總天麻素及結合天麻素的檢測方法

2023-05-28 11:50:01

專利名稱：：總天麻素及結合天麻素的檢測方法
技術領域：
：本發明涉及一種對天麻素成分的檢測方法，特別是對同時含有游離態和結合態天麻素的被檢品中的總天麻素含量，和/或結合天麻素含量的檢測方法。
背景技術：
：天麻為中國藥典中收載的一種常用中藥，為蘭科植物G"Wro&"e/atoBl.的乾燥塊莖，具有平肝息風止痙之功效，可用於頭痛眩暈，肢體麻木，小兒驚風，癲癇抽搐，破傷風等。以天麻為有效成分的藥物，有單方的天麻製劑(如全天麻膠囊)和複方天麻製劑(如天麻醒腦膠囊、天麻首烏片、天麻丸、大川芎丸等)。迄今，國內外學者已對天麻的化學成分、藥理作用等方面做了大量的研究工作，並逐步建立了天麻藥材的質量控制標準。已有研究表明，天麻素為天麻的活性成分，因此該成分已作為天麻藥材及其製劑的質量控制指標性成分。如，2005版《中國藥典》收載的HPLC法測定天麻藥材和全天麻膠囊中天麻素的含量作為質量控制的方法；張磊等對"複方天麻顆粒"(《安徽醫藥》2006;10(12):919-920)、李洪剛等對"通天口服液"(《中國藥業》2005:14(19):55-56),潘震宇等對"天麻頭風靈片"(《中醫藥導報》2005:ll(5):61-63)等製劑中天麻素含量也分別採用HPLC法進行測定的方法。現有的研究已發現，天麻藥材中化學成分除天麻素(即游離天麻素)夕卜，還含有另一類天麻素與檸檬酸(citricacid)縮合而成的各種酯類成分(王莉"天麻化學物質基礎及質量控制方法研究"，《中國科學院研究生院博士學位論文》p10)，如巴利森苷，巴利森苷B，巴利森苷C等。天麻素與檸檬酸縮合的各種酯類成分可稱為結合天麻素，天麻素和結合天麻素之和即為其所含有的總天麻素。CH^COOR!_C0。R2CH2C0OR3(結合天麻素巴利森苷1^=}12=113=11巴利森苷B:R=R2=R，R3=H巴利森苷C:1^=113=11，R2=H)CHgOHR(天麻素)經本發明人的深入研究發現，在天麻藥材中，結合天麻素的含量遠高於按2005版《中國藥典》的方法直接檢測得到的天麻素(即游離天麻素)的含量。深入的研究還發現，結合天麻素與天麻素可具有相同或相似的藥效活性。例如，天麻素(游離態)和巴利森苷(結合態)對體外模擬腦缺血損傷大鼠腦微血管內皮細胞(BMEC)的保護作用試驗結果已顯示，天麻素和巴利森苷各實驗劑量(12.5，25，50，100，200mg/L)可明顯增強BMEC活力，提高受損內皮細胞(EC)的生存率，促使ECNO分泌增加，表明天麻素和巴利森苷對體外培養的大鼠BMEC缺血損傷均具有一定的保護作用。由於目前的含量檢測及質量控制方法僅能實現對天麻藥材及其製劑中的游離天麻素進行檢測，難以客觀真實地反映天麻藥材及其製劑的內在質量，以及作為在體內發揮藥效作用的全部活性成分的總量，在藥物生產和臨床使用中對實際質量的控制、以及對治療效果及不良反應的掌握和對藥材的合理、節約的利用等方面，都存在明顯的缺陷。
發明內容基於上述情況，本發明將提供一種能對天麻藥材及其製劑中的總天麻素和/或結合天麻素含量進行檢測的方法。本發明所說的總天麻素的檢測方法，是將至少含有結合天麻素成分的被檢品原料經鹼性條件水解後，再檢測其游離態天麻素成分的含量。其中所說的至少含有結合天麻素成分的被檢品原料，是指被檢品原料中可以為只含有結合天麻素成分，也可以是同時含有結合天麻素和天麻素(即游離天麻素)兩類成分。對按本發明上述方式經鹼性水解後含有游離態天麻素成分被檢品的檢測，可以採用目前已有使用和/或報導的各種檢測方法進行，例如可採用如2005版中國藥典附錄VID的高效液相色譜法對該游離態天麻素成分的含量進行檢測。由於結合天麻素是一類由天麻素結構中的-OH與檸檬酸所成的酯類化合物，因此按目前常規方式用溫和的鹼性條件很容易將其水解，得到游離的天麻素成分。例如，在常溫至不超過8(TC的加熱條件，都可以使所說的水解反應順利進行和完成，其中優選的水解溫度為25'C-6(TC。所說的鹼性水解一般在pH大於12的水溶液、稀醇溶液等鹼性溶液中進行，可更有利於水解反應的完全，而在鹼性較弱的條件下進行，則可能導致水解反應的不完全，例如可優選為鹼濃度》0.25mol/L的水解環境。所用的鹼性成分一般可以選擇如氫氧化鈉、氫氧化鉀等常用的鹼金屬氫氧化物。本發明的上述方法在具體實施時，根據被檢品原料的不同情況，可以分別採用下述的不同方式或途徑進行。一種方式是可以對該被檢品原料先用水或能與水混溶的有機溶劑中的至少一種對該至少含有結合天麻素成分的被檢品原料進行提取後，再對提取物進行鹼性水解後，以所得到的水解產物作為被檢品並檢測其中的總天麻素成分含量。此種方式特別適用於被檢品原料的取樣量較大時，先得到其提取物後，可以大大減小被水解物料的體積，有利於後續操作。另一種方式是先對該被檢品原料進行所說的鹼性水解後，再用水或能與水混溶的有機溶劑中的至少一種對水解產物進行提取，以所得到的提取物作為被檢品並檢測其中的總天麻素成分含量。此種方式一般多適用於被檢品原料的取樣量較小時的情況。上述兩種處理方式中所說的能與水混溶的有機溶劑均為包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮的極性有機溶劑，並且均以採用由水與所說的極性有機溶劑組成的混合溶劑為優選。