活性酯化多糖及其製造方法
2023-06-28 01:13:16 1
專利名稱：活性酯化多糖及其製造方法
技術領域：
本發明涉及活性酯化多糖及其製造方法。
背景技術：
在多件文獻中公開了向生物適合性高的多糖的側鏈中導入交聯性基團而形成的多糖衍生物可作為生物適合材料使用。其中，使向多糖的側鏈中導入的羧基與親電子性基團酯化，通過與含活性氫的基團接觸，該酯鍵解離，由此羧基參與交聯，具有上述結構的活性酯化多糖具有自交聯性，尤其是可用作防粘連材料、止血材料、醫療用粘合材料等各種生物適合材料(參見專利文獻1等)。上述活性酯基通常為醯亞胺酯，尤其是以琥珀醯亞胺酯為代表。作為多糖的活性酯化，對於在分子內具有羧基的透明質酸，也報導了利用透明質酸四丁銨鹽與N-羥基琥珀醯亞胺二苯基磷酸鹽的反應的、透明質酸的琥珀醯亞胺活性酯的合成方法等(參見非專利文獻1)，但以往通常這樣進行首先，向在分子內不具有羧基的多糖的側鏈中導入羧基製成酸型多糖，使該羧基與N-羥基醯亞胺進行脫水縮合而形成酯。使生成的活性酯化多糖在不良溶劑中析出結晶，然後減壓乾燥形成粉末，在使用時溶解在水中。專利文獻1 國際公開2004/81055號非專利文獻1 :Y. Luo 等，Bioconjugate Chem. 2001，12，1085-1088
發明內容
在使作為生物適合材料有用性高的活性酯化多糖產品化時，存在這樣的問題將乾燥產品的活性酯化多糖溶於水時，有時產生團塊等不溶物。對於含有不溶成分的產品來說，雖然到目前為止在實驗水平的研究上並未報導出現問題，但在謀求商業規模增加的方面首先導致出現品質上的問題，另外在生產效率方面也成為問題。因而期求在溶解於水中時不產生不溶物的品質穩定的活性酯化多糖、以及即使增大製造規模也可穩定地製造上述品質的活性酯化多糖的方法。本發明人對上述問題進行了多種研究，結果發現，通過使酯反應結束後的反應液與多元羧酸接觸，可解決乾燥產品溶於水時產生不溶物的課題。另外，也已經確認了也可抑制在最終乾燥工序和貯存時目標物質的平均分子量(Mw)經時上升。從而可確保實現規模擴大，從而完成本發明。需要說明的是，在上述研究過程中，對於由以往的製造方法得到的活性酯化多糖來說，其乾燥產品產生水不溶性成分時，在對該活性酯化多糖進行GPC測定時，在高分子側出現肩峰(shoulder)，或者確認到肩峰變寬，顯示生成了高分子量成分。利用頂光譜推測該高分子側的肩峰級分為活性酯化多糖的氫鍵合物。上述高分子量成分的生成對平均分子量(Mw)變化的貢獻率不一定很大，因此，即使生成不溶成分，也不能說Mw的值顯著變大。反之，雖然Mw有一定程度的增加時也不能說一定生成不溶成分，但事實上一般認為由以往的製造方法得到的活性酯化多糖在減壓乾燥時和貯存時Mw有經時增加的傾向，另外也發現Mw的經時變化率不均。進而發現Mw在減壓乾燥時的增加比在貯存時的增加顯著，以及，如果抑制Mw在減壓乾燥時的增加則可抑制Mw在貯存時的增加。因此，減壓乾燥時的Mw評價可視為包括貯存穩定性在內的產品穩定性的評價。另一方面，對於在上述製造過程中與多元羧酸接觸過的活性酯化多糖來說，可抑制最終乾燥產品在溶於水時生成不溶物，在進行GPC測定時，未確認在峰上高分子側出現明顯的肩或者寬肩化。另外，也可確認起到抑制Mw在減壓乾燥時經時增大的效果。