樣中檢測出的亞硝酸鹽含量相同，則判定所述待測乳樣中無亞硝酸鹽屏蔽劑；所述待測乳樣中檢測出的亞硝酸鹽含量低於所述空白乳樣中的亞硝酸鹽含量，則判定所述待測乳樣中含有亞硝酸鹽屏蔽劑。其中，所述步驟2)中的檢測方法為向所述空白乳樣和待測乳樣中分別添加亞硝酸鹽顯色劑，對比所述待測乳樣與空白乳樣的顯色結果，得到所述待測乳樣中的亞硝酸鹽含量。優選的，所述步驟1)中待測乳樣和空白乳樣的取樣量範圍為lmL-2mL，亞硝酸鹽為亞硝酸鈉，其濃度範圍為質量濃度8mg/L-12mg/L。優選的，待測乳樣與所加入亞硝酸鈉的比例為體積與體積比2:1。亞硝酸鹽顯色劑可以為液體顯色劑，其配製方法為取0.1gl-萘酚，0.2gl-萘胺，0.6g無水對胺基苯磺酸，加入200mL水溶解，溶解後再加入200mL冰乙酸，充分混勻。優選的，待測乳樣與所添加的液體顯色劑體積與體積比2:1。所述亞硝酸鹽顯色劑也可以為固體格裡斯千顯色試劑，其配製方法為取酒石酸(C4H606)89克、無水對氨基苯磺酸(QH4(NH2)(S03H))10克、a-萘胺(C6H7NH2)l克，充分混合，研磨成無可見顆粒的均勻細緻的白色粉末，密封保持乾燥避光保存。優選的，待測乳樣與所添加的固體格裡斯千顯色劑的體積與質量比為2:0.3。所述步驟2)中加入顯色劑混勻後觀察空白乳樣和待測乳樣顏色變化時間為待反應30秒後並在1分鐘內觀察。具體的說，如果待測乳樣顯示的顏色與空白乳樣的相同，則表明其中亞硝酸鹽的檢出含量與空白乳樣中的亞硝酸鈉的檢出含量相同，表明其中不含亞硝酸鹽屏蔽劑。如果待測乳樣的顏色比空白乳樣的顏色深，則表明其中亞硝酸鹽的檢出含量大於空白乳樣中的亞硝酸鈉的檢出含量，表明其中本身就含有亞硝酸鹽。如果待測乳樣的顏色比空白乳樣的顏色淺，則表明其中亞硝酸鹽的檢出含量小於空白乳樣中的亞硝酸鈉的含量，表明其中有部分亞硝酸鹽被屏蔽不能被檢出，因而含有亞硝酸鹽屏蔽劑。實際檢測中，通常檢測結果為不含亞硝酸鹽屏蔽劑時記為陰性，含有亞硝酸鹽屏蔽劑則記為陽性。採用上述顯色劑進行檢測時，當待測乳樣的顯色為粉色、深粉色或深於空白乳樣的顏色判為陰性；當待測乳樣的顯色為淺於粉色的顏色，例如淡粉色、微粉色、白色時判為陽性。由於每次不同待測乳樣品本身的性質有異，空白乳樣和待測乳樣的顯色會輕微差異，而且試驗人員操作也會有細微的差異，顯示為粉色不能判為陽性，仍判斷為陰性。本發明還提供了一種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測試劑盒，包括上述的亞硝酸鹽溶液、亞硝酸顯色劑，並採用上述方法進行結果判定。本發明的乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法及檢測試劑盒具有如下優點1)成本低廉，適合用於牛奶收購在線質量監控。2)操作方便快捷，檢驗時間短。單個樣品的檢驗用時約為1分鐘，非常快捷方便，適用於乳品企業的大規模檢測。3)檢出限低，為0.01%。4)檢測現象明顯、檢測靈敏度高。具體實施例方式下面將結合具體實施方案對本發明的方法做更詳細的說明。本領域技術人員應當理解，下述實施例均用於對本發明所要求保護的範圍進行實例性的描述，以此概括本發明的各參數的相對範圍，因而不能將之理解為對本發明的一種具體限制。實施例l本實施例給出了一種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法，該方法需要添加亞硝酸鹽顯色劑檢測乳中亞硝酸鹽的含量，下面對亞硝酸鹽顯色劑的配置步驟進行詳細說明。