一種水產品中辛基酚和壬基酚的氣相色譜-質譜檢測方法
2023-06-30 01:18:21
專利名稱：一種水產品中辛基酚和壬基酚的氣相色譜-質譜檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種水產品中辛基酚和壬基酚的氣相色譜-質譜聯用檢測技術，屬於水產品質量安全檢測技術領域。
背景技術：
烷基酚類化合物是一類具有內分泌幹擾性的親脂性有機化合物，在全球範圍內廣泛應用於洗滌劑、殺蟲劑、塑料添加劑、紡織助劑以及造紙和油田化學品中。全世界每年大約生產500,000噸燒基酹聚氧乙烯醚,其中壬基酹聚 氧乙烯醚(nonylphenolethoxylates, NPnEO)佔總產量的80%，其餘基本為辛基酚聚氧乙烯醚(OPnEO)。在環境中，烷基酚主要源於非離子表面活性劑烷基酚聚氧乙烯醚的降解。在自然環境及汙水處理過程中烷基酚聚氧乙烯醚轉化為辛基酚和壬基酚，進入水體、大氣和土壤中。在水體環境中，這些化合物主要被吸附於懸浮顆粒物(礦物、生物碎屑、膠體物質和有機質)中，最終通過物理、化學及生物作用沉積於水體底部，因此，沉積物是烷基酚的主要歸宿，並最終在底棲生物的體內產生積累，同時可以通過食物鏈進入人體從而影響人類的健康。近年來，許多學者開展了對自然水體中烷基酚汙染狀況的調查研究，發現多數河流和湖泊等水體中均有ng/L水平上述物質的汙染。國內對烷基酚的研究是從2000年左右開始的，主要集中於烷基酚類在環境介質中的分布和對生物的影響方面，也有少量對烷基酚在汙水處理廠的處理效率以及壬基酚的降解方面的研究。對水體水生物中烷基酚含量的調查研究相對較少。水產品中烷基酚汙染水平不僅受水體汙染源強度的影響，而且與水生物的生活習性、生物特性等因素緊密相關。因此不同水產品汙染物水平相差也很大，且水產品基質較複雜。如何通過有效地樣品前處理技術和儀器分析技術，建立一種回收率高、重現性好、精確度高的水產品中烷基酚的檢測方法，成為研究的關鍵。烷基酚的儀器檢測技術有氣相色譜、氣相色譜-質譜聯用、、液相色譜-質譜聯用等，具有較好的靈敏度和精確度。通過固相萃取，衍生試劑衍生後實現氣相色譜-火焰離子檢測(GC-FID)和氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)分析檢測。但由於水產品樣品基質複雜，若樣品前處理過程中雜質去除不好，可直接幹擾儀器的測定結果，甚至損壞儀器。目前國內還沒有針對水產品中烷基酚檢測的方法。因此如何高效地從水產品中提取烷基酚並進行淨化，成了水產品中痕量烷基酚分析的一個瓶頸，這是本發明的目的。
發明內容
本發明的目的就是克服現有分析方法的不足，能找到一種快速、準確的對水產品中辛基酚、壬基酚的測定方法，以實現水產品中辛基酚、壬基酚的定量及定性測定。本發明提出了一種水產品中辛基酚、壬基酚的氣相色譜-質譜檢測方法，該方法依次包括以下步驟⑴超聲溶劑萃取、⑵固相萃取富集淨化、⑶衍生、⑷氣相色譜-質譜檢測，各步驟的操作方法如下⑴超聲溶劑萃取稱量I. 