一種降鈣素微球的製備方法

2023-06-07 11:51:51

專利名稱：一種降鈣素微球的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種緩釋微球及其注射劑的製備方法，特別涉及一種注射用降鈣素緩釋微球及其注射劑的製備方法。
背景技術：
降鈣素(CT)是1961年發現的第二個調節血鈣濃度的多肽激素，由甲狀腺內的濾泡旁細胞(簡稱C細胞)分泌。降鈣素是由32個胺基酸組成的多肽，具有1～7個二硫鏈，在羧基末端為脯氨醯氨基。當血鈣濃度高時，可刺激降鈣素分泌增加而降低血鈣；血鈣濃度低於正常值時，可刺激甲狀旁腺素分泌增加，並反饋性地抑制降鈣素的分泌而使血鈣升高。降鈣素與甲狀旁腺素這兩種激素相互協調與制約，共同維持血鈣的平衡狀態。據文獻報導，降鈣素可用於癌症伴骨轉移、甲狀腺和甲狀旁腺功能亢進，致使的骨分解加速而引起的高血鈣症，具有顯著的降血鈣作用。

發明內容
本發明的目的是提供一種注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，本發明的目的還在於提供一種降鈣素緩釋微球注射劑的製備方法。
本發明目的是通過如下技術方案之一實現一種注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，該方法包括如下步驟注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球注射劑的載藥量在0.01％～10％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶1～100；內核相由水相和有機相構成，其中水相(W1)中含5～40％的醫用明膠；有機相(O)為二氯甲烷，含5～60％的丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)。
一種注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，該方法包括如下步驟注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在0.01％～10％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶1～100；內核相由水相和有機相(O)構成，其中水相(W1)為含5～40％的醫用明膠水溶液，有機相(O)為含5～60％丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相(O)的比例為1∶3～20；第三水相(W2)為含0.1～10％的聚乙烯醇的水溶液；上述原料按照常規方法製成緩釋微球。
上述緩釋微球的優選載藥量為0.1％～1％、0.02％～0.05％、5％～9％、0.5％或2％，7％，0.04％。上述緩釋微球的內核相與第三水相比例優選1∶10、1∶30、1∶50、1∶70或1∶90。上述緩釋微球的水相(W1)優選6％、10％，20％或30％。上述緩釋微球的有機相(O)優選10％、20％、30％、40％或50％。上述緩釋微球的內核水相與有機相(O)的比例優選1∶5、1∶10或1∶15。上述緩釋微球的第三水相(W2)優選0.2％、2％、5％，7％或9％。
上述緩釋微球的粒度分布在0.001～200微米之間，優選0.009-0.2，0.9-2，10～50，70～100或120～180微米，二氯甲烷殘留量＜0.06％。上述丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的比例範圍在90/10～10/90之間，優選80/15、65/35或75/25，共聚物的平均分子量在10000～300000之間，優選20000、100000或200000。
注射用降鈣素緩釋微球也可以由如下方法製成將0.01-0.04重量份降鈣素、0.5-3重量份明膠溶解在5體積份注射用水中，製成水溶液，作為水相(W1)；將5重量份丙交脂-乙交脂共聚物溶解在20-25體積份二氯甲烷中，作為有機相(O)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化1-5分鐘，將有機相(O)和水相混合均勻製成W1/O相，將15重量份聚乙烯醇溶解於500體積份注射用水中，製成水溶液，作為第三水相(W2)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化2-10分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集緩釋微球。
注射用降鈣素緩釋微球優選如下方法製成將0.02重量份降鈣素或鮭魚降鈣素、2重量份明膠溶解在5體積份注射用水中，製成水溶液，作為水相(W1)；將5重量份丙交脂-乙交脂共聚物溶解在20體積份二氯甲烷中，作為有機相(O)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化2分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15克聚乙烯醇溶解於500體積份注射用水中，製成水溶液，作為第三水相(W2)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集緩釋微球；注射用降鈣素緩釋微球還優選如下方法製成將0.03重量份降鈣素或鮭魚降鈣素、1重量份明膠溶解在5體積份注射用水中，製成水溶液，作為水相(W1)；將5重量份丙交脂-乙交脂共聚物溶解在25體積份二氯甲烷中，作為有機相(O)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15重量份聚乙烯醇溶解於500體積份注射用水中，製成水溶液，作為第三水相(W2)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化6分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集緩釋微球。
