包載藥物脂質體的製備方法
2023-06-04 21:14:11 2
專利名稱：包載藥物脂質體的製備方法
包載藥物脂質體的製備方法
技術領域：
本發明屬於藥物製劑學領域，更具體地說，本發明涉及一種包載藥物脂質體的製備方法。
背景技術：
脂質體(liposomes)是一種由排列有序的脂質雙分子層組成的單層或多層微囊。 脂質體屬於膠體系統，具有類似細胞的結構，與細胞膜親和力強，可以增加被包封藥物透過細胞膜的能力。脂質體生物相容性好，可實現藥物體內靶向遞送，具有延長藥物作用時間、 增加藥物的體內外穩定性、降低藥物毒性，增強藥理作用等諸多優點。製備脂質體的方法很多，有薄膜分散法、逆相蒸發法、冷凍乾燥法、注入法、超聲波分散法等。目前直接用脂質體包載藥物，特別是包載水溶性藥物時，包封率通常較低。此外由於藥物極性原因，導致藥物在脂質體中分布不均勻，突釋效應明顯，不能滿足藥典相應的規定。採用pH梯度法等主動載藥技術可以提高脂質體對於水溶性藥物包載量，但是主動載藥技術操作較為繁瑣，重現性差，很難工業化批量製備。固體分散體的概念最早是在1961年Sekiguchi等提出的。固體分散體的作用特點①增加難溶性藥物的溶解度和溶出速率難溶性藥物製成固體分散體後，藥物以分子、 膠體、無定型或微晶狀態分散在載體中，比表面積增加，溶出速度加快。②延緩釋藥速度固體分散體技術已經被應用於緩釋製劑的產品開發中，通過選用適宜的載體材料，可以獲得不同釋藥速度的緩釋固體分散體。③提高難溶性藥物的生物利用度難溶性藥物不易被機體吸收，在臨床應用上受到了一定限制，採用固體分散體技術，可使難溶性藥物達到高度分散均相狀態，從而保證其製劑的吸收與利用，提高生物利用度。④提高藥物的穩定性不穩定藥物製成固體分散體後可以增加穩定性，使製劑的質量易於控制，且可降低成本。目前，固體分散體技術還多是應用於固體口服製劑中，未見將其應用到微粒載體製備技術中的報導。
發明內容本發明要解決的技術問題是針對現有製備包載藥物脂質體的不足之處，提供一種
解決方案。我們在製備包載藥物的脂質體實驗中發現，由於藥物極性差異大，藥物很難均勻包載於脂質體中。水溶性藥物製成脂質體時，因藥物分布於脂質體表面，容易產生突釋效應；但脂溶性藥物製成脂質體時，因藥物完全包埋於脂質體內部，藥物很難釋放出來，從而達不到規定的釋藥濃度。但是有一些兩親性高分子材料如聚乙二醇、泊洛沙姆、聚維酮等， 與脂質體親和力高，並且很容易分散於水、中等極性甚至弱極性有機溶劑中。因此我們首先製備藥物固體分散體，然後將藥物固體分散體與脂質體成膜材料均勻分散於有機溶劑中製備載藥脂質體。結果發現藥物包封率提高，突釋效應降低。
經過多次試驗，為改善脂質體包載藥物的製備方法，本發明採用了以下的技術方案本發明的一種改善脂質體包載藥物的製備方法，是將藥物分散於溶解或熔融狀態的兩親性高分子材料體系中，急速降溫處理得到藥物固體分散體，然後將藥物固體分散體與脂質體成膜材料均勻分散於有機相體系中，按照脂質體製備方法，製成包載藥物的脂質體，實現藥物均勻包載在於脂質體中，提高藥物在脂質體的包封率，減少包載藥物脂質體的突釋效應。上述的藥物是指發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的中藥有效成分、化學藥物、胺基酸、多肽或蛋白藥物。上述的兩親性高分子材料是指藥學上公認的天然高分子材料、半合成高分子材料和合成高分子材料，包括聚維酮、聚乙二醇、泊洛沙姆和聚乙烯醇。