BMP9在製備延緩肝纖維化藥物中的應用的製作方法

2023-05-30 04:11:36

本發明涉及藥物製備領域，尤其涉及bmp9在製備延緩肝纖維化藥物中的應用。

背景技術：

肝纖維化是多種原因引起的慢性肝損害所致的病理改變，表現為肝內細胞外間質成分過度異常地沉積，並影響肝臟的功能，是慢性肝病發展到肝硬化乃至肝癌必經之階段。肝纖維化的治療，主要通過抑制炎症或脂質過氧化，或者抑制肝星狀細胞的增生活化，以及促進膠原降解。但是現有技術中用於延緩肝纖維化的藥物種類稀少，研發此類藥物具有十分重要的臨床指導及科學意義。

因此，在現有的基礎上，研發一種新的延緩肝纖維化的藥物是十分具有實用價值的。

技術實現要素：

為了克服上述現有技術的不足，本發明提供了一種bmp9在製備延緩肝纖維化藥物中的應用，為製備新的延緩肝纖維化的藥物開拓了新的領域。

本發明提供的bmp9在製備延緩肝纖維化藥物中的應用，所述的bmp9為腺病毒shbmp9或bmp9中和抗體。

較佳地，所述的腺病毒shbmp9的序列為：cccttctttgttgtcttctccaatg。

與現有技術相比，本發明的有益效果如下：

bmp9是由肝臟分泌的一種蛋白因子，屬於tgf-β超家族，bmp9用於肝纖維化的治療從未見報導，本發明採用bmp9製備的藥物能在一定程度上延緩肝纖維化的進程，bmp9作為有效成分應用於開發治療和防治肝纖維化的藥物，十分具有實用價值，開拓了一個新的藥物研發的領域。

附圖說明：

圖1為本發明實施例一中小鼠肝纖維化造模示意圖。

圖2a為本發明實施例一中肝纖造模後，小鼠肝臟massion和siriusred染色的代表性圖。

圖2b為本發明實施例一中massion染色的統計結果圖。

圖2c為本發明實施例一中siriusred染色的統計結果圖。

圖2d為本發明實施例一中shbmp9腺病毒注射的小鼠肝臟中bmp9的蛋白表達量圖。

圖3為本發明實施例二中小鼠肝纖維化造模示意圖。

圖4a本發明實施例二中顯示出肝纖造模後進行抗體中和實驗，小鼠肝臟massion和siriusred染色的代表性圖。

圖4b為本發明實施例二中massion染色的統計結果圖。

圖4c為本發明實施例二中siriusred染色的統計結果圖。

圖4d為本發明實施例二中bmp9中和抗體注射的小鼠肝臟中bmp9的蛋白表達量圖。

具體實施方式

下面結合具體的實施例對本發明作進一步地說明，以更好地理解本發明。

實施例一：

腺病毒shbmp9可應用於減弱ccl4誘導的小鼠肝纖維化的藥物實驗

實驗材料：6-8周的c57小鼠24隻，分為oli,ccl4+gfp，ccl4+shbmp9三處理組，每個處理組8隻小鼠。四氯化碳(ccl4)、橄欖油、手術剪、注射器、縫線.shbmp9腺病毒、gfp腺病毒對照，shbmp9的序列為：cccttctttgttgtcttctccaatg.

oli組：給小鼠腹腔注射橄欖油50ul/次，每周3次，總共2個月.心臟採血。

ccl4+gfp組：給小鼠腹腔注射10％ccl4(橄欖油稀釋)50ul/次，每周3次，連續4周，從第5周開始，同時尾靜脈注射2*109pfu/次的gfp腺病毒，每周3次，連續共注射4周，第8周時處死小鼠，取血，分離小鼠肝臟。

ccl4+shbmp9組：給小鼠腹腔注射10％ccl4(橄欖油稀釋)50ul/次，每周3次，連續4周，從第5周開始，同時尾靜脈注射2*10pfu/次的shbmp9腺病毒，每周3次，連續共注射4周，第8周時處死小鼠，取血，分離小鼠肝臟，結果如圖1所示，圖1顯示出小鼠肝纖造模和shbmp9腺病毒尾靜脈注射的過程。