上述注射用降鈣素緩釋微球方法中，注射用降鈣素緩釋微球可以用水洗滌0-5次，每次20體積份，加入1-5％甘露醇水溶液(優選3％或5％甘露醇水溶液)20體積份重新分散，經冷凍乾燥(-40℃，15小時)後，分裝，即得降鈣素緩釋微球凍乾粉針。
上述注射用降鈣素緩釋微球方法中，丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的比例範圍在90/10～10/90之間，優選80/15、65/35或75/25。共聚物的平均分子量在10000～300000之間，優選20000、100000或200000。
上述注射用降鈣素緩釋微球方法中，聚乙烯醇優選聚乙烯醇-1788(PVA-1788)或聚乙烯醇-124(PVA-124)。
上述重量份與體積份的關係是克與毫升的關係。
本發明所製成的注射用降鈣素緩釋微球表面光滑或有少量小孔；形成緩釋微球的產率＞80％；跨距在1～20之間，最大粒徑＜200微米；包封率＞80％，二氯甲烷殘留量＜0.06％；經體外釋放度試驗測試表明在開始0.5小時內的釋量＜40％，微球的體外釋放時間為10～120天。


圖1鮭魚降鈣素測定線性關係2鮭魚降鈣素的HPLC色譜3鮭魚降鈣素的HPLC色譜4鮭魚降鈣素的HPLC色譜5鮭魚降鈣素緩釋微球體外釋放度的累積釋放曲線6注射用鮭魚降鈣素緩釋微球的粒度測定7注射用鮭魚降鈣素緩釋微球的電鏡照片圖8注射用鮭魚降鈣素緩釋微球的電鏡照片下述實驗例和實施例用於進一步說明但不限於本發明。
實驗例1 高效液相法(HPLC)測定注射用鮭魚降鈣素緩釋微球中鮭魚降鈣素的含量1儀器與試劑戴安高效液相色譜儀(Thermostatted CompartnentTcc-100；PDA-100Photodiode Array Detector；P680HPLC Dump；ASI-100Automated Sample Intetor)；鮭魚降鈣素對照品(購自中國藥品生物製品鑑定所)；自製注射用鮭魚降鈣素緩釋微球；乙腈(色譜純，天津四友試劑公司，20050815)；超純水；其餘試劑均為市售分析純。
2方法與結果2.1對照品溶液的製備精密稱取105℃乾燥至恆重的鮭魚降鈣素對照品7.0mg，置50ml容量瓶中，加超純水適量，充分溶解後，加超純水至刻度，搖勻，即得(每1ml中含鮭魚降鈣素0.14mg，使用時按不同比例進行稀釋)。
2.2供試品溶液的製備精密稱取105℃乾燥至恆重注射用鮭魚降鈣素緩釋微球108.9mg，置10ml容量瓶中，加入15％的乙腈溶液溶解微球，定容。溶液以0.45微米的微孔濾膜過濾後，取續濾液作為供試品溶液。
2.3色譜條件與測定方法C18蛋白分析專用柱(200mm，5μm，購自大連依利特公司)；以0.402％四甲基氫氧化銨溶液-乙腈(9∶1)用磷酸調PH至2.5為流動相A；以0.363％四甲基氫氧化銨溶液-乙腈(2∶3)用磷酸調PH至2.5為流動相B；進行梯度洗脫(梯度程序見表1)，檢測波長為220nm，柱溫30℃，流速1ml/min。
表1HPLC梯度程序如下

精密吸取對照品溶液(0.042mg/ml)100μl及供試品溶液100μl分別注入液相色譜儀，依法測定，記錄色譜圖。鮭魚降鈣素保留時間大約為13min，託尾因子為1.8。
2.4樣品測定方法及結果精密吸取對照品溶液(0.042mg/ml)100μl及供試品溶液100μl分別注入液相色譜儀，依法測定，記錄色譜圖。重複測定3次，取平均值，按外標法以峰面積計供試品溶液中的鮭魚降鈣素的含量，試驗結果見表2。並按下式計算微球載藥量。
載藥量＝(微球中所含藥物總量/微球總重量)×100％表2鮭魚降鈣素微球測定結果

供試品溶液中的鮭魚降鈣素的含量＝0.0424mg/ml注射用鮭魚降鈣素緩釋微球的載藥量為0.3892％2.5線形範圍的考察 分別取鮭魚降鈣素對照品溶液0.007mg/ml、0.014mg/ml、0.028mg/ml、0.042mg/ml、0.056mg/ml各100μl、注入高效液色譜儀，測定峰面積積分值。以鮭魚降鈣素量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，計算得回歸方程為Y＝10.242x-6.231，r＝0.9852表明鮭魚降鈣素在0.7～5.6μg範圍內線性關係良好。結果見表3，圖1。
表3鮭魚降鈣素測定線性關係考察表

2.6穩定性考察 取供試品溶液100μl進樣，每隔6h進樣一次，連續測5次，結果見表4。結果表明樣品在24小時內穩定。RSD＝1.7％表4穩定性考察結果

2.7精密度試驗 取對照品溶液(0.42mg/ml)100μl連續進樣5次，測定峰面積積分值RSD＝1.3％。結果見表5表5精密度考察表

2.8重現性考察取同一批號樣品5份，進樣量100ul依法測定含量，RSD＝1.2％。
