一種用於檢測阪崎腸桿菌的分子馬達生物傳感器試劑盒的製作方法
2023-06-13 01:02:26 1
專利名稱:一種用於檢測阪崎腸桿菌的分子馬達生物傳感器試劑盒的製作方法
技術領域:
本發明是關於動物源性食品微生物快速檢測技術的一種。
背景技術:
傳統的病原菌檢測方法要求對每個檢驗項目進行非選擇性增菌、選擇性增菌、分離、篩選和鑑定等步驟,一般需要6天才能出具檢測報告,嚴重影響貨物的品質和貨架壽命。一些新的技術如PCR技術、免疫學檢測技術、生物晶片技術等檢測方法仍依賴於傳統的檢測步驟,即需要進行增菌,耗時耗力,完成一次檢測通常需要幾天的時間。這樣不僅增加了實驗室的工作量,而且也不利於食品工業中生產流程的監測、終產品的質量控制以及政府部門對食品安全的管理和控制。由於進出口食品的大量增加,因此急需可靠有效的快速檢測方法,縮短檢測時間,促進我國食品的進出口貿易。
發明內容
以受控分子馬達技術為核心,集成核酸探針識別、螢光探針標記與檢測等技術,建立了一個全新概念的快速檢測技術體系。利用ATP酶作為載體對目標物進行檢測具有靈敏度高、特異性強、快速的特點。分子馬達連接上特異的核酸探針,可以實現對特定食品微生物的快速、特異性、高通量的檢測。本發明可將檢測時間縮短至2天,且檢測靈敏度能達到102CFU/ml,滿足現有的食品微生物檢測範圍。
附圖1為分子馬達生物傳 感器模式圖(其中a、b、c、α、β、δ、Υ、ε均為ATP合酶亞基),I為ε亞基抗體,2為鏈黴親和素(Strptavidin),3為N-biotin, 4為ITS探針,5為阪崎腸桿菌單鏈DNA。附圖2為chix) ITS對不同種菌株的檢測結果,縱坐標表示螢光值,橫坐標表示檢測的樣本,其中I為水,2為阪崎腸桿菌,3為副溶血性弧菌,4為大腸桿菌,5為沙門氏菌,6為霍亂弧菌。
具體實施例方式根據阪崎腸桿菌ITS基因設計特異性核酸探針5』 -actctgacacaccgcgcattcctg,其中探針的5』用生物素進行標記。將該探針通過生物素抗體連接在分子馬達上面,利用分子馬達生物傳感器即可對待測樣本的DNA進行檢測,當樣品為阪崎腸桿菌DNA時,檢測體系的螢光值會發生明顯的變化,通過這一變化即可判斷樣本為陽性。為此,我們設計了一個試劑盒,可以方便、快速對食品中的阪崎腸桿菌進行檢測。試劑盒組成:
權利要求
1.異性核酸探針與FtlF1-ATP合酶連接的方式:在FtlF1-ATP合酶的ε亞基上依次連接ε亞基抗體、生物素、鏈黴親和素、生物素標記的ITS探針。
2.劑盒檢測體系的反應條件:37°C恆溫搖床中溫育lOmin。
3.成buffer、啟動buffer、PBS的配方。合成buffer:甘油20%,氯化鎂5mM, Tricine50mM,憐酸氫二鉀 5mM ;啟動 buffer:ADP (1.6mM):上述合成 buffer = 1: 3 (v/v) ;PBS:137mM氯化鈉, 2.7mM氯化鉀,IOmM磷酸氫二鈉,2mM磷酸二氫鉀。
全文摘要
一種用於檢測阪崎腸桿菌的分子馬達生物傳感器試劑盒屬於動物源性食品微生物快速檢測領域,主要解決傳統檢測方法時間過長(5~6天)。本發明的核心技術是利用載色體Chromatophore上的F0F1-ATPase分子馬達生物傳感器,F0F1-ATP合酶由於能快速地旋轉,通過旋轉它建立了催化位點與質子轉運之間的偶聯。首先在ATP合酶的ε亞基上連接ITS探針,將待測樣品和陰性對照分別與生物傳感器結合後,比較其催化ATP合成10分鐘後的ATP產生量,ATP合成的多寡可以通過環境中H+的量進行測量,而H+的多寡通過F-DHPE所體現的螢光強度大小來獲得。本試劑盒可對待測樣本中的阪崎腸桿菌進行快速、靈敏、高通量的檢測。
文檔編號C12Q1/68GK103088118SQ201210409160
公開日2013年5月8日 申請日期2012年10月23日 優先權日2012年10月23日
發明者張捷, 馬貴平, 周琦, 劉國傳, 張惠媛, 李冰玲, 盧曉宇, 劉巖, 顧德周, 汪琦, 張昕, 王佩榮, 樂加昌, 陳廣全 申請人:北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心, 北京市檢驗檢疫科學技術研究院