對比試驗的結果顯示，上述兩種不同的處理方式對檢測結果的影響，不存在統計學意義的差異性。以天麻藥材及其製劑中總天麻素的檢測方法為例，本發明上述檢測方法的一種典型過程可按下述方式進行(1)供試品溶液的製備取天麻藥材及其製劑適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加5。/。NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並加5"y。NaOH溶液至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，置5ml具塞試管中，40。C水浴水解2小時，取出，用體積比為3:97的乙腈-水混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調至中性或弱酸性(例如pH57)，加體積比為3:97的乙腈-水混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液；(2)對照品溶液的製備按《中華人民共和國藥典》2005年版一部天麻含量測定項下規定的方法製備，作為對照品溶液；(3)測定方法按《中華人民共和國藥典》2005年版一部天麻含量測定項下規定的方法測定。在本發明上述的水解過程中，由於被檢品原料中的結合天麻素均已被水解成為游離態的天麻素，因此檢測結果即為被檢品原料中以各種狀態存在的總天麻素的含量。而按目前已有使用和/或報導(包括中國藥典)的方法，只能直接檢測到在被檢品原料中以游離態存在的天麻素的含量。因此，由本發明上述方法得到總天麻素成分含量中扣除對未進行上述鹼性水解的該被檢品原料直接檢測得到的天麻素含量，其差值即為該被檢品中的結合天麻素的含量。由此可以理解，本發明的上述檢測方法可以客觀、真實、準確地得到天麻藥材或其各種形式藥物製劑中以不同狀態存在的總天麻素成分的含量，從而為實現在製藥和/或用藥中對藥材原料的內在質量或製劑中全部活性成分含量的控制、掌握，提供了客觀、準確和科學可靠的檢測方法，在保證產品質量，提高藥物療效，減少因活性成分含量不準確可能導致的不利影響，以及對藥材的合理、節約利用並提高其利用率等方面，都具有積極和現實的意義。以下結合實施例的具體實施方式再對本發明的上述內容作進一歩的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例。在不脫離本發明上述技術思想情況下，根據本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均應包括在本發明的範圍內。具體實施例方式實施例1天麻藥材中的總天麻素和結合天麻素含量檢測供試品溶液的製備被檢天麻藥材於8(TC減壓乾燥，粉碎，取粉末(過四號篩)約0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇(按《中國藥典》2005版一部附錄p98稀乙醇的配製方法配製)50ml，稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取續濾液10ml蒸乾，殘渣加體積比(以下均同此)3:97的乙腈-水混合溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並用乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為(游離)天麻素的供試品溶液。再另取上述續濾液10ml，蒸乾，殘渣加5%(w)NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並用5。/。NaOH溶液稀釋至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，置5ml具塞試管中，40'C水解2小時，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為總天麻素的供試品溶液。對照品溶液的製備精密稱取在80'C減壓乾燥1小時的天麻素對照品適量，加流動相製成每lml含50ug的溶液。測定方法按照2005版中國藥典附錄VID規定的高效液相色譜法進行測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0.05%磷酸溶液(3:97)為流動相；檢測波長為220nm。理論板數按天麻素峰計算應不低於5000。分別精密吸取對照品溶液10W與供試品溶液510pl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得游離天麻素、總天麻素和結合天麻素的含量。檢測結果本例被檢藥材樣品(以乾燥品計算)含總天麻素2.85%，天麻素(游離)0.64%，結合天麻素為2.21%(w%)。實施例2:天麻藥材中的總天麻素含量檢測供試品溶液的製備被檢天麻藥材於8(TC減壓乾燥，粉碎，取粉末(過四號篩)約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入5。/。