表6鮭魚降鈣素測定樣品重現性試驗考察表

3結論經線性關係考察、精密度測定及穩定性考察等說明本方法用於鮭魚降鈣素的HPLC含量測定是可行的。
附鮭魚降鈣素的HPLC色譜圖(見圖2、圖3、圖4)實驗例2 注射用鮭魚降鈣素緩釋微球體外釋放度的測定方法1儀器與試劑戴安高效液相色譜儀(Thermostatted CompartnentTcc-100；PDA-100Photodiode Array Detector；P680 HPLC Dump；ASI-100Automated Sample Intetor)；鮭魚降鈣素對照品(購自中國藥品生物製品鑑定所)；自製鮭魚降鈣素緩釋微球；乙腈(一級色譜純，天津四友試劑公司，20050815)水為超純水；其餘試劑均為市售分析純。
2方法精密稱量注射用鮭魚降鈣素緩釋微球100mg，置具塞試管中，放入PH＝4的PBS緩衝溶液(內含0.1％的三氯乙酸)20ml，然後具塞試管將置到37℃的恆溫水浴搖床中，緩慢振蕩。分別於第0.5h、24h、48h、72h及第7日、11日、15日定時取樣。每次取樣時，先1500rpm離心5分鐘，吸取所有釋放緩衝液後，隨即加入同釋放體積緩衝液。將吸取出的釋放緩衝液以0.45微米的微孔濾膜過濾，取續濾液1ml作為供試品溶液，用高效液相色譜儀進行含量測定(如前述)。按照含量測定結果，結合已知注射用鮭魚降鈣素緩釋微球載藥量計算鮭魚降鈣素的累計釋放百分率。鮭魚降鈣素緩釋微球體外釋放度的計算方法如下釋放度＝{測得濃度(μg/ml)×20ml+∑前次取樣時的釋放量(μg)]/微球載藥量×微球取樣量}×100％3結果表7注射用鮭魚降鈣素緩釋微球體外釋放度的測定結果

累積釋放曲線如圖54結論從上述結果來看，注射用鮭魚降鈣素緩釋微球在0.5h時，累積釋放度為13.43％，小於40％，符合中華人民共和國藥典2005版的相關規定；隨著釋放時間的延長，單位時間內的釋放量逐漸減少，但可持續釋放15日。
實驗例3 鮭魚降鈣素緩釋微球中二氯甲烷殘留量的測定色譜條件色譜柱2mm×3m內徑不鏽鋼柱，填充GDX-101(80-100目)；檢測器FID；載氣流量N2200ml/min；燃氣流量空氣500ml/min；氫氣65ml/min；溫度檢測器220℃，氣化室220℃，柱初溫120℃，保持7min，升溫速率40℃/min；終溫200℃，保持10min，衰減10。
測定法取鮭魚降鈣素緩釋微球50mg，精密稱定，置5ml容量瓶中，加二甲基甲醯胺(DMF)至刻度，充分震搖，濾過，取續濾液作為供試品溶液。另取二氯甲烷適量，精密稱定，加DMF溶解，配製成10μg/ml的溶液，作為對照品溶液。取供試品溶液、對照品溶液各2μl分別注入氣相色譜儀，測定峰面積，按外標法計算即得二氯甲烷的濃度，按下式計算鮭魚降鈣素緩釋微球中二氯甲烷殘的留量。
二氯甲烷殘留量＝(二氯甲烷的濃度×5/微球總重量)×100％結果鮭魚降鈣素緩釋微球中二氯甲烷的殘留量＝0.037％實驗例4 注射用鮭魚降鈣素緩釋微球的粒度測定儀器Mastersizer-2000雷射粒度測定儀，英國馬爾文儀器有限公司檢測方法將適量注射用鮭魚降鈣素緩釋微球以水混懸後，直接入儀器測定。
結果如圖6所示實驗例5 注射用鮭魚降鈣素緩釋微球的電鏡照片儀器日本JEM-2100F透射電子顯微鏡方法將適量鮭魚降鈣素微球用蒸餾水混懸，超聲30分鐘，上銅網直接照相。(見圖7、圖8)實驗例6 注射用降鈣素緩釋微球得率實驗處方鮭魚降鈣素20mg；醫用明膠1g；丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA75/25，平均分子量10000)5g；甘露醇1g儀器電子天平；勻漿機；旋轉蒸發儀，離心機，冷凍乾燥機製備工藝將1g明膠水浴加熱(50℃)，使其完全溶解在4ml注射用水中，放至室溫；將20mg鮭魚降鈣素溶解在1ml注射用水中；將其與上述明膠溶液混合均勻後，作為水相(W1)；將5g丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA75/25，平均分子量10000)溶解在25ml二氯甲烷中，作為有機相(O)；將15g聚乙烯醇-124(PVA-124)溶解於500ml注射用水中，製成水溶液，作為第三相(W2)；將W1相和0相混合，在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化3分鐘，使有機相與水相混合均勻製成W1/O相；在4℃下，將W1/O相加入W2相中，同時用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化5分鐘，使W2相與W1/O相進行乳化包合，得到W1/O/W2相；將製得的W1/O/W2相轉移至旋轉蒸發儀中，2～10℃，減壓揮盡二氯甲烷，離心，收集微球，用注射用水洗滌3次，每次20毫升，加入5％甘露醇水溶液20毫升重新分散，經冷凍乾燥(-40℃，15小時)後，分裝，即得降鈣素微球。
結果所得降鈣素微球重量為4.897g，得率為81.62％。
下述實施例均能實現上述實驗例所述的效果。
具體實施例方式