1、配置液體顯色劑在根據本發明的一個具體實施例中，可以使用液體顯色劑來檢測乳中亞硝酸鹽的含量，所述液體顯色劑的配製方法為取0.1gl-萘酚，0.2gl-萘胺，0.6g無水對胺基苯磺酸，加入200mL蒸餾水溶解，溶解後再加入200mL冰乙酸，充分混勻。該顯色劑遇不同濃度的亞硝酸鹽顯示為不同深淺的粉色。該液體亞硝酸鹽顯色劑配製好後應低溫保存備用，例如，可以置於冰箱中保存。2、配置固體顯色劑在根據本發明的另一個具體實施例中，可以使用固體顯色劑來檢測乳中亞硝酸鹽的含量，所述固體顯色劑是一種固體格裡斯千顯色試劑，其配製方法為取酒石酸(C4H606)89克、無水對氨基苯磺酸(C6H4(NH2)(S03H))10克、a-萘胺(C6H7NH2)1克，充分混合，在研磨儀中研成無可見顆粒的均勻細緻的白色粉末。該顯色劑遇不同濃度的亞硝酸鹽顯示為不同深淺的粉色。該固體亞硝酸鹽顯色劑配置好後應密封保持乾燥避光保存備用，例如存放於棕色瓶中。實施例2本實施例給出了一種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法，下面對該方法的具體檢測步驟進行詳細說明。本實施例中，分別採用液體顯色劑和固體顯色劑分別檢測亞硝酸鹽的含量。1、樣品測定(1)可以採用液體顯色劑來檢測，方法如下取1ml待測乳樣於試管中，加入10mg/L亞硝酸鈉溶液0.5ml，充分混勻，反應5-10秒，加入0.5ml液體顯色劑，混勻，在0.5-1分鐘之間觀察顯色現象。在每批待測乳樣檢測時，同時取不含亞硝酸鹽及亞硝酸鹽屏蔽劑的空白乳樣按照同樣的方法做陰性空白對照實驗。待測乳樣中含有亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陽性(+)，不含亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陰性(-)。依據下表進行判定待測乳樣顯色結果判定粉色、深粉色或深於空白乳樣的顏色陰性微粉色、白色或淺於空白乳樣的顏色陽性其中，待測乳樣的顏色深於空白乳樣的顏色表示原待測乳樣中含有亞硝酸鹽，屬於不合格乳，不能收購。檢測結果為陽性的待測乳不合格，不能收購。(2)採用固體格裡斯千顯色試劑來檢測，方法如下取待測乳樣2ml於試管中，加入10mg/L亞硝酸鈉溶液lml，充分混勻，反應5-10秒，取約0.3g的格裡斯千試劑，加入試管中，避免試劑掛壁，振蕩混勻，在0.5—1分鐘之間觀察顯色現象。在每批待測乳樣檢測時，同時取空白乳樣按照同樣的方法做陰性空白對照實驗。待測乳樣中含有亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陽性(+)，不含亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陰性(-)。依據下表進行判定待測乳樣顯色結果判定粉色、深粉色或深於空白乳樣的顏色陰性微粉色、白色或淺於空白乳樣的顏色陽性其中，待測乳樣的顏色深於空白乳樣的顏色表示原待測乳樣中含有亞硝酸鹽，屬於不合格乳，不能收購。檢測結果為陽性的待測乳不合格，不能收購。具體的說，如果待測乳樣顯示的顏色與空白乳樣的相同，則表明其中亞硝酸鹽的檢出含量與空白乳樣中的亞硝酸鈉的檢出含量相同，表明其中不含亞硝酸鹽屏蔽劑。如果待測乳樣的顏色比空白乳樣的顏色深，則表明其中亞硝酸鹽的檢出含量大於空白乳樣中的亞硝酸鈉的檢出含量，表明其中本身就含有亞硝酸鹽。當待測乳樣顏色深於空白乳樣的顏色時待測乳中的亞硝酸鹽含量是0.2mg/kg，上述兩種顯色方法對亞硝酸鹽的檢出限是0.2mg/kg。