馬尾連提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用的製作方法

2023-07-02 08:17:26 2

專利名稱：：馬尾連提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種馬尾連提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
：肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，是我國位居第二的癌症"殺手"，常見於中年男性。因其惡性度高、病情進展快，病人早期一般沒有什麼不適，但一旦出現症狀就診，就己經屬於中晚期。故肝癌的治療難度大，一般患者發病後生存時間僅為6個月，人稱"癌中之王"。根據調查結果表明，目前男性前三位的新發癌症分別是肺癌、結腸癌和鼻咽癌，女性則是乳癌、結腸癌及肺癌，充分說明了肺癌和結腸癌在新發癌症群中的危害性。從植物中尋找高效低毒的抗癌藥物，成為國內外抗癌藥物研究的重點。有效的抗癌化合物和中草藥有效部位的抗癌複方製劑都具有重要的臨床價值。馬尾連，《中國藥物植物志》中稱為多葉唐松草，又稱為馬尾黃連、金絲黃連。多葉唐松草(77acicz^w歷t&Wh'5w'w'/2)為毛莨科植物，產於雲南大理、賓川一帶。生於海拔2500米山坡草地。根據《中國植物志》記載，馬尾連在民間被用於治療痢疾、腸炎、急性腸炎、急性咽喉炎等症。馬尾連在製備抗腫瘤藥物中的應用未見有報導。
發明內容本發明的目的是提供馬尾連提取物的一種新用途。本發明所提供的馬尾連提取物的用途是馬尾連提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用；所述馬尾連提取物按照如下方法製備是用水和/或有機溶劑作為提取劑，從馬尾連中提取得到馬尾連提取物。其中，所述有機溶劑具體可為甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。所述提取劑具體可為體積百分含量為95%的乙醇水溶液。所述提取可為回流提取。所述提取的溫度可為60-100°C。所述提取中，至少提取一次，每次提取的時間為l-4小時。所述腫瘤可為肝癌、結腸癌或肺癌。根據如上方法所製備的預防和/或治療腫瘤藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學介導的方法導入機體如肌肉、皮內、皮下、靜脈、黏膜組織；或是被其他物質混合或包裹後導入機體。需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。所述載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、溼潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。如上製備的預防和/或治療腫瘤藥物可以製成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規方法製備。上述預防和/或治療腫瘤藥物的用量一般為200-800mg馬尾連提取物/kg體重/天，療程為10至15天。本發明的製備馬尾連提取物的方法簡單、成本低廉。實驗證明，本發明的馬尾連提取物能夠有效的抑制人腫瘤細胞的生長，如人肝癌、結腸癌或肺癌細胞。因此本發明所提供的馬尾連提取物對製備抗腫瘤藥物，尤其是抗肝癌、肺癌、結腸癌藥物具有重要的意義。具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。實施例l、馬尾連提取物的製備取馬尾連(北京同仁堂股份有限公司)200g，將其以1:3(馬尾連95%乙醇)的重量份數比與95%乙醇(乙醇水=95:5，體積比)混合，在6(TC條件下回流提取3h，抽濾，收集第一次回流提取液l和濾渣l;將得到的所有濾渣1與95%乙醇混合，95%乙醇的量與第一次相同，在6(TC條件下回流提取3h，收集第二次回流提取液2和濾渣2，並將提取液2與提取液1合併；將得到的所有濾渣2與95%乙醇混合，95%乙醇的量與第一次相同，6(TC回流提取3h，抽濾，收集第三次回流提取液3;將提取液l、提取液2和提取液3合併，將所得的提取液進行真空減壓濃縮、真空乾燥(去除乙醇和水)至恆重，得到11.2g馬尾連提取物。