新山楂酸衍生物、其製備方法及其在抗腫瘤藥物中的應用的製作方法

2023-06-01 14:46:26 1

專利名稱：新山楂酸衍生物、其製備方法及其在抗腫瘤藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於天然藥物化學領域，涉及新的山楂酸衍生物及其製備方法，以及新化合物在抗腫瘤方面的應用。
背景技術：
山楂酸為齊墩果烷型五環三萜類化合物，存在於油橄欖、藿香根、大花紫薇、石榴花、水楊梅等植物中。由於山楂酸的化學結構中存在活潑的雙鍵、羥基、羧基官能團，因而具有廣泛的生物學活性，如抗HIV、抗腫瘤、抗II型糖尿病、抗氧化等作用。

發明內容
本發明的目的是提供了一類新的山楂酸衍生物。本發明的另一個目的是提供了新山楂酸衍生物的製備和抗腫瘤用途。本發明是通過如下技術方案完成的，具體內容包括:山楂酸的微生物轉化反應、產物提取分離及結構鑑定、體外抗腫瘤活性評價。(I)山楂酸的微生物轉化反應將山楂酸溶於乙醇溶液中，配成濃度為10 30g/L的底物溶液，加入到在25
28°C，150 250rpm/min條件下培養了 I 3天的微生物中，轉化反應條件為:25 28°C，150 250rpm/min, 7 10 天。

(2)產物的提取分離純化轉化結束後，用乙酸乙酯等有機溶劑萃取，減壓濃縮，經矽膠柱色譜、凝膠柱色譜、反相矽膠柱色譜和半製備高效液相色譜分離純化得到化合物1、化合物2。(3)新化合物體外抗腫瘤活性評價將新化合物作用於人肺癌細胞A-549、人胃癌細胞SGC-7901、人宮頸癌細胞Hela，評價其抗腫瘤效果。
具體實施例方式以下通過實施例對本發明作進一步說明，但其並不限制本發明的保護範圍。實施例1新化合物1、2的製備及提取分離在10瓶IOOOml (每瓶400mL培養基)的三角瓶中以2%的接種量接入總狀共頭黴Syncephalastrum racemosum 3.2500 菌種，置恆溫振蕩器中，180rpm、27°C培養 72 小時後加入500mg底物山楂酸(溶於30ml乙醇中，每瓶加入2ml)，繼續培養10天。發酵完成後，過濾菌絲體，濾液用等體積的乙酸乙酯萃取三次，菌絲體乾燥後粉碎，用500mL乙酸乙酯超聲提取三次，每次30min，合併乙酸乙酯萃取液與提取液，置旋轉蒸發儀上濃縮至小體積，乾燥，得轉化反應提取物(1.62g)。將提取物用少量丙酮溶解，兩倍矽膠拌樣，32g矽膠分離，石油醚/四氫呋喃梯度洗脫(從20: I到I: 1，共2400ml)，收集到五個流分:A (581.9mg)，B (61.1mg)，C (136.7mg)為未反應的山楂酸，D (98.8mg)，E (433.4mg)，流分D用半製備型高效液相色譜儀製備，流動相:乙腈/水(1:1)，流速:3mL/min,檢測波長210nm,得到化合物I (17.6mg),流分E用半製備型高效液相色譜儀製備，流動相:甲醇/水(72: 28)，流速:3mL/min，檢測波長210nm，得到化合物2 (45.2mg)。實施例2新化合物I結構鑑定新化合物I為無色針狀結晶，HR-ES1-MS給出487.3444 ([M-H]-)，結合1H-NMR和13C-NMR推斷確定分子式為C3tlH47O5。1H-NMIUeOOMHz, pyridine_d5)中，顯示該化合物有七組甲基氫信號 δ 0.99 (3Η, s)，L02(3H，s)，L 08 (3H，ο)，L 28 (6H，s), 1.30 (6Η, ο);低場處有一活潑氫信號:S 5.53 (s)，推測可能是雙鍵上的氫。13C-NMR中顯示兩個不飽和碳原子δ 123.1和δ 144.4，一個羧基碳原子δ 179.7。綜合以上信息可以推斷該化合物為齊墩果烷型五環三萜酸類化合物。依據HSQC、HMBC譜可以對化合物I的碳氫作進一步的歸屬。與山楂酸比較，1H-NMR譜中，化合物I在5 3.99 (dt, J = 7.0,10.0Hz)出現一個氫信號；13C-NMR譜中，在δ 72.8處出現一個連氧碳信號，在HSQC譜中二者相關，同時C-20和C-22分別向低場位移6.2ppm和8.9ppm,以上數據說明C-21位連有羥基，H_21ax與H_22ax的耦合常數為10.0Hz，確定該羥基為β型，綜上，確定化合物I的結構為:2 α，3β，
21β -三羥基-12-烯-28-齊墩果酸，為一新化合物，其1H-NMR譜、13C-NMR譜信號歸屬見表
1表1.化合物I的1H NMR和13C NMR數據
權利要求
1.新的山楂酸衍生物，其特徵在於該化合物具有化學通式(I)所示的化學結構:
2.根據權利要求1所述的新的山楂酸衍生物的製備方法是通過微生物酶對山楂酸進行結構修飾。
3.根據權利要求2所述的新的山楂酸衍生物的製備方法為:以山楂酸為底物，利用微生物酶對底物進行生物轉化，利用乙酸乙酯對發酵液中的轉化產物進行萃取，利用矽膠柱層析、凝膠色譜和高效液相色譜進行轉化產物的製備分離。
4.根據權利要求2所述的對山楂酸進行結構修飾的微生物為總狀共頭黴。
5.根據權利要求1所述的新的山楂酸衍生物在製備抗腫瘤藥物中的用途。
全文摘要
本發明屬於天然藥物化學領域，涉及化學結構通式為式(1)所示的兩種新化合物1和2的製備；本發明還涉及該新化合物在製備抗腫瘤藥物中的應用。其製備方法是利用發明人篩選的對山楂酸具有結構修飾能力的總狀共頭黴菌種，在優化條件下發酵培養，對山楂酸進行轉化7～10天，轉化產物用有機溶劑萃取，分離純化得到兩個新的山楂酸衍生物。
文檔編號A61K31/56GK103214543SQ20121056999
公開日2013年7月24日 申請日期2012年12月25日 優先權日2012年12月25日
發明者馮旭, 儲智勇, 汪家春, 郭飛飛, 鄒贏鋅, 欒潔, 張術, 陳雅琳, 陳松, 李代萍 申請人:中國人民解放軍海軍醫學研究所