KOH稀乙醇50ml，室溫放置4小時進行水解後，鹽酸調節pH至中性，加熱回流提取3小時，放冷，轉移至100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。對照品溶液的製備、色譜條件與系統適用性試驗均同實施例1。測定法按照2005版中國藥典附錄VID規定的高效液相色譜法測定。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5pl，注入液相色譜儀，測定，計算。檢測結果本例被檢藥材按乾燥品計算，含總天麻素2.87%。實施例3:天麻藥材中游離天麻素、總天麻素和結合天麻素含量的檢測供試品溶液的製備另取一批天麻藥材於80。C減壓乾燥，粉碎，取粉末(過四號篩)約0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50。/。甲醇50ml，稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液作為(游離)天麻素的供試品溶液。再另取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加2%NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並用2%NaOH溶液稀釋至刻度，搖勻，精密吸取該溶液2ml，置5ml具塞試管中，4(TC水解2小時，取出，用甲醇轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調PH至中性或弱酸性，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為總天麻素的供試品溶液。對照品溶液的製備精密稱取在8(TC減壓乾燥1小時的天麻素對照品適量，加甲醇製成每lml含50ug的溶液。測定法按照2005版中國藥典附錄VID規定的高效液相色譜法進行測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八垸基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-磷酸鹽溶液(O.lmol/L磷酸二氫鉀溶液和O.lmol/L磷酸二氫鈉溶液等量混合)-水(10:3:87)為流動相；檢測波長為270nm。理論板數按天麻素峰計算應不低於2000。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5^1，注入液相色譜儀，測定，計算，即得游離天麻素、總天麻素和結合天麻素的含量。檢測結果本例被檢品按乾燥品計算，含天麻素0.29%，總天麻素1.64%，結合天麻素1.35%。實施例4:天麻丸中游離天麻素、總天麻素和結合天麻素的含量檢測供試品溶液的製備將被檢的天麻丸粉碎，取粉末(過四號篩)約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，稱定重量，加熱回流提取4小時，放冷再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，濾過，取續濾液20ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(3:97)混合溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並用乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為(游離)天麻素的供試品溶液。再另取濾液20ml蒸乾，殘渣加l%NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並用ly。NaOH溶液稀釋至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，置5ml具塞試管中，60'C水解2小時，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調PH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為總天麻素的供試品溶液。測定法按照2005版中國藥典附錄VID規定的高效液相色譜法測定。對照品溶液的製備/色譜條件與系統適用性試驗均同實施例1。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各51(V1，注入液相色譜儀，測定，計算，即得游離天麻素、總天麻素和結合天麻素的含量。檢測結果本例被檢品每lg含天麻素0.22mg，總天麻素0.91mg，結合天麻素0.69mg。實施例5:天麻醒腦膠囊中總天麻素的含量檢測供試品溶液的製備取被檢測的天麻醒腦膠囊內容物約0.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入10%NaOH的30%乙醇溶液50ml,室溫放置2小時(水解)，用鹽酸調pH至中性，加熱回流提取3小時，放冷，轉移至100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。