上述的脂質體成膜材料包括氫化磷脂、合成磷脂、膽固醇和表面活性劑，氫化磷脂包括氫化蛋黃磷脂和/或氫化大豆磷脂；合成磷脂是指藥學已公知的合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物，包括二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯甘油、二棕櫚醯磷脂酸其中一種或幾種以及它們的聚乙二醇修飾衍生物；表面活性劑包括吐溫系列、司盤系列、 油酸、十六醇、十八醇、甘油、丙二醇。上述的有機相是指碳數10以內的直鏈、支鏈的醇、酮、酯、醚和滷代烷，包括乙醇、 叔丁醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、石油醚、氯仿、二氯甲烷。上述的有機相體系中可以含有藥學公知的表面活性劑、多元醇或糖類、高分子骨架支持劑、抗氧劑、穩定劑、PH調節劑。上述的包載藥物的脂質體粒徑可以是微米級或納米級。上述的包載藥物的脂質體可以進一步通過透析、離心、層析的處理方法去除脂質碎片和多餘鹽離子。上述的包載藥物脂質體可以進一步加工，形成口服、黏膜、注射、皮膚給藥製劑的原料，製成發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的具體製劑。上述的包載藥物脂質體的製備方法具有以下優點1.本發明的包載藥物脂質體的製備方法提高藥物在脂質體的包封率，明顯減少包載藥物的滲漏。2.本發明的包載藥物脂質體的製備方法減少包載藥物脂質體的突釋效應，改善藥物的釋放行為，有利於獲得不同釋藥速度的載藥脂質體，提高藥物的生物利用度。3.本發明的包載藥物脂質體的製備方法適於包裹多種藥物，尤其適用於包載易氧化的藥物、治療劑量小的藥物、水溶性藥物和難溶性藥物。4.本發明製備的包載藥物脂質體成品為固態，穩定性高，適用劑型廣泛，可以進一步加工，形成口服、黏膜、注射、皮膚給藥製劑的原料，製成發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的具體製劑。注突釋效應(dumping或burst effect)，藥物釋放首先是粘附在微粒表面的少量藥物發生初期的快速釋放，稱為突釋效應。中華人民共和國藥典(2005版)規定，脂質體等載藥微粒在開始0. 5h內的釋放量應低於40%。
具體實施方式現結合下列實例來進一步描述本發明。實施例1 雙氯芬酸鈉脂質體本發明的第一個實施方案採用水溶性藥物雙氯芬酸鈉為靶藥，兩親性高分子材料選用聚維酮(PVP)，採用熔融法製備雙氯芬酸鈉_聚維酮固體分散體，脂質體成膜材料選用氫化大豆磷脂、膽固醇、吐溫80和十六醇，採用冷凍乾燥方法製備包載雙氯芬酸鈉的脂質體。實驗組30mg聚維酮(PVP)在65°C水浴中熔融，加入8mg雙氯芬酸鈉分散均勻， 轉至0°C冰浴中驟冷處理，製成雙氯芬酸鈉-聚維酮固體分散體。20mg氫化大豆磷脂、6mg 膽固醇、2mg吐溫80和2mg十六醇共同溶於20ml叔丁醇，在65 °C水浴中溶解，加入雙氯芬酸鈉_聚維酮固體分散體，完全溶解，加入120mg甘露醇(PVP)，分散均勻，裝於西林瓶中-30°C冷凍5小時，冷凍乾燥(5X10_4Pa，24h)得到包載雙氯芬酸鈉的脂質體固態凍幹品。對照組20mg氫化大豆磷脂、6mg膽固醇、2mg吐溫80和2mg十六醇共同溶於20ml 叔丁醇，在65°C水浴中溶解，加入8mg雙氯芬酸鈉微粉(粒徑在15μπι以下)分散均勻，加入120mg甘露醇，完全混勻，裝於西林瓶中-30°C冷凍5小時，冷凍乾燥(5 X 10_4Pa，24h)得到包載雙氯芬酸鈉的脂質體固態凍幹品。實驗組和對照組分別注入蒸餾水5ml，輕微搖動，即得到包載雙氯芬酸鈉的脂質體混懸液，然後進行以下測定。包封率測定取雙氯芬酸鈉脂質體混懸液經過lOOOOr/min離心lmin，吸取含有游離雙氯芬酸鈉的上層溶液2ml，用紫外-可見分光光度計於274nm測吸收度，代入雙氯芬酸鈉標準曲線，利用「包封率(％)=[(雙氯芬酸鈉總量-游離雙氯芬酸鈉量)/雙氯芬酸鈉總量]X 100」公式計算雙氯芬酸鈉脂質體的包封率。