本發明的製造過程中使用的多元羧酸幾乎不殘留在最終乾燥產品中，在將該乾燥產品溶於水時不產生不溶物的原因以及在減壓乾燥時高分子量成分的經時生成或Mw經時增大的抑制效果的原因，雖然尚不明確，但事實上通過在製造過程中與多元羧酸接觸可得到穩定的乾燥產品且重現性良好、能夠可靠地保證乾燥產品的水溶解性。因此，本發明提供如下發明。本發明是一種活性酯化多糖的製造方法，其中，使酸型多糖的羧基與親電子性基團導入劑進行酯化反應而生成活性酯化多糖，使生成的活性酯化多糖與多元羧酸接觸，然後使其析出並將其回收。通常，對回收上述沉澱後得到的活性酯化多糖進行減壓乾燥。另外，本發明提供由上述方法得到的活性酯化多糖。根據本發明，起到對最終乾燥工序中的目標化合物的分子量經時上升的抑制效果。即使以商業規模也可穩定地製造不產生不溶物的活性酯化多糖(乾燥品)，可提供品質穩定的活性酯化多糖。
具體實施例方式以下，參照製造方法具體地說明本發明。本說明書中，將具有羧基的多糖稱為「酸型多糖」。本發明中，使酸型多糖的羧基、與親電子性基團導入劑進行酯化反應，生成活性酯化多糖，使生成的活性酯化多糖與多元羧酸接觸，然後使活性酯化多糖析出並將其回收。〈酸型多糖〉成為酸型多糖主鏈的多糖，只要是在主骨架上具有2單位以上的單糖結構的多糖即可，沒有特別限制。可以舉出例如阿拉伯糖、核糖、木糖、葡糖糖、甘露糖、半乳糖、果糖、山梨糖、鼠李糖、巖藻糖、脫氧核糖等單糖類；海藻糖、蔗糖、麥芽糖、纖維素二糖、龍膽二糖、乳糖、蜜二糖等二糖類；蜜三糖、龍膽三糖、松三糖、木蘇糖等三糖以上的多糖類通過共價鍵形成的多糖、以及進一步向其導入官能團而形成的多糖。上述多糖可以是天然存在的也可以是人工合成的。對於多糖的分子量沒有特別限制。優選與上述單糖類、二糖類或三糖以上的多糖類以數十個 數千個鍵合形成的多糖相當的、平均分子量(Mw)為5 2500kDa的多糖。其原因在於，為上述多糖時，容易調節活性酯化多糖交聯後的凝膠硬度，容易在1分子鏈內導入多個參與交聯的活性酯基和含活性氫的基團。優選Mw為10 IOOOkDa的多糖。酸型多糖中的「羧基」通常為羧酸基(-C00H)及羧基烷基(-RC00H)。作為-RC00H， 可以舉出羧基甲基、羧基乙基、羧基丙基、羧基異丙基、羧基丁基等。酸型多糖只要是在活性酯化多糖的前體階段為酸型即可，可以是自身具有羧基的天然酸型多糖，也可以是具有導入的羧基的酸型多糖。導入羧基的多糖可以是天然酸型多糖也可以是自身不具有羧基的多糖。作為上述自身具有羧基的天然酸型多糖，沒有特別限制，可以舉出含有半乳糖醛酸的果膠和透明質酸等。作為不具有羧基的多糖，沒有特別限制，可以舉出葡聚糖、支鏈澱粉、糊精等。葡聚糖作為血漿代用品使用，能夠以商品名為「Dextran T fractions" (Amersham Biosciences公司)的產品得到。支鏈澱粉作為包括口服藥的藥品添加劑使用，內毒素等的生物學汙染少的物質較理想。支鏈澱粉能夠以商品名為「Pullulan PI-20」(林原公司)的產品得到。糊精是澱粉的水解物，是分子鏈長度不同的葡萄糖聚合物的混合物。糊精中的葡萄糖單位主要為α _1，4鍵，通常含有一定比例的α_1，6鍵。本發明中，糊精原料的澱粉種類沒有特別限制，因此對α -1，6鍵的存在比例也沒有特別限制。對於本發明中使用的糊精來說，從獲得容易性、使用時的物性、處理容易性、覆膜形成性等方面考慮，典型地為MwlO 200kDa左右的糊精。