一種具有結合糖能力的碳水化合物結合組件及其應用的製作方法

2023-06-08 23:13:26

一種具有結合糖能力的碳水化合物結合組件及其應用的製作方法【專利摘要】本發明公開了一種具有結合糖能力的碳水化合物結合組件及其應用。本發明公開一種蛋白，為如下(1)或(2)所示：(1)SEQIDNo.2所示的多肽；(2)將SEQIDNo.2所示的多肽的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有糖結合能力的蛋白質。本發明公開的CBMUmcel5D及其編碼DNA序列可應用於糖的特異性結合方面。【專利說明】一種具有結合糖能力的碳水化合物結合組件及其應用【
技術領域：
】[0001]本發明涉及一種碳水化合物結合組件及其應用；特別涉及一種具有結合糖能力的碳水化合物結合組件及其應用，屬於生物【
技術領域：
】。【
背景技術：
】[0002]纖維素酶是水解纖維素鏈的β_1，4糖苷鍵的酶的總稱，根據它們對纖維素水解方式的不同分為三類：內切一β-1，4一葡聚糖酶（endo-β-1，4-glucanase,EC3·2·l·4)、外切一β-l，4一葡聚糖酶（exo-β-l，4-glucanase，又叫纖維二糖水解酶cellobiohydrolase,EC3.2.I.91)和β-葡萄糖昔酶（β-glucosidase,EC3.2.1.21)。這三種酶協同作用能將纖維素轉化成葡萄糖（LyndLR,WeimerPJ,vanZylWHjandPretoriusIS.2002.Microbialcelluloseutilization:fundamentalsandbiotechnology.Microbiol.Mol.Biol.Rev.66:506-577.)D大部分纖維素酶由一個或幾個催化功能域和一個或更多個其它的功能域如碳水化合物結合組件（carbohydrate-bindingmodules，CBMs)組成，兩者間由連接肽連接（Shoseyov0,ShaniZ，andLevyI.2006.Carbohydratebindingmodules:biochemicalpropertiesandnovelapplications.Microbiol.Mol.Biol.Rev.70:283-295.)〇[0003]第一個碳水化合物結合組件是1986年在瑞氏木黴（Trichodermareesei)的纖維二糖水解酶I中發現的，最初該結構域被命名為纖維素結合功能域（cellulose-bindingdomain，CBD)，以它能識別和吸附纖維素而命名（VanTilbeurghH，To_eP，ClaeyssensM，BhikhabhaiR.andPetterssonG.1986.LimitedproteolysisofthecellobiohydrolaseIfromTrichodermareesei.FEBSLett.204:223-227)D後來發現該結構域不僅能吸附纖維素，還能識別和吸附植物細胞壁其他的多糖成分，包括幾丁質、β-1，3-葡聚糖、β-1，3-1，4-葡聚糖、木聚糖、甘露聚糖等，還有些碳水化合物結合組件可以結合不可溶的儲存多糖，例如澱粉，所以現在將具有這樣性質的結構域命名為碳水化合物結合組件。碳水化合物結合組件不僅在纖維素酶中被發現，在其他的酶類或蛋白中也有發現，如糖基水解酶、酯酶、果膠酶等。[0004]碳水化合物結合組件一般位於酶的氨基端或羧基端，其大小通常大於30個胺基酸及小於250個胺基酸，所以其分子量一般大於4k道爾頓和小於40k道爾頓。根據胺基酸序列相似性，碳水化合物結合組件被劃分成不同的家族（families)。根據Cazy伺服器（server)(http://afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/)上所列碳水化合物結合組件的最新清單，目前碳水化合物結合組件被分為59個家族。隨著新的酶的發現，同時伴隨著新的家族的碳水化合物結合組件的被發現。一系列未知功能的結構域已經被鑑定為新的碳水化合物結合組件（BolamDN，XieH，PellG，HoggD，GalbraithG，HenrissatB，andGilbertHJ.2004.X4modulesrepresentanewfamilyofcarbohydrate-bindingmodulesthatdisplaynovelproperties.J.Biol.Chem.279:22953-22963；DvortsovI.A,LuninaNA,ChekanovskayaLA,SchwarzWHjZverlovVV，andVelikodvorskayaGA.2009.Carbohydrate-bindingpropertiesofaseparatelyfoldingproteinmodulefrombeta-1,3-glucanaseLicl6AofClostridiumthermocellum.Microbiology155:2442-2449.)