雙氯芬酸鈉脂質體混懸液樣品25°C放置0. 5h後再次測定包封率。雙氯芬酸鈉標準曲線精密稱取雙氯芬酸鈉標準品，用蒸餾水配製成0. 1,0.2, 0. 5，1. 0，2. 5mg/ml的系列標準溶液，於274nm測吸收度，得到雙氯芬酸鈉濃度與吸收度的標準曲線，利用該標準曲線計算雙氯芬酸鈉的濃度。結果實驗組雙氯芬酸鈉脂質體包封率平均值為85%，而對照組包封率平均值為 51%。25°C放置0. 5h後實驗組雙氯芬酸鈉脂質體包封率平均值為72%，0. 5h內的釋放量低於40%，避免了脂質體的突釋效應。而對照組25°C放置0. 5h後包封率平均值降為28%， 0. 5h內的釋放量超過40%，脂質體存在突釋效應。結果表明本發明製備的雙氯芬酸鈉脂質體有效提高了雙氯芬酸鈉的包封率，避免了脂質體的突釋效應，從而延長了雙氯芬酸鈉脂質體的釋放作用。實施例2 紫杉醇脂質體本發明的第二個實施方案採用脂溶性藥物紫杉醇為靶藥，兩親性高分子材料聚乙二醇(PEG 2000)，採用溶劑-熔融法製備紫杉醇-聚乙二醇固體分散體，脂質體成膜材料選用二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、聚乙二醇2000接枝的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺 (DSPE-PEG2000)和吐溫80，採用注入法製備包載紫杉醇的脂質體。實驗組30mg聚乙二醇(PEG 2000)加入0. 5ml無水乙醇中，在65°C水浴中熔融，加入5mg紫杉醇分散均勻，轉至0°C冰浴中驟冷處理，製成紫杉醇-聚乙二醇固體分散體。5mg 二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、lmg聚乙二醇2000接枝的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺 (DSPE-PEG2000)加入20ml氯仿甲醇(3 1，V/V)的混合溶劑中溶解，加入紫杉醇-聚乙二醇固體分散體分散均勻，構成有機相。取IOmg吐溫80加入pH = 7的20ml 0. 02mol/ L磷酸鹽緩衝液(PBS)中，混勻，構成水相。將有機相注入lOOOr/min攪拌的(25士2)°C的水相中，lOOOr/min攪拌lOmin，形成脂質體混懸液，水浴25°C旋轉蒸發除盡有機溶劑，得到包載紫杉醇的脂質體。對照組5mg 二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、Img聚乙二醇2000接枝的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(DSPE-PEG2000)加入20ml氯仿甲醇(3 1，V/V)的混合溶劑中溶解，加入 5mg紫杉醇，構成有機相。取IOmg吐溫80加入pH = 7的20ml 0. 02mol/L磷酸鹽緩衝液 (PBS)中，混勻，構成水相。將有機相注入1000r/min攪拌的(25 士 2) °C的水相中，1000r/min 攪拌lOmin，形成脂質體混懸液，水浴25°C旋轉蒸發除盡有機溶劑，得到包載紫杉醇的脂質體。包封率測定取紫杉醇脂質體混懸液經過lOOOOr/min離心lmin，吸取0. 5ml含有游離紫杉醇的上層溶液，用紫外-可見分光光度計於480nm測吸收度，代入紫杉醇標準曲線，利用「包封率(％)=[(紫杉醇總量-游離紫杉醇量)/紫杉醇總量]X100」公式計算紫杉醇脂質體的包封率。紫杉醇脂質體混懸液樣品25°C放置0. 