在本發明中所有多糖均可使用通常商業流通的多糖。本發明中，從安全性方面考慮，可合適地使用在上述醫療用途中有實際效果的多糖。其中，對於糊精來說，未報導有過敏性休克，在腹膜透析方面也有實際應用，且未報導有生物適應方面的缺陷，從上述方面考慮，是一種特別優選的多糖。另外，酸型多糖優選為具有羧基甲基的羧基甲基化多糖。需要說明的是，本發明中，酸型多糖中的羧基優選為未配位有鹽的「非鹽型」，優選最終得到的活性酯化多糖不是鹽形態。此處，「鹽」包括鹼金屬、鹼土金屬等無機鹽、四丁銨 (TBA)等季胺、碘化氯甲基吡啶鐺等滷鹽等。「非鹽型」是指未配位有上述「鹽」，「不是鹽形態」是指不含上述鹽。多糖的羧基化反應可利用公知的氧化反應進行，沒有特別的限制。當將多糖的羥基氧化形成羧酸時，對於反應種類沒有特別限制，可以舉出例如四氧化二氮氧化、發煙硫酸氧化、磷酸氧化、硝酸氧化、過氧化氫氧化，分別可使用試劑選擇通常已知的反應進行氧化。 各反應條件可根據羧基的導入量適當設定。例如，使作為原料的多糖懸浮於氯仿或四氯化碳中，加入四氧化二氮，由此將多糖的羥基氧化，來調製具有羧酸的酸型多糖。多糖的羧基烷基化反應可利用公知的方法，沒有特別限制，具體而言，當為羧基甲基化反應時，可選擇在將多糖烷基化後、使用一氯乙酸的反應。其反應條件可根據羧基甲基的導入量適當設定。此處的多糖通常以水溶液形式供於反應。對於導入有羧基的酸型多糖來說，通常使用不良溶劑(通常為醇)使其析出並將其減壓乾燥。本發明中，作為向多糖中導入羧基的方法，可利用上述羧酸化或羧基烷基化中的任一方法，沒有特別限制，但從羧基導入反應引起的多糖分子量降低小、羧基的導入量相對容易控制的方面考慮，優選羧基烷基化、尤其是羧基甲基化。上述羧基甲基以下也記為 「CM-」。對於活性酯化中使用的酸型多糖來說，每Ig乾燥質量中的羧基(將該基團視為1 分子)量通常為0. 1 5mmol/g，優選0. 4 3mmol/g，較優選0. 5 2mmol/g。該羧基量的比例少於0. lmmol/g時，由該基團衍生、成為交聯點的活性酯基數目通常不足。另一方面，羧基量的比例多於5mmol/g時，活性酯化多糖(未交聯)難以溶於含有水的溶劑中。需要說明的是，酸型多糖的羧基量可通過以酚酞為指示劑的酸鹼反滴定來定量。本發明中，最終的活性酯化多糖中也可以殘留未活性酯化的羧基。因此，上述羧基量是最終的活性酯化多糖中的活性酯基和未活性酯化的羧基的總量。使上述酸型多糖與親電子性基團導入劑反應，形成活性酯基。此時使用的酸型多糖可以是一種也可以同時使用兩種以上。活性酯基是強於通常的醇的親電子性基團鍵合於羧基的羰基碳上而形成的基團， 酯鍵在有鹼共存時的水的存在下解離。作為上述形成活性酯基的親電子性基團導入劑，典型地，可使用可比較便宜地得到的N-羥基胺類化合物。具體而言，作為代表例可以舉出 N-羥基琥珀醯亞胺、N-羥基降冰片烯-2，3-二甲醯亞胺、2-羥基亞氨基-2-氰基乙酸乙酯、 2-羥基亞氨基-2-氰基乙醯胺、N-羥基哌啶、N-羥基鄰苯二甲醯亞胺、N-羥基咪唑、N-羥基馬來醯亞胺等。上述化合物也可以使用兩種以上。其中，N-羥基醯亞胺、尤其是N-羥基琥珀醯亞胺(以下也記為NHS)在肽合成領域有實際應用，容易在商業上得到，因而是理想的。酸型多糖通常以非質子性極性溶劑的溶液的形式供於上述酯化反應。