0-5. Og勻漿後的水產品加入到樣品瓶中，以丙酮為萃取劑；加塞振蕩混勻lmin，在40KHz超聲波作用下35°C _45°C溫度萃取10 min，然後將萃取樣品離心5 min,轉速5000 rpm,分離出萃取液；⑵固相萃取富集淨化佛羅裡矽土固相萃取柱，I g/6 mL規格，上端填充已經高溫烘過無水硫酸鈉1-2 g，用5mL丙酮潤洗活化固相萃取柱，然後將上述分離出的萃取液注入固相萃取柱中，棄去流出液；再向固相萃取柱分兩次加入色譜純乙酸乙酯進行洗脫，每次5mL,收集洗脫液；⑶衍生洗脫液經氮氣吹乾後，加入O. 1-1 mL丙酮和O. ImL衍生試劑N，O-雙(三甲基矽烷基)三氟乙醯胺(BSTFA)/三甲基氯矽烷(TMCS)體積比99 I振蕩混勻，衍生試劑加入後要保證密封乾燥，60°C -90°C衍生Ih ;衍生後經氮氣吹乾後，正己 烷定容至ImL待氣相色譜質譜檢測；進氣相色譜-質譜檢測前要在室內放置Ih ；⑷氣相色譜-質譜檢測，將衍生並已放置Ih的樣品，經O. 22 μ m的有機濾膜過濾到樣品小瓶中，在已設定的氣相色譜-質譜條件下進行分析，選擇離子掃描檢測，外表法定量。色譜條件為進樣口溫度270°C，離子阱溫200°C，傳輸線溫度150°C，氦氣流速為1.0mL/min,進樣量I μ L,溶劑延遲5min,升溫程序100°C保持2min, 10°C/min升溫至200°C,保持2min，15°C /min升溫至290°C，保持5min，獲得出峰時間適中、峰形尖銳、分離度好的色譜圖，出峰時間辛基酚矽烷化衍生物11. 894min，壬基酚矽烷化衍生物15.950 min，見附圖I ;質譜條件為採用了 4種特徵離子的Σ SIM模式，辛基酚矽烷化衍生物特徵離子m/z 207，見附圖2 ;壬基酚矽烷化衍生物m/z292、179，見附圖3 ;繪製標準工作曲線，以外標法定量，根據峰面積計算辛基酚和壬基酚的濃度。本發明的有益效果本發明在一定的溫度下採用超聲輔助丙酮萃取水產品中的壬基酚和辛集酚，萃取效果好，操作簡單；採用佛羅裡矽土固相萃取柱富集淨化，淨化效果好，有效地降低了萃取液中雜質對氣相色譜-質譜測定過程的幹擾；採用氣相色譜-質譜法進行選擇離子監測，具有較高的靈敏度和精確度；與已有的測試技術相比，本發明在檢測烷基酚過程中不需要昂貴的液相色譜-質譜或其它設備，方法可同時進行定性及定量測定，操作簡單易行，消耗成本低，能夠快速分析水產品中的辛基酚和壬基酚。本發明採用美國瓦裡安公司CP-3800 Saturn 2000氣相色譜-質譜聯用儀，配置瓦裡安CP-8410自動進樣器，使用VF1701毛細管氣相色譜質譜柱(30 mXO. 25 mmXO. 25μπι)實現組分分離。
附圖I : O. 5 μ g/mL標準品溶液的色譜圖；附圖2 :辛基酚的質譜圖；附圖3:壬基酚的質譜圖。
具體實施例方式下面通過實施例對本發明的技術方案作進一步的描述。實施例I草魚中辛基酚和壬基酚的氣相色譜-質譜檢測⑴溶劑超聲萃取準確稱量I. Og用高速組織搗碎機攪碎混勻的草魚樣品，加入到具塞試管中，準確加入10 mL色譜純丙酮；加塞後震蕩Imin ;在溫度35 1下，進行40KHz的超聲波萃取10 min ;然後將萃取樣品進行離心5 min,轉速5000 rpm ;離心後用吸管收集上層萃取液於旋蒸瓶中；⑵固相萃取富集淨化=Florisil固相萃取柱(型號為I g/6 mL)上端填充Ig無水硫酸鈉進行脫水，先用5 mL丙酮潤洗活化固相萃取柱，然後將萃取液注入的固相萃取柱中，液體自然流出，棄去流出液；再向固相萃取柱中分兩次加入色譜純乙酸乙酯進行洗脫，每次5mL,收集洗脫液於15 mL試管中；⑶衍生洗脫液經氮氣吹乾後，加入O. I mL丙酮和O. ImL衍生試劑N，O-雙(三甲基矽烷基)三氟乙醯胺(BSTFA)/三甲基氯矽烷(TMCS)體積比99 I振蕩混勻，用60 V在恆溫氣浴振蕩器中衍生反應lh，衍生液經氮氣吹乾後，正己烷定容至l.OmL，進氣相色譜-質譜檢測前要在室內放置Ih ；
