分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱的製作方法
2023-06-07 12:46:01
專利名稱：分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及瘧原蟲子孢子的分離技術，具體涉及一種分離瘧原蟲子孢子的專用實驗裝置。
背景技術：
瘧原蟲(Plasmodium)寄生於人及多種哺乳動物，目前已知有130餘種。人體瘧原蟲的生活史，需要人和雌性按蚊做宿主，瘧原蟲在人體內先後經肝細胞和紅細胞內發育。在肝細胞內為裂體增殖，稱紅細胞外期(紅外期)；在紅細胞內發育包括紅細胞內裂體增殖期 (紅內期)和配子體形成的有性期開始。蚊唾液腺內含有瘧原蟲子孢子的雌性按蚊刺吸人血時，感染性子孢子隨蚊的唾液進入人體，經血液循環約30分鐘子孢子侵入肝細胞導致瘧疾感染。蟲體經紅外期、紅內期發育致瘧疾發病。子孢子入侵肝細胞是由於子孢子表面有一種蛋白(環子孢子蛋白，CSP)能與肝細胞表面的瘧原蟲受體相結合，使兩者接觸。然後，子孢子釋放由棒狀體內貯存的分泌物，作用於接觸的肝細胞膜，而主動侵入肝細胞。雌性按蚊的一對唾液腺內可含有1000 10000個子孢子，瘧原蟲子孢子呈梭形，長約10 15 μ m，寬約1 μ m。在瘧疾實驗研究中，有時需大量有感染力的子孢子，但感染按蚊分離和純化子孢子較困難，尤其是沒有一種分離瘧原蟲子孢子的專用實驗裝置，使分離更加困難。
發明內容有鑑於此，本實用新型的目的在於提供一種分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱，該纖維素柱作為分離瘧原蟲子孢子的專用實驗裝置，其分離效果好，適用於大規模分離。本實用新型的分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱，包括底部開孔的中空柱體，柱體內從下至上依次填充有玻璃纖維層和DE 52纖維素層。進一步，所述柱體為圓柱形柱體，所述孔設置於柱體底部中心；進一步，所述DE 52纖維素層包括緩衝液和經過緩衝液充分浸泡的DE 52纖維素。本實用新型的有益效果在於本實用新型是一種純化分離雌性按蚊體內瘧原蟲子孢子的專用纖維素柱，使用該纖維素柱的子孢子分離率達70 80%，並保持瘧原蟲子孢子感染活力和抗原性，可用於實驗性研究。
為了使本實用新型的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本實用新型作進一步的詳細描述，其中圖1為本實用新型的結構示意圖；圖2純化的約氏瘧原蟲的唾液腺子孢子染色圖，吉氏染色100X ；圖3相差顯微鏡觀察純化的約氏瘧原蟲的唾液腺子孢子，60 X。
具體實施方式
圖1為本實用的結構示意圖；如圖所示，本實用新型的分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱，包括底部開孔4的中空柱體1，柱體1內從下至上依次填充有玻璃纖維層2和DE 52 纖維素層3。本實施例中，所述柱體1為圓柱形柱體，所述孔4設置於柱體1底部中心。本實施例中，所述DE 52纖維素層3包括緩衝液和經過緩衝液充分浸泡的DE 52
纖維素。本實用新型的分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱的製備方法1、配製緩衝液，每升緩衝液含有8. Sg羥甲基氨基甲烷、5g NaH2PO4. H20、5gNaCl和 18g葡萄糖，用HCl調節pH至8. 2，離子強度0. 121 ；2、將預先溶脹好的DE 52纖維素在緩衝液中充分浸泡，使DE 52纖維素的pH和離子強度與緩衝液平衡；3、選用玻璃或塑料製造的底部開有中心孔的中空圓柱形柱體，在柱體底部鋪上一層片狀的玻璃纖維；4、將平衡好的DE 52纖維素和緩衝液一起灌裝入柱體內，使DE 52纖維素自然沉降，柱床中不得留有氣泡；5、裝好平衡後的纖維素柱貯存在_30°C中，使用前再使用緩衝液淋洗，直至達到充分平衡方可使用。使用本實用新型的纖維素柱分離瘧原蟲子孢子的方法A、預處理將含有瘧原蟲子孢子的按蚊勻漿，對勻漿液離心，收集上清液，去除大塊蚊組織碎片，獲得含瘧原蟲子孢子勻漿液，並用細胞計數器進行瘧原蟲子孢子計數；B、分離瘧原蟲子孢子將步驟A所得子孢子勻漿液與緩衝液以體積比1:1-3的比例混合，獲得子孢子勻漿稀釋液，將所述子孢子勻漿稀釋液在重力作用下過本實用新型的纖維素柱，流速為5-7 mL/min，收集洗脫液5，所述洗脫液5中含有瘧原蟲子孢子，如圖2和圖3所示。最後說明的是，以上實施例僅用以說明本實用新型的技術方案而非限制，儘管通過參照本實用新型的優選實施例已經對本實用新型進行了描述，但本領域的普通技術人員應當理解，可以在形式上和細節上對其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權利要求書所限定的本實用新型的精神和範圍。
權利要求1.一種分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱，其特徵在於包括底部開孔(4)的中空柱體 (1)，柱體(1)內從下至上依次填充有玻璃纖維層(2)和DE 52纖維素層(3)。
2.根據權利要求1所述的分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱，其特徵在於所述柱體(1) 為圓柱形柱體，所述孔(4)設置於柱體(1)底部中心。
3.根據權利要求2所述的分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱，其特徵在於所述DE52 纖維素層(3)包括緩衝液和經過緩衝液充分浸泡的DE 52纖維素。
專利摘要本實用新型公開了一種分離瘧原蟲子孢子專用纖維素柱，包括底部開孔的中空柱體，柱體內從下至上依次填充有玻璃纖維層和DE52纖維素層；本實用新型是一種純化分離雌性按蚊體內瘧原蟲子孢子的專用纖維素柱，使用該纖維素柱的子孢子分離率達70～80%，並保持瘧原蟲子孢子感染活力和抗原性，可用於實驗性研究。
文檔編號C12M1/00GK202022916SQ2011200488
公開日2011年11月2日 申請日期2011年2月28日 優先權日2011年2月28日
發明者張錫林, 王利芳 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學