一種對動物藥材中纖溶活性成分定量的方法

2023-06-06 19:47:36 1

專利名稱：一種對動物藥材中纖溶活性成分定量的方法
技術領域：
本發明涉及對螞蟻、土鱉蟲等動物藥材中纖溶活性成分定量的方法。
背景技術：
纖溶系統是指纖溶酶原經特異性激活物作用轉化為纖溶酶，導致體內纖維蛋白不斷溶解的反應體系，主要包括纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原激活物及纖溶酶原激活物抑制劑。肝纖維化是肝臟對各種因素所致的慢性損傷的一種修復反應，其特徵是細胞外基質(ECM)在肝內過度沉積，而ECM的降解受多種因素的調控，近年有研究顯示纖溶酶原激活系統可通過調節基質金屬蛋白酶(MMPs)的活性參與ECM的降解過程。纖溶酶可以直接降解纖維蛋白原和纖維蛋白，還可以降解多種ECM成分，包括纖維連接蛋白、層連蛋白等。此外，纖溶酶又是基質金屬蛋白酶(MMPs)活化所必需的，MMPs是最重要的一類降解ECM的蛋白酶類。肝纖維化屬中醫「癥結痞塊」範疇，中醫認為肝血瘀阻是基本病機，用藥以活血化瘀為主的治療原則；現代研究顯示纖溶酶原激活系統與肝纖維化有直接關係，活血化瘀中藥能明顯影響機體纖溶系統，有抗凝血和促進纖維蛋白溶解的功效。因此我們選擇中藥中動物藥材提取純化具有纖溶活性的成分，研究其在抗肝纖維化的藥物領域的開發。現代中藥一直無法準確提供動物藥(如螞蟻、土鱉蟲)的成品製劑中的含量測定方法，因此極大的限制了動物藥的使用，本專利首次將體外測定蛋白活性方法引入藥物含量測定過程中，為同類型製劑的質量研究、生產控制提供了新的手段。

發明內容
針對現有技術中存在的問題，本發明提供了一種對螞蟻、土鱉蟲等動物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其方法步驟:
1、取牛血纖維蛋白原適量，研細，精密稱定，用硼砂緩衝液製成每Iml含2mg的溶液，即得；2、纖維蛋白標準板的製備:取已消毒的培養皿，分別加入纖維蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液(用上述硼砂緩衝液製成每Iml含牛凝血酶40單位)0.5ml，混勻，室溫靜置10分鐘，即成纖維蛋白標準板；3、對照品溶液的製備:取尿激酶對照品適量，精密稱定，用無菌水製成每Iml含8U的溶液，作為對照品溶液；
4、供試品溶液的製備:取本品內容物適量，精密稱定，用無菌水製成每Iml含30mg的溶液，振搖20分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液；
5、測定法:取纖維蛋白板，分別吸取對照品、供試品溶液點於板上，每點10iU，置37°C電熱恆溫箱中 放置18小時，取出，分別測出每個點溶斑的長徑和短徑，再根據融圈面積計算纖溶活性成分的量。本發明有益效果:提供了一種新的對螞蟻、土鱉蟲等動物藥材中纖溶活性成分定量的方法，工藝簡易，效果顯著。
具體實施例方式實施例1:
取牛血纖維蛋白原適量，研細，精密稱定，用硼砂緩衝液(取四硼酸鈉32.42g和氯化鈉5.84g，加蒸餾水500ml，加熱溶解，用7mol/L鹽酸調節pH值至7.8)製成每Iml含2mg的溶液，即得。取已消毒的培養皿，加入纖維蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液(用上述硼砂緩衝液製成每Iml含牛凝血酶40單位)0.5ml，混勻，室溫靜置10分鐘，即成纖維蛋白標準板。取尿激酶對照品適量，精密稱定，用無菌水製成每Iml含8U的溶液，作為對照品溶液。取本品內容物適量，精密稱定，用無菌水製成每Iml含30mg的溶液，振搖20分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液。取纖維蛋白板I只，分別吸取對照品、供試品溶液點於板上，每點lOiil，置37°C電熱恆溫箱中放置18小時，取出，分別測出每個點溶斑的長徑和短徑，再根據融圈面積計算纖溶活性成分的量。雖然本發明已以較佳實施例公開如上，但實施例並不是用來限定本發明，任何熟悉此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，自當可作各種變化或潤飾，同樣屬於本發明之保護範圍。因此本 發明的保護範圍應當以本申請的權利要求所界定的為準。
權利要求
1.一種對動物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特徵在於: 以尿激酶為對照，確定螞蟻、土鱉蟲等動物藥材中纖溶活性成分含量。
2.根據權利要求1所述的對動物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特徵在於: 其方法步驟: 取牛血纖維蛋白原適量，研細，精密稱定，用硼砂緩衝液製成每Iml含2mg的溶液，即得; 製備纖維蛋白標準板； 製備對照品溶液； 製備供試品溶液； 測定法:取纖維蛋白板，分別吸取對照品、供試品溶液點於板上，每點IOiU,置37°C電熱恆溫箱中放置18小時，取出，分別測出每個點溶斑的長徑和短徑，再根據融圈面積計算纖溶活性成分的量。
3.根據權利要求2所述的對動物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特徵在於:所述纖維蛋白標準板的製備:取已消毒的培養皿，分別加入纖維蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液(用上述硼砂緩衝液製成每Iml含牛凝血酶40單位)0.5ml，混勻，室溫靜置10分鐘，即成纖維蛋白標準板。
4.根據權利要求3所述的對動物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特徵在於:所述對照品溶液的製備:取尿激酶對 照品適量，精密稱定，用無菌水製成每Iml含8U的溶液，作為對照品溶液。
5.根據權利要求4所述的對動物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特徵在於:所述供試品溶液的製備:取本品內容物適量，精密稱定，用無菌水製成每Iml含30mg的溶液，振搖20分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液。
6.根據權利要求1、2、3、4或者5所述的對動物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特徵在於:所述硼砂緩衝液，是取四硼酸鈉和氯化鈉，加蒸餾水，加熱溶解，用鹽酸調節PH值至 7.8。
全文摘要
一種對動物藥材中纖溶活性成分定量的方法，1取牛血纖維蛋白原適量，研細，精密稱定，用硼砂緩衝液製成每1ml含2mg的溶液；2取已消毒的培養皿，分別加入纖維蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液0.5ml，混勻，室溫靜置10分鐘；3取尿激酶對照品適量，精密稱定，用無菌水製成每1ml含8U的溶液，作為對照品溶液；4取本品內容物適量，精密稱定，用無菌水製成每1ml含30mg的溶液，振搖20分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液；5取纖維蛋白板，分別吸取對照品、供試品溶液點於板上，每點10μl，置37℃電熱恆溫箱中放置18小時，取出，分別測出每個點溶斑的長徑和短徑，再根據融圈面積計算纖溶活性成分的量。
文檔編號C12Q1/56GK103243150SQ20121003246
公開日2013年8月14日 申請日期2012年2月14日 優先權日2012年2月14日
發明者樂智勇, 夏培元, 劉任, 劉麗玲, 辛小娜, 張兵兵 申請人:江蘇仁壽藥業有限公司