非質子性極性溶劑是指不具有質子(該質子可與具有電陽性官能團的親核試劑形成氫鍵)的極性溶劑，沒有特別限制，例如可以舉出二甲基亞碸(DMSO)、N，N-二甲基甲醯胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N，N- 二甲基乙醯胺、1，3- 二甲基-2-咪唑啉酮等。從多糖相對於溶劑的溶解性良好方面考慮，可合適地利用DMS0。如果為上述優選的「非鹽型」的酸型多糖，則通常可通過在上述溶劑中加熱至 20°C 120°C左右來進行溶解。酸型多糖與親電子性基團導入劑的酯化反應通常在脫水縮合劑的存在下進行。脫水縮合劑是這樣的物質除去1分子由羧基與親電子性基團導入劑的縮合而生成的水分子，即，進行脫水，使兩者形成酯鍵。作為脫水縮合劑，沒有特別限制，可以舉出例如1-乙基-3- 二甲基氨基丙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、1-環己基-(2-嗎啉基-4-乙基)-碳二亞胺 內消旋對甲苯磺酸鹽等。其中，1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC) 由於在肽合成領域有實際應用，容易在商業上獲得，因而較理想。通過調節上述親電子性基團導入劑與脫水縮合劑的加入量，可以控制最終活性酯化多糖中的活性酯基量。具體而言，優選為下述添加條件，即，脫水縮合劑的摩爾數(Zmmol)與酸型多糖的總羧基的摩爾數(Xmmol)之比(Z/X)在上述反應溫度下滿足0. 1 < Z/X < 50。其原因在於，當Z/X小於0. 1時，由於脫水縮合劑的添加量少，所以反應效率低，難以實現所期望的活性酯基導入率，當Z/X大於50時，雖然由於脫水縮合劑的添加量多使得活性酯基的導入率變高，但是得到的活性酯化多糖變得難溶於水。另外，對於相對於酸型多糖的總羧基的摩爾數(Xmmol)的親電子性基團導入劑的摩爾數(Ymmol)來說，只要添加與活性酯基的導入率相應的反應量以上即可，沒有特別限制，優選為滿足0. 1 < Y/X < 100的添加條件。相對於酸型多糖的總羧基1摩爾，親電子性基團導入劑通常以2 30摩爾的過剩量使用。
對於酯化反應工序的反應溫度沒有特別限制，優選為0°C 70°C，較優選20°C 40°C。反應時間根據反應溫度不同而不同，通常為1 48小時，優選為12小時 M小時。以往，使通過上述酯化反應生成的活性酯化多糖析出結晶來將其回收，但在本發明中，在上述析出前，使活性酯化多糖與多元羧酸接觸。多元羧酸只要是二羧酸以上即可，通常從容易獲得的二羧酸和三羧酸中選擇。尤其是，作為以往實際用作藥品添加物的二羧酸，優選琥珀酸和蘋果酸，三羧酸優選檸檬酸。 可以同時使用兩種以上上述多元羧酸。通常情況下，對於多元羧酸的使用量來說，以相對於親電子性基團導入劑添加量1 摩爾的酸當量計，通常為1當量以上，通常為1 10當量。如果在上述範圍內，則最終可得到不產生水不溶物的活性酯化多糖乾燥品。優選為1.5當量以上。若過多則在乾燥時平均分子量Mw經時變化率有變高的傾向，優選為9當量以下，較優選7. 5當量以下。典型地為