實施例1注射用降鈣素微球製備將30毫克鮭魚降鈣素、1克明膠溶解在5毫升注射用水中，製成水溶液，作為水相(W1)；將5克丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA75/25，平均分子量10000)溶解在25毫升二氯甲烷中，作為有機相(O)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15克聚乙烯醇-1788(PVA-1788)溶解於500毫升注射用水中，製成水溶液，作為第三水相(W2)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化6分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球。
實施例2注射用降鈣素微球製備將20毫克降鈣素、2克明膠溶解在5毫升注射用水中，製成水溶液，作為水相(W1)；將5克丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA80/15，平均分子量20000)溶解在20毫升二氯甲烷中，作為有機相(0)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化2分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15克聚乙烯醇-124(PVA-124)溶解於500毫升注射用水中，製成水溶液，作為第三水相(W2)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球。
實施例3注射用降鈣素微球凍乾粉製備將30毫克鮭魚降鈣素、1克明膠溶解在5毫升注射用水中，製成水溶液，作為水相(W1)；將5克丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA75/25，平均分子量100000)溶解在25毫升二氯甲烷中，作為有機相(O)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15克聚乙烯醇-1788(PVA-1788)溶解於500毫升注射用水中，製成水溶液，作為第三水相(W2)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化6分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球，用注射用水洗滌3次，每次20毫升，加入5％甘露醇水溶液20毫升重新分散，經冷凍乾燥(-40℃，15小時)後，分裝，即得降鈣素凍幹微球。
實施例4注射用降鈣素微球凍乾粉製備將20毫克或鮭魚降鈣素、2克明膠溶解在5毫升注射用水中，製成水溶液，作為水相(W1)；將5克丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA65/35，平均分子量200000)溶解在20毫升二氯甲烷中，作為有機相(0)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化2分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15克聚乙烯醇-124(PVA-124)溶解於500毫升注射用水中，製成水溶液，作為第三水相(W2)；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球，加入1％甘露醇水溶液20毫升重新分散，經冷凍乾燥(-40℃，15小時)後，分裝，即得降鈣素微球凍乾粉。
實施例5注射用降鈣素微球製備注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在0.1％～1％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶10；內核相由水相和有機相(O)構成，其中水相(W1)為含6％的醫用明膠水溶液，有機相(O)為含10％丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相(O)的比例為1∶5；第三水相(W2)為含0.2％的聚乙烯醇的水溶液；上述原料按照常規方法製成緩釋微球。上述緩釋微球的粒度分布在0.009-0.2微米，丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的比例65/35，共聚物的平均分子量在20000、100000。
實施例6注射用降鈣素微球製備注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在5％～9％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶90；內核相由水相和有機相(0)構成，其中水相(W1)為含30％的醫用明膠水溶液，有機相(O)為含50％丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相(O)的比例為1∶15；第三水相(W2)為含9％的聚乙烯醇的水溶液；上述原料按照常規方法製成緩釋微球。上述緩釋微球的粒度分布在70～100微米，丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的比例75/25，共聚物的平均分子量在200000。