如果待測乳樣的顏色比空白乳樣的顏色淺，則表明其中亞硝酸鹽的檢出含量小於空白乳樣中的亞硝酸鈉的含量，表明其中有部分亞硝酸鹽被屏蔽不能被檢出，因而含有亞硝酸鹽屏蔽劑。實際檢測中，通常檢測結果為不含亞硝酸鹽屏蔽劑時記為陰性，含有亞硝酸鹽屏蔽劑則記為陽性。採用上述顯色劑進行檢測時，當待測乳樣的顯色為粉色、深粉色或深於空白乳樣的顏色判為陰性；當待測乳樣的顯色為淺於粉色的顏色，例如淡粉色、微粉色、白色時判為陽性。由於每次不同待測乳樣品本身的性質有異，空白乳樣和待測乳樣的顯色會輕微差異，而且試驗人員操作也會有細微的差異，顯示為粉色不能判為陽性，仍判斷為陰性。2、檢測結果人為加入亞硝酸鹽後的乳樣中摻入不同濃度的亞硝酸鹽屏蔽劑，分別按上述的方法檢測，檢測結果如下:__n,參亞石肖酸鹽待測乳樣顯色(採用待測乳樣顯色(採用格，，m,,」屏蔽齊U濃度液體顯色劑檢測)裡斯千顯色試劑檢測)10%深粉色深粉色陰性(-)20.005%粉色粉色陰性(-)30.01%淡粉色淡粉色陽性(+)40.05%微粉色微粉色陽性(+)0.1%微粉色微粉色陽性(+)60.5%白色白色陽性(+)由於每批不同待測乳樣品本身的性質有異，空白乳樣和待測乳樣的顯色會輕微差異，而且試驗人員操作也會有細微的差異，顯示為粉色不能判為陽性，仍判斷為陰性。3、方法驗證(1)空白乳樣的陰性對照驗證實驗取空白乳樣分別採用液體顯色劑和固體格裡斯千顯色試劑檢測，檢測結果如下編號顯示顏色結果判定空白乳樣l深粉色陰性(-)空白乳樣2深粉色陰性(-)空白乳樣3深粉色陰性(-)(2)檢出限驗證人為加入亞硝酸鹽後的待測乳樣中摻入不同濃度的亞硝酸鹽屏蔽劑，分別按上述方法檢測，檢測結果如下tableseeoriginaldocumentpage9由於每批不同待測乳樣品本身的性質有異，空白乳樣和待測乳樣的顯色會輕微差異，而且試驗人員操作也會有細微的差異，顯示為粉色不能判為陽性，仍判斷為陰性。本方法檢出限為0.01%。實施例3本實施例給出了根據本發明的另一個具體實施方式的一種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法，下面對該方法的具體檢測步驟進行詳細說明。檢測乳中亞硝酸鹽屏蔽劑，按照如下步驟進行1、亞硝酸鹽顯色劑的配製方法與實施例1相同。2、樣品測定(1)採用液體顯色劑來檢測，方法如下取lml待測乳樣於試管中，加入12mg/L亞硝酸鈉溶液0.5ml，充分混勻，反應5-10秒，加入0.5ml液體顯色劑，混勻，在0.5-1分鐘之間觀察顯色現象。在每批待測乳樣檢測時，同時取空白乳樣按照同樣的方法做陰性空白對照實驗。待測乳樣中含有亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陽性(+)，不含亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陰性(-)。依據下表進行判定待測乳樣顯色亞硝酸鹽屏蔽劑量結果判定粉色、深粉色或深於空白對照<0.01%陰性微粉色、白色或淺於空白對照20.01%陽性(2)採用固體格裡斯千顯色試劑來檢測，方法如下取待測乳樣2ml於試管中，加入12mg/L亞硝酸鈉溶液lml，充分混勻，反應5-10秒，取約0.3g的格裡斯千試劑，加入試管中，避免試劑掛壁，振蕩混勻，在0.5—l分鐘之間觀察顯色現象。在每批待測乳樣檢測時，同時取空白乳樣按照同樣的方法做陰性空白對照實驗。