〇[0005]碳水化合物結合組件的主要功能是識別和吸附多糖，它通過增加底物表面酶的濃度提高酶對可溶或不可溶底物的活性（BeguinP，andAubertJP.1994.Thebiologicaldegradationofcellulose.FEMSMicrobiol.Rev.13:25-58；Shoseyov0,ShaniZ，andLevyI.2006.Carbohydratebindingmodules:biochemicalpropertiesandnovelapplications.Microbiol.Mol.Biol.Rev.70:283-295)。另外，CBM還有其他的一些功能，如有些CBM可以破壞底物的結構，使晶體結構變得鬆散，有利於酶更好地作用底物(LevyI，ShaniZjandShoseyov0.2002.Modificationofpolysaccharidesandplantcellwallbyendo_l，4_beta_glucanaseandcellulose-bindingdomains.Biomol.Eng.19:17-30；GiardinaT，GunningAP，JugeN，FauldsCB，FurnissCSjSvenssonB，MorrisVJ，andWilliamsonG.2001.Bothbindingsitesofthestarch-bindingdomainofAspergillusnigerglucoamylaseareessentialforinducingaconformationalchangeinamylose.J.Mol.Biol.313:1149-1159·)。有些碳水化合物結合組件可以增強酶對溫度和pH的穩定性（SunnaA，GibbsMD，andBergquistPL.2000.Anovelthermostablemultidomain1，4-beta-xylanasefromCaldibacilluscellulovoransandeffectofitsxylan-bindingdomainonenzymeactivity.Microbiology146:2947-2955.)。近來還發現家族35和37的碳水化合物結合組件還能結合到細菌細胞的表面，介導攜帶該組件的酶結合到宿主的表面（MontanierC，vanBuerenALjDumonCjFlintJE，CorreiaMA，PratesJA，FirbankSJjLewisRJ，GrondinGG，GhinetMG，GlosterTMjHerveCjKnoxJP，TalbotBG，TurkenburgJPjKerovuoJjBrzezinskiR，FontesCM，DaviesGJ，BorastonAB，andGilbertHJ.2009.Evidencethatfamily35carbohydratebindingmodulesdisplayconservedspecificitybutdivergentfunction.Proc.Natl.Acad.Sci.USA106:3065-3070;EzerA，MatalonE，JindouSjBorovokI，AtamnaN，YuZ，MorrisonMjBayerEA，andLamedR.2008.Cellsurfaceenzymeattachmentismediatedbyfamily37carbohydrate-bindingmodules,uniquetoRuminococcusalbus.J.Bacteriol.190:8220-8222.)〇[0006]自然界大部分的微生物在實驗室的條件下是不容易被分離和培養的，一般認為可培養的微生物種類只佔自然界中微生物種類的約1%(AmannRI，LudwigW，andSchleiferKΗ.1995.Phylogeneticidentificationandinsitudetectionofindividualmicrobialcellswithoutcultivation.Microbiol.Rev.59:143-169；CardenasE，andTiedjeJM.2008.Newtoolsfordiscoveringandcharacterizingmicrobialdiversity.Curr.Opin.Biotech.19:544-549)，剩餘的約99%的不可培養的微生物中蘊藏著大量的基因資源。