實施例7注射用降鈣素微球製備注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在7％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶50；內核相由水相和有機相(O)構成，其中水相(W1)為含10％的醫用明膠水溶液，有機相(O)為含30％丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相(O)的比例為1∶10；第三水相(W2)為含5％的聚乙烯醇的水溶液；上述原料按照常規方法製成緩釋微球。上述緩釋微球的粒度分布在10～50微米，丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的比例75/25，共聚物的平均分子量在200000。二氯甲烷殘留量＜0.06％。
實施例8注射用降鈣素微球製備注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在2％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶30、；內核相由水相和有機相(0)構成，其中水相(W1)為含20％的醫用明膠水溶液，有機相(O)為含40％丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相(O)的比例為1∶10；第三水相(W2)為含7％的聚乙烯醇的水溶液；上述原料按照常規方法製成緩釋微球。上述緩釋微球的粒度分布在120～180微米，丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的比例75/25，共聚物的平均分子量在200000。二氯甲烷殘留量＜0.06％。
實施例9注射用降鈣素微球製備注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在0.5％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶70、；內核相由水相和有機相(O)構成，其中水相(W1)為含20％的醫用明膠水溶液，有機相(O)為含20％丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相(O)的比例為1∶10；第三水相(W2)為含2％的聚乙烯醇的水溶液；上述原料按照常規方法製成緩釋微球。上述緩釋微球的粒度分布在0.9-2微米，丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的比例80/20，共聚物的平均分子量在100000。二氯甲烷殘留量＜0.06％。
實施例10注射用降鈣素微球製備注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在0.04％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶70、；內核相由水相和有機相(O)構成，其中水相(W1)為含20％的醫用明膠水溶液，有機相(O)為含20％丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相(O)的比例為1∶10；第三水相(W2)為含2％的聚乙烯醇的水溶液；上述原料按照常規方法製成緩釋微球。上述緩釋微球的粒度分布在0.9-2微米，丙交脂-乙交脂共聚物(PLGA)的比例20/80，共聚物的平均分子量在150000。二氯甲烷殘留量＜0.06％。
權利要求
1.一種注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於該方法包括如下步驟注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球注射劑的載藥量在0.01％～10％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶1～100；內核相由水相和有機相構成，其中水相W1中含5～40％的醫用明膠；有機相O為二氯甲烷，含5～60％的丙交脂—乙交脂共聚物PLGA。
2.一種注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於該方法包括如下步驟注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在0.01％～10％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶1～100；內核相由水相和有機相O構成，其中水相W1為含5～40％的醫用明膠水溶液，有機相O為含5～60％丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相O的比例為1∶3～20；第三水相W2為含0.1～10％聚乙烯醇的水溶液，上述原料按照常規方法製成緩釋微球。
3.如權利要求2所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於該方法為注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在0.1％～1％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶50；內核相由水相和有機相O構成，其中水相W1為含20％醫用明膠的水溶液，有機相O為含30％丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相0的比例為1∶10；第三水相W2為含5％的聚乙烯醇的水溶液，上述原料按照常規方法製成緩釋微球。
