一種蟲草素的分離純化方法
2023-06-01 07:46:21 1
專利名稱:一種蟲草素的分離純化方法
技術領域:
本發明屬於醫藥工業領域,具體地說涉及一種蟲草素的分離純化方法。
技術背景蟲草素(Cordyc印in)又稱3'—脫氧腺苷(3' -Deoxyadenosine)是 一種具有抗菌活性的核苷類物質,對核多聚腺苷酸聚酶有很強的抑制作用, 能抑制癌細胞的生長,還有抗病毒、抗癌和抗真菌作用。近幾年國內外研 究發現,冬蟲夏草中所含蟲草素可有效殺滅癌細胞,常服用冬蟲夏草可避 免和減少癌變發生,因此國際國內醫藥保健品原材料市場需求旺盛,其中 的有效成分蟲草素具有巨大的潛在市場,目前蟲草素的價格高達每克數萬 元,因此開展蟲草素純化工藝研究具有很好的商業價值。目前常用的蟲草素分離純化方法主要有離子交換樹脂吸附法、氧化鋁 柱層析、矽膠柱層析以及活性炭吸附法等。其中離子交換樹脂吸附法需要 用酸鹼處理,後處理比較複雜,其他幾種方法提取得率低,分離純化選擇 性差,難以進行工業化生產。因此需要尋找更好的提取率高、成本低和易 於工藝化生產的蟲草素純化工藝。蛹蟲草(Cordycepsmilitaris),又稱北冬蟲夏草,與冬蟲夏草同屬異 種,其中的蟲草素的含量遠遠高於冬蟲夏草。經研究發現培養蛹蟲草的廢 棄的培養基中的蟲草素的含量也非常高,高於蛹蟲草子實體含量。大孔吸附樹脂具有良好的網狀結構和很高的比表面積,通過物理吸附 從水溶液中有選擇地吸附有機物質,具有選擇性好,解離容易,機械強度
大,可反覆使用和流體阻力小等優點,並且易於大規模工業化生產。到目前為止,還未見用大孔吸附樹脂來分離純化蟲草素的報導。發明內容本發明所要解決的技術問題在於提供一種蟲草素的分離純化方法,以 解決現有技術中提取率低、分離純化選擇性差、以及工業化生產成本高的 缺點。本發明提供的一種蟲草素的分離純化方法,包括如下步驟①蟲草素的粗提將蛹蟲草固體乾燥培養基粉碎,加入10倍重量的水中,浸泡10-60 min後,加熱至IOO。 C並保持1-3 h,過濾;濾渣重複上 述步驟,再提取1次,合併濾液,濾液靜置過夜;② 粗提物的提純將上述濾液過大孔吸附樹脂柱,使樹脂對提取液 中的蟲草素進行充分吸附先用10%乙醇洗脫除去部分水溶性雜質,再用 50%乙醇洗脫,並收集50%乙醇部分進行濃縮乾燥;③ 蟲草素的進一步純化將上述獲得的樣品用水溶解後,過C18柱, 用水洗脫,收集水相部分,濃縮,置4'C靜置析晶;④ 蟲草素純品的製備用蒸餾水重結晶3-6次,獲得蟲草素純品。 其中所採用的蛹蟲草固體乾燥培養基是由上海市農業科學院植保所栽培的;採用的大孔吸附樹脂柱購自天津海光化工公司,型號是NKA-II型;採用的C18柱購自德國Macherey-Nagel公司。本發明的特點是①利用蟲草乾燥固體培養基為原料,來源豐富,成 本低廉;②將大孔樹脂用於蟲草素的進行初步提純,使蟲草素的純度大幅 提高;③通過C18柱進一步純化,使其達到較高純度;④利用蒸餾水反覆
重結晶,成本低,還可以獲得高純度的蟲草素晶體。提取的蟲草素的純度達到95%以上。
具體實施例方式
實施例1:1. 蟲草素的粗提以3Kg蛹蟲草麥粒培養基為原料,粉碎成粗粒,加入10倍重量的水中,常溫浸泡60min,加熱至微沸,保持此溫度60 min, 過濾。濾渣重複上述步驟,再提取一次,.合併濾液。2. 蟲草培養基粗提物的提純將靜置過夜後的提取液上清過NKA-II 型大孔樹脂,使樹脂對提取液中的蟲草素進行充分吸附。先用10%乙醇洗 脫大孔樹脂,除去部分雜質,再用50%乙醇洗脫,並收集該部分濃縮凍幹 備用(得7g樣品,蟲草素純度達40%),用95%乙醇對樹脂進行再生處理, 已備循環使用。3. 蟲草素的進一步純化取5g上步獲得的樣品用水溶解後,過C18 柱,用水洗脫,收集水相部分濃縮,過濾,置4℃靜置析晶,得淡黃色球狀 固體。4. 蟲草素純品的製備將上步析出的粗晶體加水使其飽和,置4℃條 件下析晶,並反覆重結晶4次,就可獲得蟲草素純品0.5g(純度95.8% )。 實施例2:1. 蟲草素的粗提以2Kg蛹蟲草麥粒培養基為原料,粉碎成粗粒,加 入10倍重量的水中,常溫浸泡60 min,加熱至微沸,保持此溫度90 min, 過濾。濾渣重複上述步驟,再提取一次,合併濾液。2. 蟲草培養基粗提物的提純將靜置過夜後的提取液上清過NKA-II
型大孔樹脂,使樹脂對提取液中的蟲草素進行充分吸附。先用10%乙醇洗 脫大孔樹脂,除去部分雜質,再用50%乙醇洗脫,並收集該部分濃縮凍幹備用(得4g樣品,蟲草素純度達30%),用95%乙醇對樹脂進行再生處理, 己備循環使用。3. 蟲草素的進一步純化取3g上步獲得的樣品用水溶解後,過C18 柱,用水洗脫,收集水相部分濃縮,過濾,置4。C靜置析晶,得淡黃色球狀 固體。4. 蟲草素純品的製備將上步所得樣品加水飽和,置4。C條件下析晶, 並反覆重結晶3次,就可獲得蟲草素純品0.3g (純度95.2% )。
權利要求
1.一種蟲草素的分離純化方法,其特徵在於該方法包括如下步驟①蟲草素的粗提將蛹蟲草固體乾燥培養基粉碎,加入10倍重量的水中,浸泡10-60min後,加熱至100℃並保持1-3h,過濾;濾渣重複上述步驟,再提取1次,合併濾液,濾液靜置過夜;②粗提物的提純將上述濾液過大孔吸附樹脂柱,使樹脂對提取液中的蟲草素進行充分吸附先用10%乙醇洗脫除去部分水溶性雜質,再用50%乙醇洗脫,並收集50%乙醇部分進行濃縮乾燥;③蟲草素的進一步純化將上述獲得的樣品用水溶解後,過C18柱,用水洗脫,收集水相部分,濃縮,置4℃靜置析晶;④蟲草素純品的製備用蒸餾水重結晶3-6次,獲得蟲草素純品。
全文摘要
本發明公開了一種蟲草素的分離純化方法,該方法採用蛹蟲草固體乾燥培養基為原料,用NKA-II型大孔樹脂柱和C18柱進行純化,最後用蒸餾水進行反覆重結晶。獲得的蟲草素純度達到95%以上。該方法原料來源豐富、成本低廉、工藝簡單、純度高,適合工業化生產。
文檔編號C07H19/16GK101157712SQ20071017048
公開日2008年4月9日 申請日期2007年11月16日 優先權日2007年11月16日
發明者劉豔芳, 唐慶九, 張勁松, 焱 楊, 郝瑞霞 申請人:上海市農業科學院