一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法
2023-06-02 01:17:51 1
一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法
【專利摘要】本發明公開了一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，是採用超聲提取的方法對牛肉中的阿維菌素類抗生素殘留進行測定。本發明的有益效果為：本發明提供的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，利用超聲提取法來測定牛肉中阿維菌素、伊維菌素和多拉菌素等抗生素殘留的檢測，具有提取效率局，節省時間和有機溶劑，測定結果準確可靠的優點，適合實驗室中大批量牛肉樣品中阿維菌素、伊維菌素和多拉菌素中的一種或幾種殘留的檢測。
【專利說明】一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及抗生素殘留測定領域，具體涉及一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的 測定方法。
【背景技術】
[0002] 阿維菌素（Avermectin)是美國默克公司的研究人員1978年研製出的一種新的高 效、廣譜抗寄生蟲抗生素。它是由日本北裡研究所收集的土壤樣品中篩選出的一種叫阿維 鏈黴菌的放線菌產生的次級代謝產物。阿維菌素是一組含有8種組分的混合物。經過化 學修飾和同類骨架結構藥物的衍生，現在市場上常見的阿維菌素類抗生素有阿維菌素、伊 維菌素和多拉菌素等多種。阿維菌素類藥物在農業生產上是一類廣譜抗寄生蟲藥物，在對 內寄生蟲方面，幾乎所有的線蟲，不論何種寄主或種類，對口服或非腸道使用的阿維菌 素類藥物都是敏感的。阿維菌素還可作飼料添加劑應用。據報導它對肉牛有顯著的增重作 用，以阿維菌素作為小公牛的生長刺激劑時，日增重比對照組提高5. 9%，而lkg增重的耗 料量則降低8. 5 %。
[0003] 據調查，目前在我國肉牛飼養中，大多數牛場每年至少實施春秋兩季驅蟲，還有一 些養殖場會根據本場寄生蟲病流行情況定期進行驅蟲，抗寄生蟲藥物已成為牛場常用藥物 的一部分。絕大多數抗寄生蟲藥物在體內的殘留時間比較長，當用這些抗寄生蟲藥物給牛 驅蟲時，如果使用不當或者沒有嚴格執行休藥期，就會造成該類藥物在牛肉中的殘留。消費 者食用了殘留有阿維菌素類藥物的牛肉就可能會造成該類藥物在人體裡的積累。因此殘留 於牛肉的中的阿維菌素類藥物會對人體造成潛在的危害。相關文獻報導阿維菌素和伊維 菌素對未成年的哺乳動物(包括人）的中樞神經系統(腦和脊髓）有很強的毒性，甚至引起死 亡。人意外攝食阿維菌素和伊維菌素引起的不良反應包括：瞳孔放大、嘔吐、嗜睡、心動過 速、蒼白、血壓異常等。考慮到牛肉中殘留的阿維菌素和伊維菌素對人，特別是嬰幼兒的潛 在危害，因此，有必要加強對牛肉中阿維菌素藥物殘留的監控，而現有技術中針對阿維菌素 類抗生素的檢測方法存在效率低、時間長等缺陷。
[0004] 超聲波提取分離主要是依據物質中有效成分和有效成分群體的存在狀態、極性、 溶解性等設計的一項學科。合理利用超聲波振動的方法進行提取的新工藝，使溶劑快速地 進入固體物質中，將其物質所含的有機成分儘可能完全地溶於溶劑之中，得到多成分混合 提取液。利用超聲波技術來強化提取分離過程，可有效提高提取分離率，縮短提取時間、節 約成本、甚至還可以提高產品的質量和產量。超聲波提取(也稱為超聲波萃取）以其提取 溫度低、提取率高、提取時間短的獨特優勢被具有創新意識者應用於中藥材和各種動、植物 有效含量的提取，是替代傳統剪切工藝方法實現高效、節能、環保式提取的現代高新技術手 段。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的就是針對上述現有技術中的缺陷，提供了一種將超聲波提取技術應 用到牛肉中阿維菌素類的抗生素殘留檢測中的檢測方法。
[0006] 為了實現上述目的，本發明提供的技術方案為：一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘 留的測定方法，是採用超聲提取的方法對牛肉中的阿維菌素類抗生素殘留進行測定。
[0007] 進一步的，上述的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，具體操作步驟 為：稱取試樣3g，放入100mL的具塞磨口錐形瓶中，加入有機溶劑作為超聲提取溶劑，蓋緊 塞子，置於超聲清洗儀上進行萃取，萃取完畢後將萃取液立即過濾到試管中，在45°C下用氮 吹儀吹乾，再向試管裡加入含有體積百分比為50%的N-甲基咪唑的乙腈溶液150 μ 1，置於 超聲清洗儀上若干秒後，再加入含有體積百分比為35%的三氟乙酸酐的乙腈溶液200 μ 1， 搖勻半分鐘之後，再加入乙腈溶液650 μ 1，放置20min之後轉入到進樣瓶以高效液相色譜 儀測定即可。
[0008] 進一步的，上述的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，所述超聲提取 溶劑為乙腈溶液，加入量為每lg試樣加入3ml乙腈溶液。
[0009] 進一步的，上述的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，所述液相色譜 測定的具體方法為，以體積比90 :10的乙腈和水為流動相，設置流速為1. Oml/min，柱溫 30°C，進樣體積20 μ 1，螢光檢測器激發波長為365nm，發射波長為475nm。
