藍舌病病毒b-elisa抗體檢測試劑盒的製作方法
2023-06-02 13:57:01 1
藍舌病病毒b-elisa抗體檢測試劑盒的製作方法
【專利摘要】藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒，包括盒體與盒蓋，本實用新型盒體與盒蓋採用插入式結構相連；盒體內設置有與盒體尺寸大小相同的海綿託，所述的海綿託上設置有12個凹孔；凹孔內分別放置有1瓶20×濃縮洗滌液、1瓶稀釋液、1瓶包被液、1瓶終止液、1瓶底物液、1管BTV單抗、1管HRP羊抗鼠二抗、1管BTV強陽性血清、1管BTV弱陽性血清、1管BTV陰性血清、1管注射用水，1瓶BTV?VP7抗原。本實用新型將便攜性達到極致，使得藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測可以企業化操作、規模化生產，且具有檢測靈敏度高、檢測時間短、穩定可靠的優點。
【專利說明】藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒
【技術領域】
[0001]本實用新型屬於試劑盒結構【技術領域】，具體涉及藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒結構【技術領域】。
【背景技術】
[0002]藍舌病(Bluetongue,BT)是由呼腸孤病毒科環狀病毒屬藍舌病病毒(BTV)引起的經媒介昆蟲傳播的動物傳染病。BTV主要感染反芻動物牛、羊，表現為高燒、黏膜水腫和糜爛等症狀，致死率為20% -30%。
[0003]藍舌病最早的記錄可追溯於18世紀南非發病的綿羊。1940年前，本病報導僅限於撒哈拉以南的非洲大陸少數幾個國家。Gambles (1949)首次報導在非洲大陸以外的賽普勒斯出現本病流行，隨後的30年間，該病在土耳其(1944，1946，1947)、以色列(1949)、美國(1952)、伊比利亞半島(1956-1960)、葡萄牙(1956)、西班牙(1957)、巴勒斯坦、印度、中國等國均有爆發。
[0004]藍舌病病毒抗體檢測方法有中和試驗、ELISA試驗。其中ELISA方法由於實驗條件要求低(不涉及病原操作、生物安全要求低)而被廣泛應用。本實用新型專利中的B-ELISA抗體檢測方法，主要利用昆蟲細胞表達的藍舌病病毒BTV VP7蛋白作為包被抗原，針對VP7蛋白的單克隆抗體及其他物質組成而成試劑盒。試劑盒具有生產成本低，易於規模化生產等特點。
【發明內容】
[0005]本實用新型的目的是提供一種簡便、快速、敏感、特異的新型藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒，可廣泛應用於羊、等各種動物感染BTV後血清抗體的檢測和相應的流行病學調查。
[0006]藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒，包括盒體與盒蓋，本實用新型盒體與盒蓋採用插入式結構相連；盒體內設置有與盒體尺寸大小相同的海綿託，所述的海綿託上設置有12個凹孔；凹孔內分別放置有I瓶20X濃縮洗滌液、I瓶稀釋液、I瓶包被液、I瓶終止液、I瓶底物液、I管BTV單抗、I管HRP羊抗鼠二抗、I管BTV強陽性血清、I管BTV弱陽性血清、I管BTV陰性血清、I管注射用水，I瓶BTV VP7抗原。
[0007]本實用新型所述的20X濃縮洗滌液體積為60ml，瓶蓋為藍色；所述的稀釋液體積為50ml,瓶蓋為黃色；所述的包被液體積為25ml,瓶蓋為紫色；所述的終止液體積為25ml,瓶蓋為紅色；所述的底物液體積為25ml，瓶蓋為棕色；所述的BTV強陽性血清和BTV弱陽性血清體積分別為300ul，管蓋均為紅色；所述的BTV陰性血清體積為300ul，管蓋為藍色；所述的BTV單抗體積為300ul，管蓋為綠色；所述的注射用水體積為800ul，管蓋為白色；所述的HRP羊抗鼠二抗體積為300ul，管蓋為黃色。