3當量。對於活性酯化多糖與多元羧酸的接觸來說，具體而言，向酯化反應後的反應液中加入多元羧酸並將其混合即可。混合時間沒有特別限制，通常為1 60分鐘。在上述接觸後，按照與以往相同的方法使活性酯化多糖析出並將其回收。通常，將反應液注入到過剩量的醇、丙酮等不良溶劑中使其析出，通過傾析、離心、過濾等適當的方法進行回收。優選用不良溶劑反覆洗滌析出物，至少進行1次，由此進行純化。通過上述析出·純化工序中的過濾和/或洗滌等方法，與未反應的親電子性基團導入劑、脫水縮合劑、 副反應產物一同，將供於反應體系的多元羧酸也一併除去，最終活性酯化多糖中實質上沒有多元羧酸殘留。本發明中，上述工序後的活性酯化多糖(初始的)的平均分子量Mw與酯化前的酸型多糖大致相同。活性酯化多糖對水不穩定，通常對析出·純化工序後的活性酯化多糖進行減壓乾燥。減壓乾燥在45°C以下的溫度下通常進行至少1小時優選4小時，較理想。對於由本發明的製造工序得到的活性酯化多糖來說，在上述減壓乾燥時的分子量經時增大得到抑制。當求出減壓乾燥時的平均分子量(Mw)經時的變化率時，作為一個方案，本發明製造的NHS糊精的減壓乾燥時的平均分子量(Mw)經時的變化率優選小於1.8，較優選為1. 4以下。需要說明的是，對於由以往的方法得到的活性酯化多糖來說，在減壓乾燥時可觀測到平均分子量Mw經時增大，通常變化率為1.8%以上。可根據需要將經乾燥的活性酯化多糖分解或粉碎而形成粉末。如有必要，也可通過篩分等來進行粒徑調整而調整為任意的粒度分布。雖然沒有特別限制，但通常優選為平均粒徑為數十nm 數百μ m的粉末。由如上所述的本發明的方法得到的活性酯化多糖(乾燥品)，作為交聯性材料通常將其溶於水來使用，這時，不產生團塊等不溶成分。對於本發明涉及的活性酯化多糖來說，在分子內具有至少一個上述活性酯基，為了形成交聯母體(crosslinked matrix)，通常在1分子中具有2個以上。由於來自天然原料的多糖多為分子量不同的分子的混合物，所以，活性酯基含有率用每Ig乾燥質量的活性酯基量表示是合適的。雖然根據使用目的不同而不同，但活性酯化多糖的每Ig乾燥質量的活性酯基量通常為0. 1 5mmol/g，優選為0. 1 2mmol/g。活性酯基的導入率(％ )可用所得到的活性酯化多糖中的活性酯基含量的摩爾量(AE)與酸型多糖具有的總羧基(TC)之比(AE/TC)乘以100來表示，例如，可通過 Biochemistry Vol. 14，No. 7 (1975)，pl535_1541所記載的方法確定。活性酯基的導入率小於100%時，表示活性酯化多糖除了具有活性酯基之外還具有未酯化的羧基。作為本發明的活性酯化多糖的優選實例，可以舉出NHS糊精。特別優選舉出將糊精的Mw為10 200kDa、CM基的導入量為0. 5 0. 9mmol/g的CM糊精進行活性酯化而成的NHS基導入量為0. 5 0. 7mmol/g的物質。需要說明的是，活性酯化多糖在導入活性酯基後也通常在多糖骨架分子內具有羥基，從而在分子內具有含活性氫的基團，但分子內的含活性氫的基團並不限於此，根據需要，也可進一步具有向分子內導入的含活性氫的基團。這時，活性酯化多糖具有的含活性氫的基團可以是一種也可以是兩種以上。含活性氫的基團例如為羥基、伯或仲氨基、巰基等。另外，活性酯化多糖中，除了上述活性酯基和含活性氫的基團之外，只要在不妨礙本發明的特性的範圍內，還可以含有公知的元素、原子團等官能團。