近年來從環境樣品未培養微生物中提取基因組DNA然後構建混合基因組DNA文庫以分離基因已是成熟技術（LorenzP，andEckJ.2005.Metagenomicsandindustrialapplications.Nat.Rev.Microbiol.3:510-516.)〇宏基因組學方法已經被廣泛地應用到從各種環境樣品的未培養微生物中挖掘新的具有生物催化活性的酶的基因，現在已經從未培養微生物中鑑定了很多新酶的基因，包括編碼一些新家族的水解酶類的基因，說明宏基因組學方法是得到新基因的好方法。[0007]反芻動物的瘤胃是自然界中纖維素降解最劇烈的主要場所之一，植物的纖維素類物質是被瘤胃中共生的纖維素降解微生物降解的。瘤胃微生物包括有真菌、細菌、原生動物和古細菌。目前研宄認為瘤胃中有85%的微生物是未培養的(KrauseD0,DenmanSE,MackieRI,MorrisonM,RaeAL,AttwoodGT,andMcSweeneyCS.2003.Opportunitiestoimprovefiberdegradationintherumen:microbiology,ecology,andgenomics.FEMSMicrobiolRev27:663-693)，可以推測這些未培養微生物中一定含有大量的新基因資源。【
發明內容】[0008]本發明的目的是提供一種具有結合糖能力的碳水化合物結合組件及其應用。[0009]本發明提供一種蛋白，為如下⑴或（2)所示：[0010](I)SEQIDNo.2所示的蛋白；[0011](2)將SEQIDNo.2所示的蛋白的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有糖結合能力的蛋白質；[0012]所述糖具體為多糖或寡糖。[0013]上述蛋白的編碼基因也屬於本發明的保護範圍。[0014]上述編碼基因中，所述編碼基因為如下中至少一種：[0015]I)SEQIDNo.1所示的DNA分子；[0016]2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼所述蛋白質的DNA分子；[0017]3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼所述蛋白質的DNA分子。[0018]含有上述任一所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌也屬於本發明的保護範圍。[0019]上述蛋白作為碳水化合物結合組件的應用也屬於本發明的保護範圍；[0020]所述碳水化合物結合組件的主要功能是識別和吸附底物，它通過增加底物表面酶的濃度提高酶對底物的催化活性；[0021]所述底物具體為糖。[0022]上述應用中，所述碳水化合物結合組件為結合糖的碳水化合物結合組件。[0023]上述蛋白或上述任一所述的編碼基因在製備具有結合糖功能的產品的中的應用也屬於本發明的保護範圍；[0024]或，上述蛋白或上述任一所述的編碼基因在糖降解中的應用也屬於本發明的保護範圍；[0025]上述蛋白作為碳水化合物結合組件識別和吸附糖，從而增加帶有該組件的酶表面的糖濃度，提高酶對糖的降解活性。[0026]上述任一所述的應用中，所述糖為多糖或寡糖。[0027]上述任一所述的應用中，所述多糖為非水溶性多糖或水溶性多糖；[0028]所述非水溶性多糖具體為微晶纖維素、酸膨脹的纖維素、地衣多糖、來源於樺木的非水溶性木聚糖、甘露聚糖或木薯生澱粉；[0029]所述水溶性多糖具體為羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、大麥β-葡聚糖、甲基纖維素、樺木木聚糖、豆類樹膠或來源於樺木的水溶性木聚糖；[0030]所述寡糖為纖維寡糖；[0031]所述纖維寡糖具體為纖維四糖和纖維五糖；[0032]所述木薯生澱粉具體按照如下方法製備而成：[0033]將木薯粉碎後過80目篩，密封經Co6tl輻射滅菌得到；[0034]所述酸膨脹的纖維素為磷酸膨脹的纖維素，具體按照如下方法製備而成：[0035]①將10克微晶纖維素懸浮在質量百分含量為85%的!13?04水溶液中，1°C攪拌1小時，得到混合物；[0036]②將混合物倒入4L溫度為2-8°C水中，放置30min;[0037]③先用溫度為2_8°C水洗滌步驟②處理後的微晶纖維素，然後用質量百分含量為1%的NaHCO3水溶液洗滌，再用溫度為2-8°C水洗滌至酸鹼平衡，得到酸膨脹的纖維素；[0038]所述來源於樺木的水溶性木聚糖和所述來源於樺木的非水溶性木聚糖具體按照如下方法製備而成：[0039]1)將樺木木聚糖按照10克：200mL的比例溶於水中，攪拌；[0040]2)離心收集上清，同時保留沉澱；[0041]3)用去離子水洗滌沉澱，離心，倒掉上清保留沉澱；[0042]4)分別將所述步驟2)所得的上清和所述步驟3)所得的沉澱低溫冷凍乾燥為粉末，即為所述來源於樺木的水溶性木聚糖和所述來源於樺木的非水溶性木聚糖。