5h後再次測定包封率。紫杉醇標準曲線精密稱取紫杉醇標準品，用蒸餾水配製成0. 25,0. 5，1. 0，2. 0， 5. Omg/ml的系列標準溶液，於480nm測吸收度，得到紫杉醇濃度與吸收度的標準曲線，利用該標準曲線計算紫杉醇的濃度。結果紫杉醇脂質體包封率平均值為84%，而對照組包封率平均值為85%，無顯著差異。25°C放置0. 5h後實驗組紫杉醇脂質體包封率平均值為72%，釋放出一定藥物且未顯示突釋效應。對照組25°C放置0.5h後包封率平均值為82%，藥物釋放很慢。結果表明本發明製備的紫杉醇脂質體沒有脂質體的突釋效應，且具有較好的釋放行為，提高其治療的有效性。實施例3 鹽酸伊立替康脂質體本發明的第三個實施方案採用鹽酸伊立替康為靶藥，兩親性高分子材料選用泊洛沙姆(Poloxamer 188)，採用熔融法製備鹽酸伊立替康-泊洛沙姆固體分散體，脂質體成膜材料選用氫化蛋黃磷脂、膽固醇、吐溫80和甘油，採用高壓乳勻方法製備包載鹽酸伊立替康的納米脂質體。實驗組55mg泊洛沙姆(Poloxamer 188)在65°C水浴中熔融，加入5mg鹽酸伊立替康分散均勻，得到鹽酸伊立替康-泊洛沙姆固體分散體。20mg氫化蛋黃磷脂、6mg膽固醇、 2mg吐溫80、6mg甘油加入到IOml 80°C水中，加入鹽酸伊立替康_泊洛沙姆固體分散體，用高壓乳勻機乳化四次，通過0. 22 μ m的微孔濾膜進行整粒，得到包載鹽酸伊立替康的納米脂質體。對照組20mg氫化蛋黃磷脂、6mg膽固醇、2mg吐溫80、6mg甘油加入到IOml 80°C 水中，加入5mg鹽酸伊立替康，用高壓乳勻機乳化四次，通過0. 22 μ m的微孔濾膜進行整粒， 得到包載鹽酸伊立替康的納米脂質體。包封率測定取鹽酸伊立替康脂質體混懸液經過lOOOOr/min離心lmin，吸取2ml含有游離鹽酸伊立替康的上層溶液，用紫外-可見分光光度計於370nm測吸收度，代入鹽酸伊立替康標準曲線，利用「包封率(％)=[(鹽酸伊立替康總量-游離鹽酸伊立替康量)/ 鹽酸伊立替康總量]X 100」公式計算鹽酸伊立替康脂質體的包封率。鹽酸伊立替康脂質體混懸液樣品25°C放置0. 5h後再次測定包封率。鹽酸伊立替康標準曲線精密稱取鹽酸伊立替康標準品，用蒸餾水配製成0. 25、 0.5,1.0,2.0,5. Omg/ml的系列標準溶液，於370nm測吸收度，得到鹽酸伊立替康濃度與吸收度的標準曲線，利用該標準曲線計算鹽酸伊立替康的濃度。結果鹽酸伊立替康脂質體包封率平均值為84%，而對照組包封率平均值為 30%。25°C放置0. 5h後鹽酸伊立替康脂質體包封率平均值為67%，未顯示突釋效應。而對照組25°C放置0.5h後包封率平均值降為14%，具有明顯突釋效應。結果表明本發明製備的鹽酸伊立替康脂質體有效提高藥物的包封率，避免了脂質體的突釋效應。實施例4 鹽酸伊立替康脂質體注射劑本發明的第四個實施方案採用實施例3製備的鹽酸伊立替康脂質體進一步加工製備鹽酸伊立替康脂質體注射劑。將實施例3實驗組製得的鹽酸伊立替康脂質體混懸液經葡聚糖凝膠柱洗脫，將游離的鹽酸伊立替康與包載鹽酸伊立替康的脂質體分開。將包載鹽酸伊立替康脂質體封裝於 5ml的安瓿中，6tlCo輻射滅菌(RAD = 150 180萬)，製成鹽酸伊立替康脂質體注射劑。鹽酸伊立替康脂質體注射劑取樣進行電鏡形態觀察，包載鹽酸伊立替康的脂質體形態圓整， 均勻，無聚團，粒徑分布100-250nm。結果表明包載鹽酸伊立替康的脂質體可以製成注射劑等具體製劑，形態保持較好，穩定性較高。在上述實施例中，僅對本發明進行了示範性描述，但是本領域技術人員在閱讀本專利申請後可以在不脫離本發明的精神和範圍的情況下對本發明進行各種修改。
權利要求
