小鼠腹水的生產加工方法
2023-06-14 07:22:26 1
小鼠腹水的生產加工方法
【專利摘要】本發明公開了一種小鼠腹水的生產加工方法，其步驟如下：將液體石蠟注射入選取好的小鼠腹腔，刺激小鼠的免疫反應；一周後將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去得到單克隆抗體，同時刺激腹膜滲透壓改變，產生含有單克隆抗體的腹水；抽取腹水，將抽好的腹水放在離心管裡，在天平上平衡，然後放進高速冷凍離心機中離心；離心結束後，用移液槍吸取上層油脂，吸完後將腹水慢慢倒入塑料瓶中，瓶底出現帶血絲的沉積物就廢棄；再將瓶底沒有出現帶血絲沉積物的腹水冷凍保存；將冷凍後的腹水取出解凍；解凍後的腹水用紗布過濾後倒入大燒杯中；最後包裝入庫。本發明所得腹水量大、腹水收穫時間短，且製備的腹水中單克隆抗體含量高，且易純化。
【專利說明】小鼠腹水的生產加工方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於抗體製備領域，尤其涉及一種小鼠腹水的生產加工方法。
【背景技術】
[0002] 由於小鼠腹水中含有單克隆抗體，該種抗體具有高特異性和單一生物學功能，可 用於體內的放射免疫顯像和免疫導向治療，因此對小鼠腹水的生產加工方法得到進一步的 研究；目前，誘導小鼠產生腹水的方法已廣為採用，如應用降植烷或不完全福氏佐劑等，但 其缺點是所得腹水量較少、腹水中含有的單克隆抗體含量低，而且腹水收穫時間較長，同時 有可能誘發實體瘤。
【發明內容】
[0003] 本發明為了解決上述現有技術存在的缺陷和不足，提供了一種所得腹水量大、腹 水收穫時間短，且腹水中含有的單克隆抗體含量高、純化方便的小鼠腹水的生產加工方法。
[0004] 本發明的技術方案：一種小鼠腹水的生產加工方法，其步驟如下：
[0005] 1)將液體石蠟注射入選取好的小鼠腹腔，刺激小鼠的免疫反應；
[0006] 2) -周后將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去得到單克隆抗體，同時刺激腹膜滲透 壓改變，產生含有單克隆抗體的腹水；
[0007] 3)抽取腹水，將抽好的腹水放在離心管裡，在天平上平衡，使兩邊離心管裡的腹水 重量相等，然後放進高速冷凍離心機中離心；
[0008] 4)離心結束後，打開離心管管蓋，用移液槍吸取上層油脂，吸完後將淡黃色、透明 的腹水慢慢倒入塑料瓶中，瓶底出現帶血絲的沉積物就廢棄；
[0009] 5)再將瓶底沒有出現帶血絲沉積物的腹水放在-20°c ± 10°C冰箱中冷凍保存； [0010] 6)將冷凍後的腹水取出，放在2 °C -8 °C的冰箱中解凍；
[0011] 7)解凍後的腹水用若干層紗布過濾後倒入大燒杯中；
[0012] 8)最後將過濾好的腹水倒入250ml的量筒裡記數，將記數好的腹水倒入250ml的 塑料瓶中，包裝入庫。
[0013] 優選地，步驟1)中所述選取好的小鼠為6-8周齡、體重大於22g的F1小鼠。
[0014] 優選地，步驟2)中所述接種的雜交瘤細胞數量為3000-5000/鼠，步驟2)中每隻 小鼠可收集5?10ml的腹水。
[0015] 優選地，步驟3)中的離心機設置為1000轉，8分鐘，4°C。
[0016] 優選地，步驟4)中移液槍的容量為1ml，塑料瓶的容量為250ml。
[0017] 優選地，步驟6)中解凍時間為三天，步驟7)中紗布為三層。
[0018] 本發明所得腹水量大、腹水收穫時間短，且製備的腹水中單克隆抗體含量高，每毫 升可達數毫克甚至數十毫克水平，同時腹水中的雜蛋白也較少，便於單克隆抗體的純化。 【具體實施方式】
【權利要求】
1. 一種小鼠腹水的生產加工方法，其特徵在於：其步驟如下： 1) 將液體石蠟注射入選取好的小鼠腹腔，刺激小鼠的免疫反應； 2) -周后將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去得到單克隆抗體，同時刺激腹膜滲透壓改 變，產生含有單克隆抗體的腹水； 3) 抽取腹水，將抽好的腹水放在離心管裡，在天平上平衡，使兩邊離心管裡的腹水重量 相等，然後放進高速冷凍離心機中離心； 4) 離心結束後，打開離心管管蓋，用移液槍吸取上層油脂，吸完後將淡黃色、透明的腹 水慢慢倒入塑料瓶中，瓶底出現帶血絲的沉積物就廢棄； 5) 再將瓶底沒有出現帶血絲沉積物的腹水放在_20°C ±10°C冰箱中冷凍保存； 6) 將冷凍後的腹水取出，放在2 °C -8 °C的冰箱中解凍； 7) 解凍後的腹水用若干層紗布過濾後倒入大燒杯中； 8) 最後將過濾好的腹水倒入250ml的量筒裡記數，將記數好的腹水倒入250ml的塑料 瓶中，包裝入庫。
2. 根據權利要求1所述的一種小鼠腹水的生產加工方法，其特徵在於：步驟1)中所述 選取好的小鼠為6-8周齡、體重大於22g的F1小鼠。
3. 根據權利要求1所述的一種小鼠腹水的生產加工方法，其特徵在於：步驟2)中所述 接種的雜交瘤細胞數量為3000-5000/鼠，步驟2)中每隻小鼠可收集5?10ml的腹水。
4. 根據權利要求1所述的一種小鼠腹水的生產加工方法，其特徵在於：步驟3)中的離 心機設置為1000轉，8分鐘，4°C。
5. 根據權利要求1所述的一種小鼠腹水的生產加工方法，其特徵在於：步驟4)中移液 槍的容量為lml，塑料瓶的容量為250ml。
6. 根據權利要求1所述的一種小鼠腹水的生產加工方法，其特徵在於：步驟6)中解凍 時間為三天，步驟7)中紗布為三層。
【文檔編號】C07K16/00GK104119435SQ201310153080
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2013年4月24日 優先權日:2013年4月24日
【發明者】沈海英 申請人:杭州宏泰生物技術有限公司