一種簡捷測定魚鰓中芘的同步螢光法的製作方法

2023-05-28 08:53:11 1

專利名稱：一種簡捷測定魚鰓中芘的同步螢光法的製作方法
技術領域：
本發明涉及環境樣品中多環芳烴的分析檢測方法，具體是測定魚鰓中芘的同步螢光法。
背景技術：
水環境中普遍存在多環芳烴(PAHs)。芘由於具有中等分子量和共致癌性而被作為代表性PAHs化合物。也因為環境介質中芘含量常常與PAHs總量有良好的相關性特徵，芘成為相關研究中經常使用的模式化合物之一。在江河中，由於魚是生態環境中重要的食物鏈，又是人類的主要食物源之一，因此，研究有機汙染物在魚體內的富集與釋放行為，可為生態風險性評價提供重要依據。而魚鰓是有效反映水體汙染、魚吸收富集情況的組織器官。鰓是較複雜的有機體，萃取分離後仍可存在大量影響PAHs測定的幹擾物質，進ー步淨化的過程是必不可少的。我國國家標準方法GB13198-91為水質中6種PAHs測定方法，其前處理是傳統的液-液萃取法。樣品前處理是一重要技術環節，包括富集及純化、除幹擾技術等。對於固體樣品(包括生物樣品)常採用的富集、提取技術是索氏法萃取、超聲萃取、快速溶劑萃取法(ASE)，以提取樣品中有機組分。即對樣品進行低溫乾燥、研磨後，選擇不同有機溶劑如正己烷/ ニ氯甲烷、正己烷/丙酮進行萃取。上述提取液須進行浄化，即經矽膠、氧化鋁、凝膠色譜法、弗羅裡娃土(Florisil)和C18等淨化以除幹擾。多環芳烴(如芘)的測定方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法、色譜-質譜聯用法、薄層色譜-螢光光度法等。氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)方法是分析複雜混合物的有效方法之一。生物組織樣品中PAHs測定方法除了有固定波長螢光方法外，還有GC-MS等方法。採用經典、傳統的GC-MS等方法對魚鰓組織中芘進行測定吋，實驗環節多、儀器複雜、耗時、成本高。

發明內容
本發明的目的就是提供ー種快速、簡便、有效測定魚鰓中芘的同步螢光法。本方法選擇彩鯉(Cyprinus carpio var. color)魚觸作為吸收載體，以花作為代表性PAHs汙染物(被吸收物)，採用魚鰓冷幹-研磨-快速溶劑萃取-萃取液浄化、旋蒸、正己烷定容-同步螢光法測定(EX334. 5ηπι/Δ λ 50nm)分析步驟，快速有效、靈敏度、回收率高、儀器相對簡單、分析成本低。特別適宜於環境分析與監測。這ー分析方法的拓展了同步螢光方法在生物組織中多環芳烴的測定應用範圍，推廣了同步螢光法的應用，填補相關研究空白。屬技術應用推廣性方面的創新性、實用性研究，具有較重要的環境科學理論和環境保護實踐意義。本發明的方法包括下述步驟I.待分析魚鰓樣品經過冷幹、研磨、萃取、浄化前處理後，再旋蒸濃縮至近幹，接著用正己燒定容6ml備測。2.同步螢光法分析測定
(I)制定標準曲線以正己烷為溶剤，配製濃度範圍為I 1000 μ g/L (彡8個濃度點)的芘標準溶液，此濃度範圍內線性關係很高。制定標準曲線方程。選擇優化的同步螢光法測定參數(Λ入=50nm,EX = 334. 5nm)對芘標準系列進行同步螢光法測定。相關光譜圖可參見圖I、圖2。(2)分析測定樣品。採用同步螢光法(SFS)測定待測樣品，根據標準曲線方程、樣品同步螢光強度定量計算樣品芘含量。本發明與現有技術相比具有下述優點a.採用同步螢光法，與現有方法(如GC-MS方法)相比，儀器設備相對簡單，易操作，分析測定成本降低。b.根據優化的同步螢光法對魚鰓中芘進行測定，相對現有傳統、經典技術方法GC-MS方法，本發明的方法回收率高。c.選用經過優化同步螢光測定參數Λ λ 50nm、EX334. 5nm，採用同步螢光光譜法測定正己烷中芘，本方法標準曲線方程線性提高，線性相關係數達到O. 9992。與普通螢光法相比，本方法散射光幹擾少，提高了選擇性、檢出限低。