測定法按照2005版中國藥典附錄VID規定的高效液相色譜法測定。色譜條件與系統適用性試驗、對照品溶液的製備同實施例1。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5|nl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。檢測結果本例被檢品每粒膠囊含總天麻素3.10mg。實施例6:複方天麻顆粒中總天麻素的含量檢測供試品溶液的製備取被檢測的複方天麻顆粒約2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100ml，稱定重量，加熱回流提取2小時，放冷再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液20ml蒸乾，殘渣加5%NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並用5n/。NaOH溶液稀釋至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，置5ml具塞試管中，4(TC水解2小時，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為總天麻素的供試品溶液。測定法按照2005版中國藥典附錄VID規定的高效液相色譜法測定。色譜條件與系統適用性試驗、對照品溶液的製備同實施例1。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各510pl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。檢測結果本例被檢品每lg含總天麻素1.74mg。實施例7:通天口服液中總天麻素的含量檢測供試品溶液的製備取被檢測的通天口服液5ml，蒸乾，殘渣加8。/。NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並用8。/。NaOH溶液稀釋至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，置5ml具塞試管中，室溫放置(水解)3小時，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為總天麻素的供試品溶液。測定法按照2005版中國藥典附錄VID規定的高效液相色譜法測定。色譜條件與系統適用性試驗、對照品溶液的製備同實施例1。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各510(！1，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。檢測結果本例被檢品每lml含總天麻素0.81mg。實施例8:提取溶劑的選擇和影響取天麻藥材粉末約0.8g，共9份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入水、30%乙醇、稀乙醇、70%乙醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、30%丙酮、30%乙腈各50ml,稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷再稱定重量，分別用相應的提取溶劑補足減失的重量，濾過，取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(3:97)混合溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並用乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為游離天麻素的供試品溶液。再分別另取上述濾液10ml，蒸乾，殘渣加5。/。NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並加5。/。NaOH溶液至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，置5ml具塞試管中，40'C水浴水解2小時，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為總天麻素的供試品溶液。分別按照《中國藥典》2005年版一部天麻含量測定項下規定的方法測定，計算，即得游離天麻素和總天麻素的含量，結果如表1所示。表l提取溶劑的選擇和影響tableseeoriginaldocumentpage11說明(1)結合天麻素=總天麻素-游離天麻素；(2)稀乙醇按《中國藥典》2005版一部附錄98頁稀乙醇的配製方法配製。表1結果表明，用水或含水的乙醇、甲醇、丙酮、乙腈均能較好地提出遊離天麻素和結合天麻素。