一種人類y染色體27個str基因座的螢光標記複合擴增試劑盒的製作方法
2023-06-13 12:51:46 1
一種人類y染色體27個str基因座的螢光標記複合擴增試劑盒的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種人類Y染色體27個STR基因座的螢光標記複合擴增試劑盒，可在單個多重反應中同時擴增27個Y染色體STR基因座（包括24個低突變率Y染色體STR基因座和3個高突變率Y染色體STR基因座）。本發明通過設計獨特的基因座排布方式及特異性的引物序列，將27個基因座分為4組，每組分別標記不同的螢光標記。本發明的複合擴增系統溫度耐受範圍廣、檢材適應性強、無關及近親男性個體識別力高。
【專利說明】一種人類Y染色體27個STR基因座的螢光標記複合擴增試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種男性個體鑑定檢測試劑盒，特別涉及一種可應用於法醫個體識另Ij、親權鑑定及DNA家譜構建等方面的人類Y染色體27個STR基因座的螢光標記複合擴增試劑盒。
【背景技術】
[0002]STR遺傳標記又稱微衛星DNA,其廣泛存在於原核及真核基因組中，是一類由2~6個核苷酸為重複單位組成的長達幾十個核苷酸的重複序列。不同數目的核心序列呈串聯重複排列，而呈現出長度多態性。根據兩端保守性序列，設計引物，進行PCR，然後通過聚丙烯醯胺、瓊脂糖凝膠電泳、毛細管電泳等檢測STR遺傳標記的多態性。
[0003]Y染色體STR遺傳標記是指存在於人類Y染色體非重組區域的短串聯重複序列。目前，以各種形式確認並命名的Y-STR基因座已有220多個，將已發現的Y染色體STR遺傳標記與常染色體STR遺傳標記相比，大多數Y染色體STR遺傳標記具有複雜重複結構，含有兩種或兩種以上的不同重複單位，群體中個體的核心重複序列或重複次數不同，形成群體遺傳多態性。Y染色體STR遺傳標記具有男性特有、父系遺傳及單倍型遺傳等三大特徵，將其獨特性與STR位點分型檢測的優越性相結合，可進行法醫學個體識別、親子鑑定及DNA家譜構建等。
[0004]目前，市面上主流試劑盒有AmpFlSTR Yfiler, PowerPlex Y螢光檢測試劑盒，基因座數量分別為17個、12個，而且以上試劑盒均不包含高突變率基因座，故該類試劑盒只能在一定程度上應用於男性個體的家系排查，而對於有一定血緣關係的男性個體則沒有鑑別能力。
[0005]由於Y染色體STR遺傳標記之間的連鎖遺傳關係，因此Y染色體STR遺傳標記的個體識別率和排除概率不能利用相互獨立的遺傳標記之間的乘法原則。為提高的個體識別能力，就必須不斷的增加新的Y染色體STR遺傳標記，組成高複合程度的擴增系統，但是，隨著複合擴增系統中引物數量的增加，不同基因座引物之間的相互幹擾也越來越嚴重，反應體系的動力學變得越來越複雜，因此探索不降低特異性及靈敏度的情況下複合更多的STR基因座，對於法醫個體識別至關重要。另一方面，由於Y染色體STR遺傳標記獨特的特徵，在實際應用中只能用於男性個體的家系排查，但無法區分同一家系中的有血緣關係的男性個體。因此，不斷增加新的Y染色體STR遺傳標記組成高複合程度的復擴系統的同時，亟需向系統中添加高突變率的Y染色體STR遺傳標記，同時達到提高無關男性以及近親男性之間的個體鑑別力的雙重要求。
【發明內容】
[0006]本發明的目的在於提供一種人類Y染色體27個STR基因座的螢光標記複合擴增試劑盒。
[0007]本發明所採取的技術方案是:
一種人類Y染色體27個STR基因座的螢光標記複合擴增試劑盒，試劑盒含有用於特異性擴增27個STR基因座的27組引物對，27個STR基因座為DYS549、DYS3891、DYS389I1、DYS439、DYS392、DYS576、DYS19、DYS391、DYS456、DYS635、DYS533、DYS438、DYS527ab、DYS449、DYS481、DYS437、DYS390、DYS448、H4、DYS458、DYS393、DYS570、DYS385ab、DYS444和 DYS643。
[0008]27個STR基因座對應的引物對如下表所示:
【權利要求】
1.一種人類Y染色體27個STR基因座的螢光標記複合擴增試劑盒，其特徵在於:所述試劑盒含有用於特異性擴增27個STR基因座的27組引物對，27個STR基因座為DYS549、DYS3891、DYS389I1、DYS439、DYS392、DYS576、DYS19、DYS391、DYS456、DYS635、DYS533、DYS438、DYS527ab、DYS449、DYS481、DYS437、DYS390、DYS448、H4、DYS458、DYS393、DYS570、DYS385ab、DYS444 和 DYS643。
2.根據權利要求1所述的螢光標記複合擴增試劑盒，其特徵在於:27個STR基因座對應的引物對如下表所示:
3.根據權利要求1或2所述的螢光標記複合擴增試劑盒，其特徵在於:每個STR基因座中的至少一條引物的5』端標記有螢光染料。
4.根據權利要求3所述的螢光標記複合擴增試劑盒，其特徵在於:27個STR基因座的引物對使用至少4種不同的 螢光染料標記。
5.根據權利要求4所述的螢光標記複合擴增試劑盒，其特徵在於:27個STR基因座的引物對使用4種不同的螢光染料標記，根據標記的螢光染料不同分為4組，分組情況如下: 第一組:DYS549、DYS3891、DYS439、DYS389I1、DYS392、DYS576、DYS19 ； 第二組:DYS391、DYS635、DYS456、DYS533、DYS438、DYS527ab、DYS449 ； 第三組:DYS481、DYS437、DYS390、DYS448、H4、DYS458 ； 第四組:DYS393、DYS570、DYS385ab、DYS444、DYS643。
6.根據權利要求5所述的螢光標記複合擴增試劑盒，其特徵在於:第一組引物對標記的螢光染料為6-FAM ;第二組引物對標記的螢光染料為HEX ;第三組引物對標記的螢光染料為TAMRA ;第四組引物對標記的螢光染料為ROX。
7.根據權利要求1、2、4~6任意一項所述的螢光標記複合擴增試劑盒，其特徵在於:Y染色體STR基因座的擴增採用聚合酶鏈式反應，其擴增產物的檢測採用毛細管電泳或聚丙烯醯胺、瓊脂糖凝膠電泳。
8.根據權利要求7所述的螢光標記複合擴增試劑盒，其特徵在於:聚合酶鏈式反應的擴增程序為:95V 2min ；94°C 30S、60°C lmin、65°C lmin，共 29 個循環；72°C 1min0
【文檔編號】C12Q1/68GK104164504SQ201410381227
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年8月5日 優先權日:2014年8月5日
【發明者】鄭衛國, 梅興林, 陳拓, 葛斌文, 許峻榮, 葛海鵬, 郭育林 申請人:廣東華美眾源生物科技有限公司, 無錫中德美聯生物技術有限公司