massion染色和siriusred染色顯示小鼠肝臟中的膠原含量，並進行面積統計，westernblot檢測a-sma和bmp9的表達，實驗結果證明shbmp9能夠顯著減弱肝纖維化的程度。結果如圖2所示，圖2a顯示出肝纖造模後，小鼠肝臟massion和siriusred染色的代表性圖片，圖2b為massion染色的統計結果，shbmp9能夠顯著降低小鼠肝臟中的膠原含量，圖2c顯示出siriusred染色的統計結果，shbmp9顯著降低了肝臟中膠原沉積.圖2d顯示shbmp9腺病毒注射的小鼠肝臟中，bmp9的蛋白表達量顯著降低，同時肌動蛋白a-sma表達下調，說明小鼠肝纖得到了緩解。

實施例二：

bmp9中和抗體能夠作為有效成分應用於降低ccl4誘導的肝纖維化的藥物中。

實驗材料：6-8周的c57小鼠24隻，分為oli,ccl4+igg，ccl4+bmp9ab處理組，每個處理組8隻小鼠。

四氯化碳(ccl4)、橄欖油、手術剪、縫線.，bmp9中和抗體購自r&dsystem(catlog：mab3209-500)

實驗材料：6-8周的c57小鼠24隻，分為oli,ccl4+igg，ccl4+bmp9ab三處理組，每個處理組8隻小鼠。四氯化碳(ccl4)、橄欖油、手術剪、注射器、縫線.

oli組：給小鼠腹腔注射橄欖油50ul/次，每周3次，總共2個月.心臟採血。

ccl4+igg組：給小鼠腹腔注射10％ccl4(橄欖油稀釋)50ul/次，每周3次，連續6周，從第7周開始，同時腹腔注射50ug/次的igg，每周3次，連續共注射2周，第8周時處死小鼠，取血，分離小鼠肝臟。

ccl4+bmp9ab組：給小鼠腹腔注射10％ccl4(橄欖油稀釋)50ul/次，每周3次，連續6周，從第7周開始，同時腹腔注射50ug/次的bmp9ab，每周3次，連續共注射2周，第8周時處死小鼠，取血，分離小鼠肝臟，造模圖如圖3所示。

massion染色和siriusred染色顯示小鼠肝臟中的膠原含量，並進行面積統計，westernblot檢測a-sma和bmp9的表達，實驗結果證明bmp9中和抗體能夠作為有效成分於顯著減弱肝纖維化的程度，可應用於結果如圖4所示，圖4a顯示出肝纖造模後進行抗體中和實驗，小鼠肝臟massion和siriusred染色的代表性圖片，圖4b為massion染色的統計結果，bmp9中和抗體能夠顯著降低小鼠肝臟中的膠原含量，圖4c顯示出siriusred染色的統計結果，bmp9中和抗體顯著降低了肝臟中膠原沉積.圖4d顯示bmp9中和抗體注射的小鼠肝臟中，bmp9的蛋白表達量顯著降低，同時肌動蛋白a-sma表達下調，說明小鼠肝纖得到了緩解。

降低肝纖維化的藥物中，與現有技術相比，本發明的有益效果如下：

bmp9是由肝臟分泌的一種蛋白因子，屬於tgf-β超家族，bmp9用於肝纖維化的治療從未見報導，本發明採用bmp9製備的藥物能在一定程度上延緩肝纖維化的進程，bmp9作為有效成分應用於開發治療和防治肝纖維化的藥物，十分具有實用價值，開拓了一個新的藥物研發的領域。

以上對本發明的具體實施例進行了詳細描述，但其只是作為範例，本發明並不限制於以上描述的具體實施例。對於本領域技術人員而言，任何對本發明進行的等同修改和替代也都在本發明的範疇之中。因此，在不脫離本發明的精神和範圍下所作的均等變換和修改，都應涵蓋在本發明的範圍內。