圖I是正己烷溶液中O. 6mg/L芘激發/發射螢光光譜圖2是正己烷溶液中芘的同步螢光光譜圖3是芘標準曲線(正己烷溶液中)
具體實施例方式I.魚鰓樣品前處理(冷幹、研磨、萃取、淨化)從20_100ppb芘暴露水池中取出6尾魚，頭部擊昏，放血後迅速解剖取魚鰓，逐片取鰓，兩側鰓合併，所取魚鰓經24小時冷幹後，在瑪瑙研缽中與3克無水硫酸鈉混合研磨至粉狀。將上述粉狀樣品置入ASE柱中，採用快速溶劑萃取儀(ASE)提取魚鰓中芘。ASE提取條件 溫度125V (加熱5min);壓力1500psi ;靜態提取時間=IOmin ;循環次數2次；萃取用溶劑為正己烷ニ氯甲烷(I I)。正己烷、ニ氯甲烷均為分析試劑，重蒸後用。ASE萃取後，旋轉蒸發上述萃取液。得到的濃縮液經過矽膠層析柱，先後用正己烷、正己烷ニ氯甲烷(3 2)洗脫層析柱，收集正己烷ニ氯甲烷(3 2)洗脫液，再旋蒸濃縮至近幹，接著用正己燒定容至6ml備測。2.同步螢光法分析測定(I)制定標準曲線以正己烷為溶剤，配製各種濃度(1，2，4，6，8，10，20，40，60，80，100，200，400，600，800,1000yg/L)的芘標準溶液，制定標準曲線方程(見表I)。芘的同步螢光法測定參數，Δ λ :50nm, EX :334. 5nm, slit 2. 5nm, speed :300nm/mino表I芘標準曲線方程
權利要求
1.一種簡捷測定魚鰓中芘的同步螢光法，其特徵在於包括下述步驟 a.魚鰓樣品經過冷幹、研磨、萃取，提取液浄化後，再經旋蒸濃縮至近幹，接著用重蒸的正己烷定容濃縮液以備測。
b.採用同步螢光法對芘標準系列及備測樣品進行測定。以正己烷為溶劑，制定芘標準曲線，根據標準曲線方程及樣品同步螢光強度進行定量計算。
2.根據權利要求I所述的ー種快速測定魚鰓中芘的同步螢光法，其特徵在於所述的用於待測的樣品用重蒸的正己烷定容至6毫升。
3.根據權利要求I所述的ー種快速測定魚鰓中芘的同步螢光法，其特徵在於選擇測定峰波長為EX334. 5nm。
4.根據權利要求I所述的ー種快速測定魚鰓中芘的同步螢光法，其特徵在於選△λ =50nmo
5.根據權利要求I所述的ー種快速測定魚鰓中芘的同步螢光法，其特徵在於同步螢光法芘測定濃度範圍為I 1000微克/升。
全文摘要
本發明公開了一種簡捷測定魚鰓中芘的同步螢光法，該方法先將魚鰓樣品進行冷幹、研磨、萃取、淨化前處理後，旋蒸濃縮至近幹，接著用正己烷定容備測。以正己烷為溶劑，配製濃度範圍為1～1000μg/l的芘標準溶液，測定/同步波長為EX334.5nm/Δλ50nm，對芘標準系列及定容好的待測樣品進行同步螢光法測定，制定標準曲線方程，根據標準曲線方程等對待測樣品進行定量計算；本發明具有下述優點(1)採用同步螢光法進行測定，儀器設備相對簡單，易操作，測定成本降低。(2)採用同步螢光法對魚鰓中芘進行測定，回收率高；(3)EX、Δλ選用優化測定參數，提高了測定選擇性，標準曲線方程線性高，檢出限低。
文檔編號G01N21/64GK102914523SQ201110223018
公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月4日 優先權日2011年8月4日
發明者劉先利, 陶澍 申請人:劉先利