4.如權利要求2所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於該方法為注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在5-9％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶10；內核相由水相和有機相O構成，其中水相W1為含6％醫用明膠的水溶液，有機相O為含50％丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相O的比例為1∶5；第三水相W2為含9％的聚乙烯醇的水溶液，上述原料按照常規方法製成緩釋微球。
5.如權利要求2所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於該方法為注射用降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素，微球的載藥量在2％；包裹材料由內核相與第三水相構成，其比例為1∶90；內核相由水相和有機相O構成，其中水相W1為含30％醫用明膠的水溶液，有機相O為含50％丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的二氯甲烷溶液，內核水相與有機相O的比例為1∶15；第三水相W2為含0.2％的聚乙烯醇的水溶液，上述原料按照常規方法製成緩釋微球。
6.如權利要求2-5任一所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於微球的粒度分布在0.001～200微米之間，二氯甲烷殘留量＜0.06％。
7.如權利要求5所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於微球的粒度在10～50微米之間。
8.如權利要求2-5任一所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的比例範圍在90/10～10/90之間，共聚物的平均分子量在10000～300000之間。
9.如權利要求8所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的比例為65/35、75/25或80/15，共聚物的平均分子量為20000、100000或200000。
10.一種注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於該方法為將0.01-0.04重量份降鈣素、0.5-3重量份明膠溶解在5體積份注射用水中，製成水溶液，作為水相W1；將5重量份丙交脂—乙交脂共聚物PLGA溶解在20-25體積份二氯甲烷中，作為有機相O；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化1-5分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15重量份聚乙烯醇溶解於500體積份注射用水中，製成水溶液，作為第三水相W2；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化2-10分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球。
11.如權利要求10所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於該方法為將0.02重量份降鈣素或鮭魚降鈣素、2重量份明膠溶解在5體積份注射用水中，製成水溶液，作為水相W1；將5重量份丙交脂—乙交脂共聚物PLGA溶解在20體積份二氯甲烷中，作為有機相O；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化2分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15克聚乙烯醇溶解於500體積份注射用水中，製成水溶液，作為第三水相W2；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球。
12.如權利要求10所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於該方法為將0.03重量份降鈣素或鮭魚降鈣素、1重量份明膠溶解在5體積份注射用水中，製成水溶液，作為水相W1；將5重量份丙交脂—乙交脂共聚物PLGA溶解在25體積份二氯甲烷中，作為有機相O；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15重量份聚乙烯醇溶解於500體積份注射用水中，製成水溶液，作為第三水相W2；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化6分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球。