⑷氣相色譜-質譜檢測取定容並已放置Ih衍生液，注入到ImL針具中，經孔徑O. 22 μ m的有機濾膜過濾到樣品小瓶中，進行氣相色譜-質譜條件檢測。色譜條件為進樣口溫度270°C，離子阱溫200°C，傳輸線溫度150°C，氦氣流速為I. O mL/min,進樣量I μ L，溶劑延遲5min,升溫程序100°C保持2min, 10°C /min升溫至200°C,保持2min, 15°C /min升溫至290°C，保持5min ;氣相色譜-質譜檢測步驟中採用選擇離子監測模式監測，採用了4種特徵離子的Σ SIM模式，辛基酚矽烷化衍生物特徵離子m/z 207 ;壬基酚矽烷化衍生物m/z292、179 ;繪製標準工作曲線，以外標法定量，根據峰面積計算辛基酚和壬基酚的濃度；(5)標準曲線繪製用色譜純丙酮配製濃度為O. 5 μ g/mL、I. O μ g/mL、2. 0 μ g/mL、5. 0 μ g/mL、10 μ g/mL的辛基酚和壬基酚混合標準溶液，用移液管分別取上述各溶液0. I mL與試管中，然後按照上述⑶、⑷步驟的要求進行操作，根據加入的烷基酚濃度和峰面積的對應關係繪製標準曲線；(6)方法回收率的測定分別按O. 05 μ g/g、0. I μ g/g、0. 2 μ g/g、0. 5 μ g/g、I. 0 μ g/g 的濃度在草魚樣品中添加辛基酚和壬基酚的混合標準溶液，每個添加水平分別做六個平行樣；按步驟⑴-⑷進行氣相色譜-質譜檢測，並與上述得到的標準曲線比較，通過換算最終得到待測草魚樣品中辛基酚和壬基酚的濃度。方法回收率在75-96%，RSD ( 15%。實施例2草魚中辛基酚和壬基酚的氣相色譜-質譜檢測⑴溶劑超聲萃取準確稱量3. O g用高速組織搗碎機攪碎混勻的草魚樣品，加入到具塞試管中，準確加入10 HiL色譜純丙酮；加塞後震蕩Imin ;在溫度40 1下，進行40KHz的超聲波萃取10 min ;然後將萃取樣品進行離心5 min,轉速5000 rpm ;離心後用吸管收集上層萃取液於旋蒸瓶中；⑵固相萃取富集淨化Florisil固相萃取柱,型號為I g/6 mL,上端填充1.5g無水硫酸鈉進行脫水，先用5 mL丙酮潤洗活化固相萃取柱，然後將萃取液注入固相萃取柱中，液體自然流出，棄去流出液；再向固相萃取柱中分兩次加入色譜純乙酸乙酯進行洗脫，每次5mL,收集洗脫液於15 mL試管中；⑶衍生洗脫液經氮氣吹乾後，加入O. 5 mL丙酮和O. ImL衍生試劑N，O-雙(三甲基矽烷基)三氟乙醯胺(BSTFA)/三甲基氯矽烷(TMCS)體積比99 I振蕩混勻，在75 V烘箱內衍生反應lh，衍生液經氮氣吹乾後，正己烷定容至I. O mL，進氣相色譜-質譜檢測前要在室內放置Ih ；⑷氣相色譜-質譜檢測取定容並已放置Ih的衍生液，注入到ImL針具中，經孔徑O. 22 μ m的有機濾膜過濾到樣品小瓶中，進行氣相色譜-質譜條件檢測。