作為上述官能團，具體而言，可列舉氟、氯、溴、碘等滷素；羧基；羧基甲基、羧基乙基、羧基丙基、羧基異丙基等羧基烷基；甲矽烷基、亞烷基甲矽烷基、烷氧基甲矽烷基、磷酸基等。上述官能團可以單獨導入一種也可以導入兩種以上。對於本發明的活性酯化多糖來說，由於實質上在多糖分子內具有羥基即含活性氫的基團，所以即使不加入交聯劑，在鹼存在下，分子鏈內或分子鏈間也可形成交聯結構，是自交聯性的。所謂在鹼存在下，是指存在PH超過7的水分的條件。另外，若將活性酯化多糖應用於生物表面，則通過與生物表面的含活性氫的基團反應而顯示相對於生物表面的粘合性。在作為醫療用處置材料的用途中，交聯反應時的溫度通常為生物體溫度，熱對交聯反應的影響實際不大，但本發明的活性酯化多糖在該溫度下的鹼存在下，可形成交聯母體。以下，基於實施例進一步具體地說明本發明，但這些實施例僅為示例性的，本發明不受它們的任何限制。實施例(實施例1)NHS糊精的製備1.酸型多糖CM糊精的製備在500mL燒瓶中，將糊精(名糖產業株式會社制Sandek SD#100, Mwl5kDa) IOg溶解於純水62. 5g中直至團塊或渾濁消失，然後，添加36wt% NaOH水溶液62. 5g，在室溫下攪拌90分鐘。向其中添加向氯乙酸10. 31g(109. lmmol)中加入蒸餾水而製成的75g氯乙酸水溶液，在60°C下反應6小時。冷卻至室溫後，添加20% HCl水溶液80mL，得到含有CM糊精的反應液。接下來，在攪拌下，將上述得到的反應液全部注入到含有乙醇4450mL和水ISOmL 的5L燒杯中。過濾收集析出物，最初用90 %乙醇水溶液2L洗滌，接著用乙醇2L洗滌，然後，在室溫下進行M小時減壓乾燥，得到CM糊精。按照如下方式求出的CM糊精的CM基量為0. 8mmol/g。酸型多糖的羧基量的定量量取酸型多糖(CM糊精)0. 2g(Ag)，添加至0. lmol/L 氫氧化鈉水溶液20mL和80vol %甲醇水溶液IOmL的混合溶液中，在25°C下攪拌3小時， 得到溶液，向上述溶液中滴加1.0%酚酞/90VOl%乙醇水溶液，使用0. 05mol/L硫酸進行酸鹼反滴定，測定0.05mol/L硫酸的使用量(V1HiL)15測定在未添加酸型多糖的空白中的 0.05mol/L硫酸的使用量(VtlHiL),按照下式(1)，計算酸型多糖的羧基量(Bmmo 1/g)。需要說明的是，使用的0. lmol/L氫氧化鈉水溶液、0. 05mol/L硫酸的滴定度均為1. 00。B = (V0-Vi) Χ。· 1+A…⑴A 酸型多糖的質量(g)B 羧基量(mmol/g)2. CM糊精的活性酯化(NHS導入率75 % )在IL燒瓶內，裝入上述得到的CM糊精IOg (酸基量為8mmol)、DMS0300g, 在室溫進行攪拌使其完全溶解，添加N-羥基琥珀醯亞胺(MB)(和光純藥工業公司制)12g (I(Mmmol)，在室溫下進行攪拌使其完全溶解。接下來，添加1_乙基_3_ 二甲基氨基丙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)(和光純藥工業公司制)20. Ig (I(Mmmol)，在室溫下進行攪拌使其完全溶解，然後，在23°C下攪拌16小時得到反應液1。3.酸處理將上述反應液1與表1所示的量的檸檬酸混合20分鐘，得到反應液2。4.