13.如權利要求10-12任一所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於微球的粒度分布在0.001～200微米之間，二氯甲烷殘留量＜0.06％。
14.如權利要求13所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於微球的粒度在10～50微米之間。
15.如權利要求10-12任一所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的比例範圍在90/10～10/90之間，共聚物的平均分子量在10000～300000之間。
16.如權利要求15所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的比例為65/35、75/25或80/15，共聚物的平均分子量為20000、100000或200000。
17.一種降鈣素緩釋微球注射劑的製備方法，其特徵在於該方法為將0.01-0.04重量份降鈣素、0.5-3重量份明膠溶解在5體積份注射用水中，製成水溶液，作為水相W1；將5重量份丙交脂—乙交脂共聚物PLGA溶解在20-25體積份二氯甲烷中，作為有機相O；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化1-5分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15重量份聚乙烯醇溶解於500體積份注射用水中，製成水溶液，作為第三水相W2；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化2-10分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球；用水洗滌0-5次，每次20體積份，加入1-5％甘露醇水溶液20體積份重新分散，經-40℃，15小時冷凍乾燥後，分裝，即得降鈣素微球凍乾粉針。
18.如權利要求17所述的降鈣素緩釋微球注射劑的製備方法，其特徵在於該方法為將0.02重量份降鈣素或鮭魚降鈣素、2重量份明膠溶解在5體積份注射用水中，製成水溶液，作為水相W1；將5重量份丙交脂—乙交脂共聚物PLGA溶解在20體積份二氯甲烷中，作為有機相O；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化2分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15克聚乙烯醇溶解於500體積份注射用水中，製成水溶液，作為第三水相W2；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球；用水洗滌3次，每次20體積份，加入3％甘露醇水溶液20體積份重新分散，經-40℃，15小時冷凍乾燥後，分裝，即得降鈣素微球凍乾粉針。
19.如權利要求17所述的降鈣素緩釋微球注射劑的製備方法，其特徵在於該方法為將0.03重量份降鈣素或鮭魚降鈣素、1重量份明膠溶解在5體積份注射用水中，製成水溶液，作為水相W1；將5重量份丙交脂—乙交脂共聚物PLGA溶解在25體積份二氯甲烷中，作為有機相O；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化4分鐘，將有機相和水相混合均勻製成W1/O相，將15重量份聚乙烯醇溶解於500體積份注射用水中，製成水溶液，作為第三水相W2；在4℃用勻漿機6500rpm高速震蕩乳化6分鐘，與前W1/O相進行乳化包和，得到W1/O/W2相，再在旋轉蒸發儀中，2～10℃減壓揮發二氯甲烷5小時，離心，收集微球；加入5％甘露醇水溶液20體積份重新分散，經-40℃，15小時冷凍乾燥，分裝，即得降鈣素微球凍乾粉針。
20.如權利要求17-19任一所述的降鈣素緩釋微球注射劑的製備方法，其特徵在於聚乙烯醇為聚乙烯醇-1788或聚乙烯醇-124。
21.如權利要求17-19任一所述的降鈣素緩釋微球注射劑的製備方法，其特徵在於微球的粒度分布在0.001～200微米之間，二氯甲烷殘留量＜0.06％。
22.如權利要求21所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於微球的粒度在10～50微米之間。
23.如權利要求17-19任一所述的降鈣素緩釋微球注射劑的製備方法，其特徵在於丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的比例範圍在90/10～10/90之間，共聚物的平均分子量在10000～300000之間。
24.如權利要求23所述的注射用降鈣素緩釋微球的製備方法，其特徵在於丙交脂—乙交脂共聚物PLGA的比例為65/35、75/25或80/15，共聚物的平均分子量為20000、100000或200000。
全文摘要
本發明公開一種注射用降鈣素緩釋微球及其注射劑的製備方法。該降鈣素緩釋微球由藥物和包裹材料製成，其中藥物為降鈣素或鮭魚降鈣素；包裹材料由內核相與第三水相構成，內核相由水相和有機相構成，其中水相(W
文檔編號A61K47/42GK1973829SQ20061014488
公開日2007年6月6日 申請日期2006年11月28日 優先權日2005年11月28日
發明者馮前進, 王永輝, 梁衛, 郭光明, 崔曉星, 周曉慶 申請人:北京博恩特藥業有限公司