實施例9:提取方法的選擇和影響取天麻藥材粉末約0.8g，共7份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml,稱定重量，其中，3份樣品分別超聲處理20、40、60分鐘，另4份樣品分別加熱回流提取l、2、3、4小時，上述樣品放冷後再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加乙腈-水(3:97)混合溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並用乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為游離天麻素的供試品溶液。再分別另取濾液10ml，蒸乾，殘渣加5。/。NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並加5。/。NaOH溶液至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，置5ml具塞試管中，40'C水浴水解2小時，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為總天麻素的供試品溶液。按照《中國藥典》2005年版一部天麻含量測定項下規定的方法測定，計算，即得游離天麻素和總天麻素的含量，結果如表2所示。表2提取方法的選擇和影響tableseeoriginaldocumentpage11說明同表l由表2可見，超聲或回流提取均能較好地提出遊離天麻素和結合天麻素，以回流提取2-4小時為佳。實施例10:水解溫度的選擇和影響取天麻藥材粉末約0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取濾液10ml，蒸乾，殘渣加5%NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並加5%NaOH溶液至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，共6份，分別置5ml具塞試管中，於冰箱冷藏(4'C)、25°C、40°C、60°C、80。C、IOO'C放置(水解)2小時，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調pH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為總天麻素的供試品溶液。按《中國藥典》2005年版一部天麻含量測定項下規定的方法測定，計算，即得總天麻素的含量，結果如表3所示。表3水解溫度的選擇tableseeoriginaldocumentpage12由表3結果可見，鹼水解的適宜溫度為4。C-80°C，均能較好地將結合天麻素水解成游離天麻素，其中的最佳水解溫度為25'C-6(TC。實施例11:水解條件的鹼濃度選擇和影響取天麻藥材粉末約1.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇lOOml，稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取濾液10ml，共8份，分別蒸乾，殘渣分別加0.5%、1%、2%、4%、6%、8%、10%、20%NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並加相應的NaOH溶液至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，置5ml具塞試管中，4(TC水浴水解2小時，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調PH至中性或弱酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為總天麻素的供試品溶液。按照《中國藥典》2005年版一部天麻含量測定項下規定的方法測定，計算，即得總天麻素的含量，結果如表4所示。表4水解條件的鹼濃度選擇和影響tableseeoriginaldocumentpage12由表4結果可見，鹼濃度為》1%(或》0.25mol/L)，溶液pH均大於12的條件下，都能很好地將結合天麻素水解成游離天麻素。實施例12:水解時間的選擇和影響取天麻藥材粉末約0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取濾液10ml，蒸乾，殘渣加P/。NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並加l%NaOH溶液至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，共5份，分別置5ml具塞試管中，於4(TC放置(水解)0.5、1、2、4、8小時，取出，用乙腈-水(3:97)混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調pH至中性或酸性，加乙腈-水(3:97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為總天麻素的供試品溶液。另取濾液10ml，2份，蒸乾，殘渣分別加5。/。