色譜條件為進樣口溫度270°C，離子阱溫200°C，傳輸線溫度150°C，氦氣流速為I. O mL/min,進樣量I μ L，溶劑延遲5min,升溫程序100°C保持2min, 10°C /min升溫至200°C,保持2min, 15°C /min升溫至290°C，保持5min ;氣相色譜-質譜檢測步驟中採用選擇離子監測模式監測，採用了4種特徵離子的Σ SIM模式，辛基酚矽烷化衍生物特徵離子m/z 207 ;壬基酚矽烷化衍生物m/z292、179 ;繪製標準工作曲線，以外標法定量，根據峰面積計算辛基酚和壬基酚的濃度；(5)標準曲線繪製用色譜純丙酮配製濃度為O. 5 μ g/mL、I. O μ g/mL、2. 0 μ g/mL、5. 0 μ g/mL、10 μ g/mL的辛基酚和壬基酚混合標準溶液，用移液管分別取上述各溶液O. I mL與試管中，然後按照上述⑶、⑷步驟的要求進行操作，根據加入的烷基酚濃度和峰面積的對應關係繪製標準 曲線；(6)方法回收率的測定分別按O. 05 μ g/g、0. I μ g/g、0. 2 μ g/g、0. 5 μ g/g、I. 0 μ g/g 的濃度在草魚樣品
中添加辛基酚和壬基酚的混合標準溶液，每個添加水平分別做六個平行樣；按步驟⑴-⑷進行氣相色譜-質譜檢測，並與上述得到的標準曲線比較，通過換算最終得到待測草魚樣品中辛基酚和壬基酚的濃度。方法回收率在80-105%，RSD ( 15%。實施例3草魚中辛基酚和壬基酚的氣相色譜-質譜檢測⑴溶劑超聲萃取準確稱量5. O g用高速組織搗碎機攪碎混勻的草魚樣品，加入到具塞試管中，準確加入10 HiL色譜純丙酮；加塞後震蕩Imin ;在溫度45 1下，進行40KHz的超聲波萃取10 min ;然後將萃取樣品進行離心5 min,轉速5000 rpm ;離心後用吸管收集上層萃取液於旋蒸瓶中；⑵固相萃取富集淨化Florisil固相萃取柱上端填充2g無水硫酸鈉進行脫水，先用5 mL丙酮潤洗活化固相萃取柱,然後將萃取液注入I g/6 mL的固相萃取柱中，液體自然流出，棄去流出液；再向固相萃取柱中分兩次加入色譜純乙酸乙酯進行洗脫，每次5mL，收集洗脫液於15 mL試管中；⑶衍生洗脫液經氮氣吹乾後，加入I. O mL丙酮和O. ImL衍生試劑N，O-雙(三甲基矽烷基)三氟乙醯胺(BSTFA)/三甲基氯矽烷(TMCS)體積比99 I振蕩混勻，用90°C衍生反應lh，衍生液經氮氣吹乾後，正己烷定容至lmL，進氣相色譜-質譜檢測前要在室內放置Ih ；⑷氣相色譜-質譜檢測取定容並已放置Ih的衍生液，注入到ImL針具中，經孔徑O. 22 μ m的有機濾膜過濾到樣品小瓶中，進行氣相色譜-質譜條件檢測。色譜條件為進樣口溫度270°C，離子阱溫200°C，傳輸線溫度150°C，氦氣流速為I. O mL/min,進樣量I μ L，溶劑延遲5min,升溫程序100°C保持2min, 10°C /min升溫至200°C,保持2min, 15°C /min升溫至290°C，保持5min ;氣相色譜-質譜檢測步驟中採用選擇離子監測模式監測，採用了 4種特徵離子的Σ SM模式，辛基酚矽烷化衍生物特徵離子m/z 207 ;壬基酚矽烷化衍生物m/z292、179 ;繪製標準工作曲線，以外標法定量，根據峰面積計算辛基酚和壬基酚的濃度；
(5)標準曲線繪製用色譜純丙酮配製濃度為O. 5 μ g/mL、I. O μ g/mL、2. 0 μ g/mL、5. 0 μ g/mL、10 μ g/mL的辛基酚和壬基酚混合標準溶液，用移液管分別取上述各溶液0. I mL與試管中，然後按照上述⑶、⑷ 步驟的要求進行操作，根據加入的烷基酚濃度和峰面積的對應關係繪製標準曲線；(6)方法回收率的測定分別按O. 05 μ g/g、0. I μ g/g、0. 2 μ g/g、0. 5 μ g/g、I. 0 μ g/g 的濃度在草魚樣品