待測乳樣中含有亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陽性(+)，不含亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陰性(-)。依據下表進行判定待測乳樣顯色亞硝酸鹽屏蔽劑量結果判定粉色、深粉色或深於空白對照<0.01%陰性微粉色、白色或淺於空白對照^0.01%陽性3、檢測結果:人為加入亞硝酸鹽後的乳樣中摻入不同濃度的亞硝酸鹽屏蔽劑，分別按上述的方法檢測，檢測結果如下編號摻亞硝酸鹽屏蔽劑濃度待測乳樣顯色(採用待測乳樣顯色(採用格液體顯色劑檢測)裡斯千顯色試劑檢測)結果判定10%深粉色深粉色陰性(-)20.005%粉色粉色陰性(-)30.01%淡粉色淡粉色陽性(+)40.05%微粉色微粉色陽性(+)50.1%微粉色微粉色陽性(+)60.5%白色白色陽性(+)由於每批不同待測乳樣品本身的性質有異，空白乳樣和待測乳樣的顯色會輕微差異，而且試驗人員操作也會有細微的差異，顯示為粉色不能判為陽性，仍判斷為陰性。實施例4本實施例給出了一種根據本發明的乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法的檢測試劑盒，該試劑盒包括8mg/L的亞硝酸鈉溶液，以及液體顯色劑。其中液體顯色劑採用實施例1中的方法配製。可按照如下步驟利用上述檢測試劑盒檢測乳中的硝酸鹽屏蔽劑lml乳樣，加入8mg/L亞硝酸鈉溶液0.5ml，充分混勻，反應5-10秒，加入0.5ml液體顯色劑，混勻，在0.5-1分鐘之間觀察顯色現象。在每批待測乳樣檢測時，同時取不含亞硝酸鹽及亞硝酸鹽屏蔽劑的空白乳樣按照同樣的方法做陰性空白對照實驗。待測乳樣中含有亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陽性(+)，不含亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陰性(-)。依據下表進行判定:__待測乳樣顯色_亞硝酸鹽屏蔽劑量結果判定粉色、深粉色或深於空白對照<0.01%陰性微粉色、白色或淺於空白對照$0.01%陽性實施例5本實施例給出了另一種根據本發明的乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法的檢測試劑盒，該試劑盒包括10mg/L的亞硝酸鈉溶液，以及固體格裡斯千顯色試劑0.3g每份，其中固體格裡斯千顯色試劑採用實施例1中的方法配製。可按照如下步驟利用上述檢測試劑盒檢測乳中的硝酸鹽屏蔽劑取乳樣2ml，加入10mg/L亞硝酸鈉溶液lml，充分混勻，反應5-10秒，取一份格裡斯千試劑，振蕩混勻，在0.5-1分鐘之間觀察顯色現象。在每批待測乳樣檢測時，同時取不含亞硝酸鹽及亞硝酸鹽屏蔽劑的空白乳樣按照同樣的方法做陰性空白對照實驗。待測乳樣中含有亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陽性(+)，不含亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測結果記為陰性(-)。依據下表進行判定:__待測乳樣顯色_亞硝酸鹽屏蔽劑量結果判定粉色、深粉色或深於空白對照<0.01%陰性微粉色、白色或淺於空白對照陽性實施例6人為往加入亞硝酸鹽後的乳樣中摻入不同濃度的亞硝酸鹽屏蔽劑，分別採用實施例4和實施例5中的上述試劑盒檢測，檢測結果如下:tableseeoriginaldocumentpage12試劑盒中還可以包含具有上述各顏色的比色卡，檢測人員在待測乳檢測顯色後即可與比色卡比對，而不需要再進行空白乳樣的陰性對照實驗。