一種大豆分離蛋白基因組dna的提取方法
2023-05-28 11:14:46
專利名稱:一種大豆分離蛋白基因組dna的提取方法
技術領域:
本發明屬於生物技術領域,是一種適用於PCR擴增的大豆分離蛋白的基因組DNA 的提取方法。
背景技術:
目前,關於植物全基因組DNA的提取已有不少研究和報導,但由於不同的植物或同一種植物的不同組織材料的組分各異,所適宜的提取方法也有所不同。大豆分離蛋白蛋白含量高,不利於DNA的溶出與提取。一般的植物基因組DNA提取方法無法從大豆分離蛋白中提取到基因組DNA,為下一步的以基因為基礎的生物檢測帶來困難。現有大豆基因組DNA 提取方法的是以大豆幼苗葉片、大豆乾種子、鼓粒期鮮豆莢為材料進行提取,上述提取方法無法從富含蛋白質的大豆分離蛋白中提取到基因組DNA。
發明內容
本發明的目的是為解決現有大豆基因組DNA提取方法的是以大豆幼苗葉片、大豆乾種子、鼓粒期鮮豆莢為材料進行提取,上述提取方法無法從富含蛋白質的大豆分離蛋白中提取到基因組DNA的問題,進而提供一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法。本發明解決其技術問題所採用的方案是首先將大豆分離蛋白與TE緩衝液充分混合製成TE混合液,然後加入混合液二倍體積的異硫氰酸胍裂解液,充分混勻,室溫裂解。 加入等體積的酚、氯仿/異戊醇抽提蛋白,離心後上清液中加入等體積的氯仿/異戊醇抽提蛋白,離心後上清液加入等體積的氯仿再抽提蛋白,離心,上清液用異丙醇沉澱,離心,沉澱用乙醇洗滌,室溫晾乾,溶於TE緩衝液中即可基因組DNA的TE溶液。本發明的有益效果是可以從大豆分離蛋白中提取到高質量的適宜於PCR檢測的基因組DNA,操作簡單、耗時短、利於快速檢測。用本發明的方法得到的DNA的濃度為 1558 μ g/ml,DNA 的 OD260/OD28。的值為 1. 666。
具體實施例方式本發明較佳的實施方式是首先將大豆分離蛋白與TE緩衝液充分混合製成TE混合液,然後加入混合液二倍體積的異硫氰酸胍裂解液,充分混勻,室溫裂解。加入等體積的酚、氯仿/異戊醇抽提蛋白,離心後上清液中加入等體積的氯仿/異戊醇抽提蛋白,離心後上清液加入等體積的氯仿再抽提蛋白,離心,上清液用異丙醇沉澱,離心,沉澱用乙醇洗滌, 室溫晾乾,溶於TE緩衝液中即可基因組DNA的TE溶液。所述的TE混合液中大豆分離蛋白為30 80mg,TE緩衝液為120 320 μ L。較佳的範圍為大豆分離蛋白50mg,TE緩衝液200 μ L。所述的異硫氰酸胍裂解液其中50 IOOmM ρΗ 6. 0 8. OTris-HCl ;10 IOOmM ρΗ 8. OEDTA ;5Μ 異硫氰酸胍;1. 3% Triton X-100。較佳的範圍 50mM ρΗ 6. 5Tris-HCl ; 20mMpH 8. OEDTA ;5M 異硫氰酸胍;1. 3% Triton X-100。
所述的室溫裂解時間為20 60min,較佳的裂解時間為30min。所述的酚、氯仿/異戊醇的比例為25 24 1。所述的氯仿/異戊醇的比例為24 1。 所述的洗滌DNA沉澱的乙醇濃度為70 95%,較佳洗滌DNA的乙醇濃度為70%。所述異丙醇的沉澱溫度為-20 30°C,較佳的沉澱溫度為-20°C。所述異丙醇的沉澱時間為20 60min。所述室溫晾乾的時間為10 15min。
權利要求
1.一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,首先將大豆分離蛋白與TE 緩衝液充分混合製成TE混合液,然後加入混合液二倍體積的異硫氰酸胍裂解液,充分混勻,室溫裂解,加入等體積的酚、氯仿/異戊醇抽提蛋白,離心後上清液中加入等體積的氯仿/異戊醇抽提蛋白,離心後上清液加入等體積的氯仿再抽提蛋白,離心,上清液用異丙醇沉澱,離心,沉澱用乙醇洗滌,室溫晾乾,溶於TE緩衝液中即可基因組DNA的TE溶液。
2.根據權利要求1所述的一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,所述的TE混合液中大豆分離蛋白為30 80mg,TE緩衝液為120 320 μ L。
3.根據權利要求1所述的一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,所述的異硫氰酸胍裂解液其中50 IOOmM ρΗ 6. 0 8. OTris-HCl ;10 IOOmM ρΗ 8. OEDTA ; 5Μ 異硫氰酸胍;1. 3% Triton X-IOO0
4.根據權利要求1所述的一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,所述的室溫裂解時間為20 60min。
5.根據權利要求1所述的一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,所述的酚、氯仿/異戊醇的比例為25 24 1。
6.根據權利要求1所述的一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,所述的氯仿/異戊醇的比例為24 1。
7.根據權利要求1所述的一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,所述的洗滌DNA沉澱的乙醇濃度為70 95%。
8.根據權利要求1所述的一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,所述異丙醇的沉澱溫度為-20 30°C。
9.根據權利要求1所述的一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,所述異丙醇的沉澱時間為20 60min。
10.根據權利要求1所述的一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,其特徵在於,所述室溫晾乾的時間為10 15min。
全文摘要
本發明公開了一種大豆分離蛋白基因組DNA的提取方法,本發明的技術方案是首先將大豆分離蛋白與TE緩衝液充分混合製成TE混合液,然後加入混合液二倍體積的異硫氰酸胍裂解液,充分混勻,室溫裂解。加入等體積的酚、氯仿/異戊醇抽提蛋白,離心後上清液中加入等體積的氯仿/異戊醇抽提蛋白,離心後上清液加入等體積的氯仿再抽提蛋白,離心,上清液用異丙醇沉澱,離心,沉澱用乙醇洗滌,室溫晾乾,溶於TE緩衝液中即可基因組DNA的TE溶液。本發明從大豆分離蛋白中提取到高質量的適宜於PCR檢測的基因組DNA,其濃度為1558μg/ml,OD260/OD280的值為1.666。本發明操作簡單、耗時短、利於快速檢測。
文檔編號C12N15/10GK102206628SQ20111008161
公開日2011年10月5日 申請日期2011年4月1日 優先權日2011年4月1日
發明者徐偉麗, 李啟明, 馬鶯 申請人:哈爾濱工業大學