[0008]本實用新型所述海綿託上放置有2塊酶標板、8張封板紙以及I份說明書。
[0009]本實用新型所述的酶標板為96孔酶標板，該酶標板由聚乙烯製成，酶標板上設置有支撐架，且可單條拆卸，由12條酶標條構成，每條酶標條上有8個微孔。
[0010]本實用新型的有益效果是:阻斷ELISA方法利用ELISA系統作為顯示系統檢測抗體對抗原的中和水平。ELISA系統有很多好處，如不需活病毒，因此不需要在2?3級生物安全實驗室中進行，另外阻斷ELISA法具有病毒抗體檢測快速、敏感、重複性強、成本低的特點。本實用新型將便攜性達到極致，使得藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測可以企業化操作、規模化生產，且具有檢測靈敏度高、檢測時間短、穩定可靠的優點。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011]圖1為本實用新型盒體內布置結構示意圖；
[0012]圖2為酶標板結構圖。
[0013]圖中標號為，1:兩塊酶標板，2:1份說明書，3:8張封板紙，4:60ml20X濃縮洗滌溶液，5:50ml稀釋液，6:25ml包被液，7:25ml終止液，8:25ml底物液，9:BTV VP7抗原，10:0.3ml BTV 強陽性血清，11:0.3ml BTV 弱陽性血清，12:0.3ml BTV 陰性血清，13:0.3mlHRP羊抗鼠二抗，14 =BTV單抗，15:0.8ml注射用水(去離子水)，16:盒體。
[0014]下面結合附圖和【具體實施方式】對本實用新型做出進一步解釋。
【具體實施方式】
[0015]如圖1和圖2所示，藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒，包括盒體與盒蓋，本實用新型盒體與盒蓋採用插入式結構相連；盒體內設置有與盒體尺寸大小相同的海綿託，所述的海綿託上設置有12個凹孔；凹孔內分別放置有I瓶20 X濃縮洗滌液、I瓶稀釋液、I瓶包被液、I瓶終止液、I瓶底物液、I管BTV單抗、I管HRP羊抗鼠二抗、I管BTV強陽性血清、I管BTV弱陽性血清、I管BTV陰性血清、I管注射用水，I瓶BTV VP7抗原。
[0016]本實用新型所述的20X濃縮洗滌液體積為60ml，瓶蓋為藍色；所述的稀釋液體積為50ml,瓶蓋為黃色；所述的包被液體積為25ml,瓶蓋為紫色；所述的終止液體積為25ml,瓶蓋為紅色；所述的底物液體積為25ml，瓶蓋為棕色；所述的BTV強陽性血清和BTV弱陽性血清體積分別為300ul，管蓋均為紅色；所述的BTV陰性血清體積為300ul，管蓋為藍色；所述的BTV單抗體積為300ul，管蓋為綠色；所述的注射用水體積為800ul，管蓋為白色；所述的HRP羊抗鼠二抗體積為300ul，管蓋為黃色。
[0017]本實用新型所述海綿託上放置有2塊酶標板、8張封板紙以及I份說明書。
[0018]本實用新型所述的酶標板為96孔酶標板，該酶標板由聚乙烯製成，酶標板上設置有支撐架，可單條拆卸，由12條酶標條構成，每條酶標條上有8個微孔。
[0019]使用本試劑盒的操作步驟如下。
[0020](I)在BTV VP7抗原凍幹瓶中注入600ul注射用水，用包被液1:50稀釋後，在所需的孔中各加10ul，37。。孵育Ih ；
[0021](2)將各孔的液體棄入廢液桶。每孔加300ul的洗滌液(試劑盒內20X濃縮洗液需用蒸餾水或去離子水稀釋後方可使用。如有結晶，需先溶解後，方可進行稀釋)進行洗板，重複三次。