在大規模檢測時可提高檢測速度。上述實施例中，亞硝酸鹽採用的是亞硝酸鈉，實際操作中，也可以採用其它相同含量的亞硝酸鹽來代替，例如亞硝酸鉀。權利要求1.一種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法，包括如下步驟1)取空白乳樣和待測乳樣，分別加入亞硝酸鹽溶液，混勻；2)分別檢測所述空白乳樣和待測乳樣中的亞硝酸鹽含量；3)所述待測乳樣與所述空白乳樣中檢測出的亞硝酸鹽含量相同，則所述待測乳樣中無亞硝酸鹽屏蔽劑；所述待測乳樣中檢測出的亞硝酸鹽含量低於所述空白乳樣中的亞硝酸鹽含量，則所述待測乳樣中含有亞硝酸鹽屏蔽劑。2.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於所述步驟2)中的檢測方法為向所述空白乳樣和待測乳樣中分別添加亞硝酸鹽顯色劑，對比所述待測乳樣與空白乳樣的顯色結果，得到所述待測乳樣中的亞硝酸鹽含量。3.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於所述步驟l)中的亞硝酸鹽為亞硝酸鈉；優選的，所述亞硝酸鈉的濃度範圍為質量濃度8mg/L腸12mg/L。4.如權利要求3所述的檢測方法，其特徵在於所述待測乳樣與所加入亞硝酸鈉的比例為體積與體積比2:1。5.如權利要求2所述的檢測方法，其特徵在於所述亞硝酸鹽顯色劑為液體顯色劑，其配製方法為取0.1gl-萘酚，0.2gl-萘胺，0.6g無水對胺基苯磺酸，加入200mL水溶解，溶解後再加入200mL冰乙酸，充分混勻。6.如權利要求5所述的檢測方法，其特徵在於所述待測乳樣與所添加的液體顯色劑體積與體積比2:1。7.如權利要求2所述的檢測方法，其特徵在於所述亞硝酸鹽顯色劑為固體格裡斯千顯色試劑，其配製方法為取酒石酸(C4H606)89克、無水對氨基苯磺酸(C6H4(NH2)(S03H))10克、a-萘胺(C6H7NH2)1克，充分混合，研磨成無可見顆粒的均勻細緻的白色粉末。8.如權利要求7所述的檢測方法，其特徵在於所述待測乳樣與所添加的固體格裡斯千顯色劑的體積與質量比為2:0.3。9.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於所述步驟2)中加入顯色劑混勻後觀察空白乳樣和待測乳樣顏色變化時間為待反應30秒後並在1分鐘內觀察。10.—種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測試劑盒，包括如權利要求1-9所述的亞硝酸鹽溶液、亞硝酸鹽顯色劑；優選的，所述檢測試劑盒，進一步包括比色卡。全文摘要本發明涉及一種乳中亞硝酸鹽屏蔽劑的檢測方法及根據該方法的試劑盒。本發明的方法包括如下步驟取空白乳樣和待測乳樣，分別加入亞硝酸鹽溶液，混勻；分別檢測空白乳樣和待測乳樣中的亞硝酸鹽含量；待測乳樣與所述空白乳樣中檢測出的亞硝酸鹽含量相同，則判定所述待測乳樣中無亞硝酸鹽屏蔽劑；待測乳樣中檢測出的亞硝酸鹽含量低於所述空白乳樣中的亞硝酸鹽含量，則判定所述待測乳樣中含有亞硝酸鹽屏蔽劑。此法具有成本低廉，操作方便快捷，檢驗時間短，檢出限為0.01％，為快速檢測方法。文檔編號G01N21/78GK101413897SQ20081022783公開日2009年4月22日申請日期2008年12月1日優先權日2008年12月1日發明者梅李,王丹慧申請人:內蒙古蒙牛乳業(集團)股份有限公司