NaOH和10。/。NaOH溶液溶解，同法製備供試品溶液。按照《中國藥典》2005年版一部天麻含量測定項下規定的方法測定，計算，即得總天麻素的含量，結果如表5所示。表5水解時間的選擇和影響tableseeoriginaldocumentpage13由表5結果可見，鹼水解的適宜時間為0.5-8小時。進一步研究還發現，本發明方法中對被檢品原料的水解溫度、鹼濃度和水解時間三者可相互關聯和配合。例如，採用較低濃度的鹼水解時，可通過延長水解時間和/或提高水解溫度使結合天麻素水解完全。如，採用0.5%NaOH室溫放置過夜(約20小時)的水解效果，可與在5%NaOH溶液中室溫水解2小時的效果相當。本發明所述的檢測方法，按照中藥質量標準分析方法驗證指導原則，對線性關係、穩定性、精密度、重現性、加樣回收率等進行考察，結果均符合要求。此外，以結合天麻素的巴利森苷純品作為對照，採用上述實施例1的方法進行水解後，檢測其天麻素含量。檢測結果顯示，實際測得的天麻素量為理論計算量的98.6%，表明本發明採用上述的鹼水解方式對結合天麻素的水解是徹底和完全的，建立在此基礎上的總天麻素檢測方法是可行的，檢測結果的準確性具有足夠的可信度。權利要求1.總天麻素的檢測方法，其特徵是將至少含有結合天麻素成分的被檢品原料經鹼性條件水解後，再檢測其中的游離態天麻素成分的含量。2.如權利要求1所述的總天麻素的檢測方法，其特徵是所說的鹼性水解的溫度為常溫至不超過8(TC的加熱條件。3.如權利要求2所述的總天麻素的檢測方法，其特徵是所說的鹼性水解的溫度為25°C-60°C。4.如權利要求1所述的總天麻素的檢測方法，其特徵是所說的鹼性水解為在pH值大於12的鹼性溶液中進行。5.如權利要求1至4之一所述的總天麻素的檢測方法，其特徵是所說的至少含有結合天麻素成分的被檢品原料包括天麻藥材或其提取物，以及含有天麻藥材或其提取物的製劑，該被檢品原料先用水或能與水混溶的有機溶劑中的至少一種對該至少含有結合天麻素成分的被檢品原料進行提取後，再對提取物進行鹼性水解後，以所得到的水解產物作為被檢品並檢測其中的總天麻素成分含量，所說的能與水混溶的有機溶劑為包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮的極性有機溶劑。6.如權利要求5所述的總天麻素的檢測方法，其特徵是所說的對被檢品原料的提取採用由水與所說的極性有機溶劑組成的混合溶劑。7.如權利要求1至4之一所述的總天麻素的檢測方法，其特徵是所說的至少含有結合天麻素成分的被檢品原料包括天麻藥材或其提取物，以及含有天麻藥材或其提取物的製劑，先對該被檢品原料進行所說的鹼性水解後，再用水或能與水混溶的有機溶劑中的至少一種對水解產物進行提取，以所得到的提取物作為被檢品並檢測其中的總天麻素成分含量，所說的能與水混溶的有機溶劑為包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮的極性有機溶劑。8.如權利要求7所述的總天麻素的檢測方法，其特徵是所說的對被檢品的提取採用由水與所說的極性有機溶劑組成的混合溶劑。9.一種天麻藥材及其製劑中總天麻素的檢測方法，其特徵是按下述方式進行(1)供試品溶液的製備取天麻藥材及其製劑適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取續濾液10ml，蒸乾，殘渣加5。/。NaOH溶液溶解，轉移至10ml量瓶中，並加5。/。NaOH溶液至刻度，搖勻，精密吸取該溶液lml，置5ml具塞試管中，40'C水浴水解2小時，取出，用體積比為3:97的乙腈-水混合溶液轉移至10ml量瓶中，用鹽酸調pH至中性或弱酸性，加體積比為3:97的乙腈-水混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液；(2)對照品溶液的製備按《中華人民共和國藥典》2005年版一部天麻含量測定項下規定的方法製備，作為對照品溶液；(3)測定方法按《中華人民共和國藥典》2005年版一部天麻含量測定項下規定的方法測定。10.結合天麻素的檢測方法，其特徵是按權利要求1所述的方法由至少含有結合天麻素成分的被檢品原料經鹼性條件水解後得到的含有總天麻素成分的被檢品進行檢測後，從得到的總天麻素成分含量中扣除對未進行所說鹼性水解的該被檢品原料直接檢測得到的天麻素含量，即為結合天麻素的含量。全文摘要總天麻素及結合天麻素的檢測方法。將至少含有結合天麻素成分的被檢品原料經鹼性條件水解後，再檢測其游離態天麻素成分的含量，即為被檢品原料中包括游離天麻素和結合天麻素在內的總天麻素含量。由總天麻素中扣除該被檢品按現行方法檢測得到的游離天麻素後，即為該被檢品中結合天麻素的含量。該檢測方法可以真實、準確地得到被檢品中所含的全部天麻素成分含量，為實現在製藥和/或用藥中對原料或製劑中天麻素成分含量客觀、準確地進行檢測和質量控制提供了可靠的方法，以利保證產品質量，提高藥物療效並減少因活性成分含量不準確所可能導致的不利影響。文檔編號G01N1/28GK101169355SQ200710050639公開日2008年4月30日申請日期2007年11月28日優先權日2007年11月28日發明者劉雲華,劉玉紅,易進海,燕陳,黃志芳申請人:四川省中醫藥科學院