中添加辛基酚和壬基酚的混合標準溶液，每個添加水平分別做六個平行樣；按步驟⑴-⑷進行氣相色譜-質譜檢測，並與上述得到的標準曲線比較，通過換算最終得到待測草魚樣品中辛基酚和壬基酚的濃度。方法回收率在75-110%，RSD ( 15%。上述實施例是對本發明的說明，不是對本發明的限定，任何對本發明簡單變換後的方案均屬於本發明的保護範圍。
權利要求
1.一種水產品中辛基酚、壬基酚的氣相色譜-質譜檢測方法，其特徵在於該方法包括①超聲溶劑萃取、②固相萃取富集浄化、③衍生、④氣相色譜-質譜檢測，其中 ①所述的超聲溶劑萃取，按下面步驟操作稱量I.0-5. Og勻漿後的水產品加入到樣品瓶中，以丙酮為萃取劑；加塞振蕩混勻lmin，在40KHz超聲波作用下35°C _45°C溫度萃取10min,然後將萃取樣品離心5 min,轉速5000 rpm,分離出萃取液； ②所述的固相萃取富集浄化，按下面步驟操作佛羅裡矽土固相萃取柱，Ig/6 mL規格，上端填充已經高溫烘過無水硫酸鈉1-2 g，用丙酮潤洗活化固相萃取柱，然後將上述分離出的萃取液注入固相萃取柱中，棄去流出液；再向固相萃取柱分兩次加入色譜純こ酸こ酯進行洗脫，毎次5mL，收集洗脫液； ③所述的衍生，按下面步驟操作洗脫液經氮氣吹乾後，加入O.1-1 mL丙酮和O. ImL衍生試劑N，O-雙(三甲基矽烷基)三氟こ醯胺(BSTFA)/三甲基氯矽烷(TMCS)體積比99 I振蕩混勻，60°C -90°C衍生，衍生反應過程要保證密封乾燥；衍生液經氮氣吹乾後，正己烷定容至ImL ;進氣相色譜-質譜檢測前要在室內放置Ih ； ④所述的氣相色譜-質譜檢測，按下面步驟操作取定容並已放置Ih的衍生液，經O.22 μ m的有機濾膜過濾到樣品小瓶中，進行氣相色譜-質譜檢測。色譜條件為進樣ロ溫度270°C，離子阱溫200°C，傳輸線溫度150°C，氦氣流速為I. O mL/min,進樣量I μ L，溶劑延遲5min,升溫程序100°C保持2min, 10°C /min升溫至200°C,保持2min, 15°C /min升溫至290°C，保持5min。質譜條件採用了 4種特徵離子的Σ SM模式，辛基酚矽烷化衍生物特徵離子m/z207 ;壬基酚矽烷化衍生物m/z292、179 ;繪製標準工作曲線，以外標法定量，根據峰面積計算辛基酚和壬基酚的濃度。
全文摘要
本發明涉及一種水產品中辛基酚和壬基酚的氣相色譜-串聯質譜檢測技術，屬於水產品質量安全檢測技術領域。以丙酮為萃取劑進行超聲萃取提取水產品中的辛基酚和壬基酚，提取物經過固相萃取去除提取物中的幹擾物，洗脫液經氮氣吹乾後，用丙酮和衍生化試劑N,O-雙(三甲基矽烷基)三氟乙醯胺(BSTFA)/三甲基氯矽烷(TMCS)體積比99∶1衍生，利用氣相色譜質譜進行選擇離子掃描檢測，外標法定量。該方法操作方便，重現性較好，定性準確且回收率較高，能夠快速分析水產品中的辛基酚和壬基酚。
文檔編號G01N30/02GK102841161SQ20121036969
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月27日 優先權日2012年9月27日
發明者孫秀梅, 郭遠明, 胡紅美, 鍾志, 金衍健, 丁躍平, 陳朋, 何依娜 申請人:浙江省海洋水產研究所