[0043]上述蛋白或上述任一所述的編碼基因在蛋白質純化中的應用也屬於本發明的保護範圍；[0044]所述蛋白質純化的方法具體可為將上述蛋白與目的蛋白進行融合表達，形成融合蛋白；再利用帶有非水溶性糖的純化材料將所述融合蛋白進行純化，得到目的蛋白。[0045]本發明在大腸桿菌RosettaTM(DE3)中表達CBMumeel511DNA序列、純化表達產物CBMUmral5D多肽並檢測該多肽對糖的結合能力，發現該多肽可以結合廣泛的糖底物，包括多糖和寡糖。本發明提供的〇81^_151)與已知的碳水化合物結合組件都沒有同源性，該多肽是一個新的碳水化合物結合組件。【專利附圖】【附圖說明】[0046]圖1為PET-CBMumeel511的酶切電泳圖譜。[0047]圖2為CBMunicel511蛋白液的電泳圖。[0048]圖3為CBMumral511的圓二色譜圖。[0049]圖4為CBMuniral5Jt水溶性多糖的結合能力的電泳檢測結果。[0050]圖5為CBMuniral5D對非水溶性多糖的結合能力的電泳檢測結果。[0051]圖6為CBMumeel511對纖維寡糖的ITC滴定結果。[0052]圖7為CBMumeel5Jt水溶性多糖的ITC滴定結果。[0053]圖8為鈣離子影響CBMumeel5Jt水溶性多糖結合能力實驗的ITC滴定結果。【具體實施方式】[0054]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。[0055]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。[0056]下述實施例中的％，如無特殊說明，均為質量百分含量。[0057]下述實施例中的定量試驗，均設置三次重複實驗，結果取平均值。[0058]羧甲基纖維素（Carboxymethylcellulose，CMC)、微晶纖維素（Avicel)、地衣多糖(Lichenan)、大麥β-葡聚糖（barley-glucan)、甲基纖維素（methylcellulose)、輕乙基纖維素（hydroxyethylcellulose)、樺木木聚糖（birchwoodxylan)為SIGMA公司產品。[0059]木薯生澱粉按照如下方法製備而成：[0060]將木薯粉碎後過80目篩，分裝至藥品瓶中，密封后經Co6tl輻射滅菌，保存備用。[0061]纖維二糖（Cellotriose)、纖維三糖（Cellotriose)、纖維四糖（Cellotetraose)和纖維五糖（Cellopentaose)為Megazyme公司產品。[0062]甘露聚糖（Manna)和豆類樹膠（beangum)為Megazyme公司產品。[0063]瓊脂糖為Amresco公司產品。[0064]酸膨脹的纖維素（Acid-swollencellulose)按照如下方法製備而成：[0065]①10克微晶纖維素（Avicel)懸浮在85%的H3PO4水溶液中，1°C攪拌1小時，得到混合物。[0066]②將混合物倒入4L冰冷（溫度範圍2-8°C)的水中，放置30min。[0067]③先用預冷的水（溫度範圍2_8°C)洗滌步驟②處理後的Avicel幾次，然後用1%的NaHCO3水溶液洗滌，再用預冷的水（溫度範圍2-8°C)洗滌至酸鹼平衡，得到酸膨脹的纖維素。[0068]④將酸膨脹的纖維素儲存在5mMNaN3水溶液中，1°C保存。[0069]來源於樺木的水溶性木聚糖和非水溶性木聚糖按照如下方法製備而成：[0070]①稱取10克樺木木聚糖溶於200mL去離子水中，用磁力攪拌器攪拌2h。[0071]②4°C，8000rpm離心10min，收集上清，同時保留沉澱。[0072]③用去離子水洗滌沉澱三次，每次於4°C，SOOOrpm離心10min，倒掉上清保留沉澱。[0073]分別將步驟②所得的上清和步驟③所得的沉澱低溫冷凍乾燥為粉末，即為水溶性樺木木聚糖（Solublebirchwoodxylan)和非水溶性樺木木聚糖（insolublebirchwoodxylan)〇[0074]實施例1、重組質粒的構建和各個重組蛋白的表達[0075]-、CBMunicel511DNA片段的製備[0076]人工合成SEQIDNo.1所示的DNA分子，將其命名為CBMumeel511。CBMumeel511編碼SEQIDNo.2所示的多肽，將該多肽命名為CBMUmeel5D。CBMumeel51^預計分子量為16.30KDa，等電點pi為4.75。