實施例2、馬尾連提取物在抑制腫瘤細胞生長中的應用將對數生長的腫瘤細胞(人肝癌細胞H印G-2、人肝癌細胞BEL-7402、人結腸癌細胞HCT-8、人肺癌細胞A-549)用0.25%的胰蛋白酶消化，然後用含10%(體積百分含量)胎牛血清的DMEM完全培養基懸浮細胞，製成細胞懸液，並分別將各腫瘤細胞稀釋至1.0X10s個/mL，再將其接種至96孔培養板中，每孔200uL，各腫瘤細胞分別接種3個孔，於37"C，5y。C02的培養箱內培養24h;然後傾去各孔培養液。將實施例1製得的馬尾連提取物溶解於DMSO中，然後用DMEM完全培養基進行稀釋，得到馬尾連提取物溶液，使馬尾連提取物的終濃度為50ug/mL，使DMSO的濃度為10%(體積百分含量)。同時設實驗組、對照組和空白組進行實驗實驗組將馬尾連提取物溶液依次分別加入上述腫瘤細胞H印G-2、BEL-7402、HCT-8、A-549的培養孔內，各自接種3個孔，每孔加入200ul;對照組向上述各腫瘤細胞的培養孔內加入含10。/。(體積百分含量)DMSO的DMEM完全培養基，各自接種3個孔，每孔加入200ul;空白組向不含腫瘤細胞的空培養孔內加入含10。/。(體積百分含量)DMS0的200ul的DMEM完全培養基；將以上各組的培養板同時置於37。C、5%C02的培養箱內培養2天。2天後向每孔加入20ul新鮮配製的5mg/ml四甲基偶氮唑鹽(MTT)溶液，並在37t:、5%C02的條件下繼續培養4h;小心棄上清，每孔加入200uLDMSO，室溫放置15-20min，每5min振蕩一次；在酶標儀上測定各孔在波長490nm處的光密度值(OD值)，按公式計算腫瘤細胞生長抑制率。抑制率(％)=1-(OD《驗-OD空白)/(OD對照-OD空白)X100%。實驗設三次重複，結果取平均數。馬尾連提取物對人不同腫瘤細胞H印G-2、BEL-7402、HCT-8、A-549的抑制作用的結果如表1所示。表l、馬尾連提取物對人不同腫瘤細胞的抑制作用tableseeoriginaldocumentpage5馬尾連提取物的對多種腫瘤細胞的抑制作用實驗結果表明(表l)，馬尾連提取物在濃度為50ug/mL時對人肝癌細胞H印G-2、肝癌細胞BEL-7402、結腸癌細胞HCT-8和肺癌細胞A-549均有一定程度的抑制作用，最高可達60%以上。因此，馬尾連提取物可以用於製備抗肝癌、結腸癌、肺癌的藥物。權利要求1、馬尾連提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用；所述馬尾連提取物按照如下方法製備是用水和/或有機溶劑作為提取劑，從馬尾連中提取得到馬尾連提取物。2、根據權利要求l所述的應用，其特徵在於所述有機溶劑為甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。3、根據權利要求l所述的應用，其特徵在於所述提取劑為體積百分含量為95%的乙醇水溶液。4、根據權利要求l-3中任一所述的應用，其特徵在於所述提取為回流提取。5、根據權利要求4所述的應用，其特徵在於所述提取的溫度為60-10(TC。6、根據權利要求4或5所述的應用，其特徵在於所述提取中，至少提取一次，每次提取的時間為l-4小時。7、根據權利要求1至6中任一所述的應用，其特徵在於所述腫瘤為肝癌、結腸癌或肺癌。8、一種馬尾連提取物，所述馬尾連提取物是以體積百分含量為95%的乙醇水溶液作為提取劑，從馬尾連中提取得到的。9、根據權利要求8所述的馬尾連提取物，其特徵在於所述提取為回流提取;所述提取的溫度為60-100°C。10、根據權利要求9所述的馬尾連提取物，其特徵在於所述提取中，至少提取一次，每次提取的時間為l-4小時。全文摘要本發明公開了馬尾連提取物的新用途。該新用途是馬尾連提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用。所述提取物是按照如下方法製備的是用水和/或有機溶劑作為提取劑，從馬尾連中提取得到馬尾連提取物。本發明所提供的馬尾連提取物對製備抗腫瘤藥物，尤其是抗肝癌、肺癌、結腸癌藥物具有重要的意義。文檔編號A61K36/185GK101306094SQ20081011567公開日2008年11月19日申請日期2008年6月26日優先權日2008年6月26日發明者巖劉,向俊鋒,唐亞林,瑋戴,莉譚申請人:中國科學院化學研究所