回收在攪拌下，將反應液2全部添加到含有甲醇/丙酮=1 4&八)21^的31^燒杯中。 靜置後，進行傾析除去上清，添加甲醇/丙酮=1 4(v/v)800mL。使用Φ95πιπι桐山漏鬥、 No. 5Α濾紙進行抽濾，過濾收集析出物。用甲醇/丙酮=1 4(v/v) 1600mL洗滌漏鬥上的濾渣。5.乾燥在40 V下對濾渣進行M小時減壓乾燥。利用GPC測定4小時、8小時、24小時的乾燥品NHS糊精的平均分子量Mw，求出相對於時間的變化率。變化率(％)是將時間-Mw 的散點圖視為直線時的斜率。另外，進行各乾燥時間的乾燥品的溶解性試驗。將其結果示於表1。確認了得到的乾燥品NHS糊精在凝膠化試驗時發生凝膠化。
試劑RO水，硝酸鈉洗脫液的製備量取硝酸鈉8. 49g，用RO水稀釋為2L，形成50mM硝酸鈉水溶液。試料溶液的製備量取試料10mg，用洗脫液IOmL稀釋。倒轉10次來混合溶液，靜置2小時。使得到的溶液通過薄膜濾器，裝入測定小瓶(vial)中。HPLC測定條件測定裝置Tosoh制 ECOSEC HPLC-8320GPC柱Shodex Φ 8. OX 300mm 2 根洗脫液50mM硝酸鈉水溶液
流速1.0mL/min柱溫40°C檢測器RI進樣量100μ L〈溶解性試驗〉量取試料0. 27g於玻璃試管(15mL)中，加入RO水0. 54mL,激烈攪拌3分鐘。然後，觀察外觀，確認有無不溶物。〈凝膠化試驗〉量取試料0. 27g於玻璃試管(15mL)中，加入RO水0. 54mL,激烈攪拌3分鐘。然後，加入0. 5M碳酸鈉/碳酸氫鈉水溶液0. 18mL，激烈攪拌10秒，然後反轉試管。若未確認混合物流動，則判斷為凝膠形成。[表1]
權利要求
1.一種活性酯化多糖的製造方法，其中，使酸型多糖的羧基與親電子性基團導入劑進行酯化反應而生成活性酯化多糖，使生成的活性酯化多糖與多元羧酸接觸，然後使其析出並將其回收。
2.如權利要求1所述的方法，其中，對所述沉澱回收後的活性酯化多糖進行減壓乾燥。
3.權利要求1或2所述的方法，其中，所述多元羧酸為選自二羧酸和三羧酸中的至少一種。
4.如權利要求1 3中任一項所述的方法，其中，所述多元羧酸為選自琥珀酸、蘋果酸及檸檬酸中的至少一種。
5.如權利要求1 4中任一項所述的方法，其中，所述親電子性化合物為N-羥基醯亞胺。
6.如權利要求1 5中任一項所述的方法，其中，相對於所述親電子性化合物，所述多元羧酸的量為1.5 7. 5當量。
7.如權利要求1 6中任一項所述的方法，其中，所述多糖為糊精。
8.如權利要求1 7中任一項所述的方法，其中，所述酸型多糖為導入有羧基的糊精， 所述親電子性化合物為N-羥基琥珀醯亞胺。
9.一種活性酯化多糖，由權利要求1 8中任一項所述的方法得到。
全文摘要
本發明提供在溶解於水中時不產生不溶物的品質穩定的活性酯化多糖乾燥品、以及能夠以商業規模製造上述品質的活性酯化多糖的製造方法。本發明的活性酯化多糖的製造方法使具有羧基的多糖與親電子性化合物進行酯化反應，使生成的活性酯化多糖與多元羧酸接觸，然後使其析出並將其回收。
文檔編號C08B30/18GK102574930SQ20108004278
公開日2012年7月11日 申請日期2010年9月16日 優先權日2009年9月28日
發明者新美大志, 谷田部輝幸 申請人:泰爾茂株式會社