[0010] 進一步的，上述的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，所述超聲提取 過程中，溫度為30°C，提取時間為15min。 toon] 本發明的有益效果為：本發明提供的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方 法，利用超聲提取法來測定牛肉中阿維菌素、伊維菌素和多拉菌素等抗生素殘留的檢測，具 有提取效率高，節省時間和有機溶劑，測定結果準確可靠的優點，適合實驗室中大批量牛肉 樣品中阿維菌素、伊維菌素和多拉菌素中的一種或幾種殘留的檢測。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0012] 圖1為牛肉加標10 μ g/kg的色譜圖。
【具體實施方式】
[0013] 實施例1 : 一、試劑與儀器： KQ-600DE型超聲清洗儀：崑山超聲清洗儀器廠； XS205型電子天平：Mettler Toledo公司； 組織均楽儀：美國waters公司； H-2050R型湘雅離心機； 氮吹儀：美國waters公司； Waters 2695型高效液相色譜儀：美國waters公司； SunFireTMC18 柱：4. 6 mm X 250 mm，5 μ m，美國 waters 公司。
[0014] 二、試劑和材料： 三氟乙酸酐：購自上海國藥集團； N-甲基咪唑：購自上海國藥集團； 乙腈：色譜純，購比利時fisher公司； 實驗用水為超純水； 阿維菌素、伊維菌素和多拉菌素標準品：購自德國Dr. Ehrenstorfer公司。
[0015] 三、超聲提取： 精確稱取試樣3.0 g，放入100 mL的具塞磨口錐形瓶中，加入一定量的有機溶劑作為 提取液，蓋緊塞子，置於超聲清洗儀上進行萃取，萃取完畢後將萃取液立即過濾到試管中， 在45°C下用氮吹儀吹乾。再向試管裡，加入體積比50%的N-甲基咪唑的乙腈溶液150 μ 1， 置於超聲清洗儀上若干秒後，再加入體積比35%的三氟乙酸酐乙腈溶液200 μ 1，用手搖動 半分鐘之後，再加入乙腈650 μ 1，放置20min之後轉到進樣瓶裡面，上高效液相色譜儀測 定。
[0016] 四、液相色譜儀器方法： 流動相為乙腈和水（V:V=90:10)，流速為l.Oml/min，柱溫30°C，進樣體積20μ 1，螢光 檢測器激發波長：365nm，發射波長475nm。
[0017] 五、超聲提取條件的優化： 一）提取時間： 其他條件不變，分別設定超聲提取時間為5min、lOmin、15min、20min和30min為單因素 條件，測定不同超聲提取時間下的阿維菌素類藥物殘留加標回收率（5 μ g/kg)，超聲提取提 取時間對提取效果的影響結果見表1。隨著超聲提取時間的延長，樣品中阿維菌素類藥物的 檢出濃度逐漸增大；15 min後，漸趨穩定。由於萃取體系並非絕對的密閉體系，隨著超聲時 間的延長會造成阿維菌素類藥物的損失，因此15 min為最佳超聲萃取時間。
[0018] 表 1
【權利要求】
1. 一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，其特徵在於，是採用超聲提取的方 法對牛肉中的阿維菌素類抗生素殘留進行測定。
2. 根據權利要求1所述的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，其特徵在 於，具體操作步驟為：稱取試樣3g,放入lOOmL的具塞磨口錐形瓶中，加入有機溶劑作為超 聲提取溶劑，蓋緊塞子，置於超聲清洗儀上進行萃取，萃取完畢後將萃取液立即過濾到試管 中，在45°C下用氮吹儀吹乾，再向試管裡加入含有體積百分比為50%的N-甲基咪唑的乙腈 溶液150 μ 1，置於超聲清洗儀上若干秒後，再加入含有體積百分比為35%的三氟乙酸酐的 乙腈溶液200 μ 1，搖勻半分鐘之後，再加入乙腈溶液650 μ 1，放置20min之後轉入到進樣瓶 以高效液相色譜儀測定即可。
3. 根據權利要求2所述的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，其特徵在 於，所述超聲提取溶劑為乙腈溶液，加入量為每lg試樣加入3ml乙腈溶液。
4. 根據權利要求3所述的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，其特徵在 於，所述液相色譜測定的具體方法為，以體積比90 :10的乙腈和水為流動相，設置流速為 1. Oml/min，柱溫30°C，進樣體積20 μ 1，螢光檢測器激發波長為365nm，發射波長為475nm。
5. 根據權利要求4所述的一種牛肉中阿維菌素類抗生素殘留的測定方法，其特徵在 於，所述超聲提取過程中，溫度為30°C，提取時間為15min。
【文檔編號】G01N30/06GK104215709SQ201410454257
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月9日 優先權日:2014年9月9日
【發明者】熊琳, 李維紅, 高雅琴, 楊曉玲 申請人:中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所