[0077]二、PET-CBMumcel51^組質粒的構建和鑑定[0078]I、pET-CBMUnicel5D的構建[0079]①以SEQIDNo.1所示的DNA分子為模板，用引物1和引物2組成的引物對進行PCR擴增，在CBMumeel511的上遊和下遊分別引入NdeI和XhoI酶切位點，得到PCR產物丙。[0080]引物1:5'-GACCATATGGACGACTTTCAAATAACATATACCGTGAA-3'；(SEQIDNo.3)[0081](下劃線所示的序列為NdeI酶切識別位點）[0082]引物2:5'-CGACTCGAGGGAACGGATACCAGAAGGCGCT-3'。（SEQIDNo.4)[0083](下劃線所示的序列為XhoI酶切識別位點）[0084]②用限制性內切酶NdeI和XhoI雙酶切PCR產物丙，回收酶切產物。[0085]③用限制性內切酶NdeI和XhoI雙酶切質粒pET_30a(+)(Novagen公司產品），回收載體骨架。[0086]④將步驟②的酶切產物和步驟③的載體骨架連接，得到重組質粒，將其命名為pET-CBMUmc;el5D，將pET-CBMUmc;el5D進行測序驗證，結果正確。pET-CBMUmc;el5D的骨架為pET-30a(+)，在NdeI和XhoI酶切位點之間插入了CBMumeel511序列。[0087]2、重組質粒的鑑定[0088]pET-CBMUmcel5D的酶切電泳圖譜如圖1所示。[0089]圖1中，泳道1為Ikbladder(片段大小從大到小依次為：10.Okb，8.Okb，6.Okb，5.Okb，4.Okb，3.5kb，3.Okb,2.5kb,2.Okb,I.5kb，lkb，0·75kb，0·5kb);泳道2為pET-CBMUm。el5D用NdeI和XhoI雙酶切後的酶切產物，其中標號為I的條帶為大小為5.3kb的條帶，該條帶是載體骨架，標號為2的條帶為大小為500bp的條帶，該條帶是插入的目的片段CBMUmcel5D。[0090]PET-CBMUmeel5D中，起始密碼子和終止密碼子由pET-30a(+)提供。表達產物的C端有一個由表達載體pET-30a(+)提供的His標籤（6XHisTag)。[0091]三、重組蛋白的表達和純化[0092]1、製備重組菌[0093]用PET-CBMunicel511轉化E.coliRosetta?(DE3)，得到重組菌Rosetta?(DE3)/pET-CBMUmcel5D〇[0094]2、重組蛋白的表達[0095]培養重組菌Rosetta?(DE3)/pET_CBMUmeel5D並誘導重組蛋白表達，得到具有表達產物CBMudim15d的菌液，並製備粗蛋白液。[0096]具體步驟如下：[0097]①重組菌的培養和誘導表達[0098]將重組菌Rosetta?(DE3)/pET-CBMUmeel5D接種到IOml含有34μg/ml氯黴素與25μg/ml卡那黴素的LB培養基中，37°C、200rpm培養過夜；取2ml過夜培養物到200ml含有34μg/ml氯黴素與25μg/ml卡那黴素的LB培養基中，37°C、200rpm培養至006(|(|為0.6時，加入IPTG至終濃度為ImM，28°C繼續培養8個小時，6000g離心收集菌體。[0099]②製備粗蛋白液[0100]將步驟①收集的菌體加入咪唑濃度為IOmM的裂解緩衝液（50mMNaH2PO4,300mM似〇1，10禮咪唑，？!18.0，餘量為水）中，重懸菌體，置冰上30分鐘。用超聲波破碎細胞，30(^作用lh，每次作用時間5s，每次作用間隔5s。12000g離心15分鐘，收集上清即為CBMunrcel511粗蛋白液。[0101]3、重組蛋白的純化[0102]將CBMUmcel5D粗蛋白液用Clontech公司的TALONMetalAffinityResins試劑盒(方法參照試劑盒說明書）進行純化，得到CBMui^15d蛋白液。純化步驟如下：[0103]①將試劑盒中TALON樹脂完全懸浮，快速吸取2ml的樹脂到一個約IOml的吸附柱中，讓吸附柱中的液體自然流盡。[0104]②在吸附柱中加一個柱體積的去離子水，讓吸附柱中的液體自然流盡。[0105]③重複步驟②。[0106]④在吸附柱中加一個柱體積的咪唑濃度為IOmM的洗滌緩衝液，讓吸附柱中的液體自然流盡。[0107]⑤取一個滅好菌50ml的離心管，將CBMumeel51^i蛋白液和步驟④中處理好的樹脂混合與離心管中，在室溫置於脫色搖床上SOrpm搖動40分鐘，使帶有多組氨酸標籤的目標蛋白CBMumrel51^P樹脂充分結合，將混合液倒回吸附柱中，讓吸附柱中的液體自然流盡。[0108]⑥加入1個柱體積咪唑濃度為20mM的洗滌緩衝液（50mMNaH2PO4,300mMNaCl，20mM咪唑，pH8.0,餘量為水）到吸附柱中，讓液體自然流盡。