3』硫代-2』脫氧核糖-3』硝基吡咯亞磷醯胺單體及其合成方法和應用的製作方法

2023-05-28 01:14:06

專利名稱：3』硫代-2』脫氧核糖-3』硝基吡咯亞磷醯胺單體及其合成方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，具體涉及3』硫代-2』脫氧核糖-3』硝基吡咯亞磷醯胺單體及其合成方法和應用，化學基團修飾的硫代-2』脫氧核糖_3』硝基吡咯亞磷醯胺分子可以用於固相核酸合成的單體原料，其固相合成寡核苷酸產物除了具有傳統寡核苷酸的生物學性能外，還具有被化學切割的性能，可以用於核酸、蛋白質等生物大分子的檢測。
背景技術：
在分子生物學研究中，DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎，對生命科學至關重要。隨著人類基因組計劃和各種模式生物基因組計劃的開展和完成，使人類步入了後基因時代，分子生物學相關學科得到了迅猛的發展。從基因水平上認識生命的差異，疾病發生、發展的規律，以及藥物與生命體的相互作用將成為可能。在基礎研究方面，研究疾病基因的遺傳規律，克隆致病基因；在應用方面，直接尋找疾病的易感基因突變位點， 可以獲得有關與該疾病相關基因型的信息。通過DNA序列信息的分析可以為理解生命的起源、疾病發生、以及個體化醫療等提供有用的相關核酸序列信息。對DNA序列的分析包括位點(如單鹼基多態性、甲基化、突變等)，片段序列(如片段重複、缺失等)、全基因組序列分析和DNA蛋白質相互作用。針對這些不同的分析對象，目前已有各種不同的方法相應方法被廣泛應用，而這些方法中有許多涉及到核酸需要被切割的手段。如在橋式PCR擴增中需要對一條鏈進行切除，以獲得單鏈DNA模板用來進行核酸分析；在DNA與蛋白質的序列特異性識別和相互作用檢測中，需要藉助核酸片段是否能夠切割來判斷雙鏈DNA是否與蛋白質發生了結合，從而達到非標記檢測蛋白的目的；在基於標記螢光的高通量測序過程中，需要將每次測序中的標識螢光分子切除，以便順利進行下一個位置鹼基的序列測定等。要實現這些不同的切割的手段，目前需要針對核酸片段進行特殊的修飾，或者採用特定的酶切或者化學切割方法，這些方法中要麼合成難度大，或者難於找到合適的切割試劑而給研究工作帶來困難。本發明製備的是3』硫代-2』脫氧核糖-3』硝基吡咯亞磷醯胺分子可以作為固相核酸合成的基本原料，通過廣泛使用的核酸合成儀在合成的序列片段中很方便的引入硫代-2』脫氧核糖_3』硝基吡咯來實現核酸序列分析中切割方法的實現。由於引入的硫代-2』脫氧核糖_3』硝基吡咯(簡寫成「M」)具有通用鹼基的性能，能很好的和4種鹼基配對，在任何位置均能滿足與四個鹼基的雜交效果，且比其它通用鹼基具有更平均的雜交溫度(Bergstrom, D. E.，et al. Synthesis, structure, and deoxyribonucleic acid sequencing with a universal nucleoside :1-(2' -Deoxy-β -D-rinbofuranosyl)-3-nit ropyrrole. J. Am. Chem. S0C. 1995，117，1201-1209)，能夠在核酸分析中得到廣泛的應用。

發明內容
解決的技術問題本發明的目的是提供3』硫代-2』脫氧核糖-3』硝基吡咯亞磷醯胺單體及其合成方法和應用，為新的核酸序列分析技術所能利用的試劑，為新核酸序列分析技術的低成本、高速度和高通量奠定基礎。技術方案3』硫代-2』脫氧核糖-3』硝基吡咯亞磷醯胺單體，結構為
權利要求
1.3』硫代-2』脫氧核糖-3』硝基吡咯亞磷醯胺單體，其特徵在於結構為
2.權利要求1所述的3』硫代-2』脫氧核糖-3』硝基吡咯亞磷醯胺單體的合成方法，其特徵在於具有如下結構
3.權利要求1所述3』硫代-2』脫氧核糖_3』硝基吡咯亞磷醯胺單體在核酸、蛋白質生物大分子檢測中的應用。
全文摘要
3』硫代-2』脫氧核糖-3』硝基吡咯亞磷醯胺單體及其合成方法和應用，其結構為 。本發明的最大優點是作為核酸固相合成的基本原料可以很方便地在寡核苷酸片段中引入一個或者多個硫-磷橋鍵，合成新型的寡核苷酸序列及其探針。
文檔編號C07H19/044GK102516337SQ201110341249
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月2日 優先權日2011年11月2日
發明者王文捷, 肖鵬峰, 謝宏梅, 錢曉婷, 陸祖宏 申請人:東南大學