[0022](3)在每孔中加入40ul稀釋液；然後在Al，A2孔加入1ul稀釋液；BI，B2，Cl，C2中加入1uIBTV強陽性血清；D1, D2，El, E2中加入1uIBTV弱陽性血清；F1, F2，Gl，G2中加入1ul稀釋液；H1，H2中加入1uIBTV陰性血清；待檢樣品，取1ul加入相應的孔中，並做好記錄，37 °C孵育Ih ；
[0023](4)將BTV單抗用稀釋液1:50稀釋後，除了 Al，A2孔外，其餘各孔加入50ul，在Al，A2孔中加入50ul稀釋液，37°C孵育Ih ；
[0024](5)重複步驟⑵；
[0025](6)將HRP羊抗鼠二抗用稀釋液1:100稀釋後，每孔中加入100ul，37°C孵育Ih ；
[0026](7)重複步驟⑵；
[0027](8)每孔加10ul底物液；
[0028](9) 37°C避光放置 10_15min ；
[0029](10)每孔加10ul終止液；在15min內於450nm波長處測定各孔的吸光度值，即
0^450? 值。
[0030](11)計算各孔的S/N值，即S/N =(血清樣品OD值/BTV陰性血清孔平均OD值)X 100。結果判定當BTV強陽性對照(SP) S/N值小於或等於20 ;BTV弱陽性對照(WP)S/N值在50-70之間；CC(BTV羊抗鼠二抗對照即Al，A2孔)孔S/N值小於10 ；BTV陰性血清孔(N)0D450讀數大於0.5，實驗結果有效。此時檢測樣品S/N值彡80時判為陰性，70 < S/N值< 80時判為可疑，需用其它方法檢測，S/N ( 70時判為陽性。
[0031]備註:BTV VP7抗原溶解後呈乳白色或無色或有微量不溶物，不影響使用效果。溶解抗原-20°C保存，反覆凍融至少30次不影響實驗結果；試劑盒保存方式，2°C _8°C保存。
【權利要求】
1.藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒，包括盒體與盒蓋，其特徵在於，盒體與盒蓋採用插入式結構相連；盒體內設置有與盒體尺寸大小相同的海綿託，所述的海綿託上設置有12個凹孔；凹孔內分別放置有I瓶20 X濃縮洗滌液、I瓶稀釋液、I瓶包被液、I瓶終止液、I瓶底物液、I管BTV單抗、I管HRP羊抗鼠二抗、I管BTV強陽性血清、I管BTV弱陽性血清、I管BTV陰性血清、I管注射用水，I瓶BTV VP7抗原。
2.根據權利要求1所述的藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒，其特徵在於，所述的20 X濃縮洗滌液體積為60ml，瓶蓋為藍色；所述的稀釋液體積為50ml，瓶蓋為黃色；所述的包被液體積為25ml,瓶蓋為紫色；所述的終止液體積為25ml,瓶蓋為紅色；所述的底物液體積為25ml，瓶蓋為棕色；所述的BTV強陽性血清和BTV弱陽性血清體積分別為300ul，管蓋均為紅色；所述的BTV陰性血清體積為300ul，管蓋為藍色；所述的BTV單抗體積為300ul,管蓋為綠色；所述的注射用水體積為800ul,管蓋為白色；所述的HRP羊抗鼠二抗體積為300ul，管蓋為黃色。
3.根據權利要求1所述的藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒，其特徵在於，所述海綿託上放置有2塊酶標板、8張封板紙以及I份說明書。
4.根據權利要求3所述的藍舌病病毒B-ELISA抗體檢測試劑盒，其特徵在於，所述的酶標板為96孔酶標板，該酶標板由聚乙烯製成，酶標板上設置有支撐架，用於單條拆卸。
【文檔編號】G01N33/569GK203941168SQ201420380440
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年7月10日 優先權日:2014年7月10日
【發明者】艾軍, 楊雲慶, 祝賀, 楊俊興, 聶福平, 葉玲玲, 蔣宏偉, 楊素, 周曉黎, 花群義, 李應國, 董俊, 尹尚蓮 申請人:艾軍, 楊俊興, 聶福平