[0109]⑦重複步驟⑥[0110]⑧依次向吸附柱中加入咪唑濃度為40mM、60mM、80mM、IOOmM(50mMNaH2PO4,300mMNaCl，咪唑濃度分別為40禮、601111、801111、1001111，？!18.0，餘量為水）的洗滌緩衝液各21^，每次加入lmL，讓液體自然流下，分別收集各洗脫液。[0111]⑨向吸附柱中加6ml咪唑濃度為250mM的洗脫液（50mMNaH2PO4,300mMNaCl，250mM咪唑，ρΗ8·0,餘量為水）到柱子中，分管（lml/管）收集洗脫液。[0112]註：步驟⑧和⑨收集的洗脫液中均含有目的蛋白CBMui^15d，可選取較純的洗脫液(步驟⑧或⑨收集的洗脫液）作為〇81^_151)蛋白液進行後續實驗。[0113]CBMunicel511蛋白液的電泳圖如圖2所示。[0114]圖2中，1為蛋白質分子量標準（marker);2為TALON樹脂純化的CBMUmeel5D。[0115]圖2表明，經TALON樹脂純化後CBMumeel511蛋白已達到SDS-PAGE單條帶純（如箭頭所示）。[0116]實施例2、CBMumeel51^白質二級結構的分析[0117]用實施例1製備的CBMumeel51^白液進行如下實驗。[0118]圓二色譜測定CBMumeel511的二級結構[0119]一、樣品準備[0120]將CBMumeel51^白液用截流為3kDa的MILLIP0RE超濾管置換緩衝液，置換的緩衝液為pH5.0的檸檬酸-磷酸緩衝液，置換緩衝液後濃縮蛋白溶液，使其濃度為500μg/mL，將其記作待測液。[0121]二、圓二色譜測定[0122]將待測液加入Imm規格的比色皿（圓二色譜儀器配置的）中，待測液加入量應超過比色皿容積的2/3,並輕輕震蕩排除比色皿中的氣泡。測量時參數設置為，掃描波長：188?250nm，掃描速度：60nm/min,米集時間（Acquisitionduration:1s，掃描步長（Scanstep)：lnm〇[0123]三、數據分析[0124]掃描所得的峰圖使用⑶ROMBiokine4優化數據，將峰圖按照每三個點進行平滑處理；使用origin8.0作圖；使用Dicroprot根據軟體提供的K2D模式計算三種主要二級結構（包括α-螺旋、β-摺疊和無規則捲曲）的含量，結果如圖3和表1所示。[0125]表ICBMumeel51^白質二級結構[0126]【權利要求】1.一種蛋白，為如下（1)或（2)所示：(1)5￡〇10此.2所示的蛋白；(2)將SEQIDNo.2所示的蛋白的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有糖結合能力的蛋白質。2.權利要求1所述蛋白的編碼基因。3.根據權利要求2所述的編碼基因，其特徵在於：所述編碼基因為如下中至少一種：1.SEQIDNo.1所示的DNA分子；2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼權利要求1所述蛋白質的DNA分子；3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼權利要求1所述蛋白質的DNA分子。4.含有權利要求2或3所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。5.權利要求1所述蛋白作為碳水化合物結合組件的應用。6.根據權利要求5所述的應用，其特徵在於：所述碳水化合物結合組件為結合糖的碳水化合物結合組件。7.權利要求1所述的蛋白或權利要求2或3所述的編碼基因在製備具有結合糖功能的產品的中的應用；或，權利要求1所述蛋白或權利要求2或3所述編碼基因在糖降解中的應用。8.根據權利要求6-7任一所述的應用，其特徵在於：所述糖為多糖或寡糖。9.根據權利要求6-8任一所述的應用，其特徵在於：所述多糖為非水溶性多糖或水溶性多糖；所述非水溶性多糖具體為微晶纖維素、酸膨脹的纖維素、地衣多糖、來源於樺木的非水溶性木聚糖、甘露聚糖和木薯生澱粉；所述水溶性多糖具體為羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、大麥0_葡聚糖、甲基纖維素、樺木木聚糖、豆類樹膠或來源於樺木的水溶性木聚糖；所述寡糖為纖維寡糖；所述纖維寡糖具體為纖維四糖和纖維五糖。10.權利要求1所述蛋白或權利要求2或3所述編碼基因在蛋白質純化中的應用。【文檔編號】C12N15/56GK104498459SQ201410836588【公開日】2015年4月8日申請日期:2014年12月29日優先權日:2014年12月29日【發明者】馮家勳,段承傑,馮玉亮,曹啟龍申請人:廣西大學