1.一種包載藥物脂質體的製備方法，其特徵在於將藥物分散於溶解或熔融狀態的兩親性高分子材料體系中，急速降溫處理得到藥物固體分散體，然後將藥物固體分散體與脂質體成膜材料均勻分散於有機相體系中，按照脂質體製備方法，製成包載藥物的脂質體，實現藥物均勻包載在於脂質體中。
2.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的藥物是指發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的中藥有效成分、化學藥物、胺基酸、多肽或蛋白藥物。
3.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的兩親性高分子材料是指藥學上公認的天然高分子材料、半合成高分子材料和合成高分子材料，包括聚維酮、聚乙二醇、 泊洛沙姆和聚乙烯醇。
4.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的脂質體成膜材料包括氫化磷脂、合成磷脂、膽固醇和表面活性劑，氫化磷脂包括氫化蛋黃磷脂和氫化大豆磷脂；合成磷脂是指藥學已公知的合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物，包括二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺、 二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯甘油、二棕櫚醯磷脂酸其中一種或幾種以及它們的聚乙二醇修飾衍生物；表面活性劑包括吐溫系列、司盤系列、油酸、十六醇、十八醇、甘油、丙二醇。
5.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的有機相是指碳數10以內的直鏈、支鏈的醇、酮、酯、醚和滷代烷，包括乙醇、叔丁醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、石油醚、氯仿、 二氯甲烷。
6.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的有機相體系中還含有藥學公知的表面活性劑、多元醇或糖類、高分子骨架支持劑、抗氧劑、穩定劑、PH調節劑中的一種或幾種。
7.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的包載藥物的脂質體粒徑是微米級或納米級。
8.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的包載藥物的脂質體進一步通過透析、離心、層析的處理方法去除脂質碎片和多餘鹽離子。
9.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的包載藥物脂質體進一步加工， 形成口服、黏膜、注射、皮膚給藥製劑的原料，製成發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的具體製劑。
全文摘要
本發明涉及一種包載藥物脂質體的製備方法。該方法首先製備藥物固體分散體，然後將藥物固體分散體與脂質體成膜材料均勻分散於有機溶劑中製備載藥脂質體，實現藥物均勻包載於脂質體中，提高藥物包封率，減少包載藥物脂質體的突釋效應。本發明的脂質體適於包裹各種藥物，並且適用劑型範圍廣。
文檔編號A61K47/34GK102188377SQ20101013124
公開日2011年9月21日 申請日期2010年3月18日 優先權日2010年3月18日
發明者趙應徵, 魯翠濤 申請人:魯翠濤