氯黴素免疫原、包被原及其在膠體金試紙中的應用的製作方法
2023-06-03 22:25:01 5
專利名稱：氯黴素免疫原、包被原及其在膠體金試紙中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種氯黴素免疫原、包被原，屬於免疫學技術領域。
背景技術：
氯黴素最初是從委內瑞拉鏈絲菌的培養液中提取製得，現在用化學合成法大量生 產。是一類廣譜抗生素。對革蘭氏陽性、革蘭氏陰性細菌均有抑制作用。其中對傷寒桿菌、 流感桿菌和百日咳桿菌物作用比其它抗生素強，對立克次體感染如斑疹傷寒也有效，但是 對革蘭氏陽性球菌的作用不及青黴素和四環素。2002年的上半年，圍繞著動物源性食品中國與歐盟之間引發了一系列貿易紛爭。 2002年1月28日，歐盟以氯黴素殘留為由宣布全面禁止從中國進口動物源性食品。此項 「禁令」封殺了中國每年約7億美元的相關產品出口。中國方面迅速就此作出回應。2月7 日，英國以氯黴素超標為由停止銷售中國蜂蜜，2月中下旬，英國食品標準局在市場上抽樣 檢測中查出我國蜂蜜含歐盟禁用藥物——氯黴素殘留，發生了上市中國蜂蜜被召回的惡性 事件。並影響到了中國蜂蜜對日本、加拿大等國的出口。中國國家質檢總局專門就氯黴素 音量先後下發了兩個緊急通知(國質檢食函[2001]510號、國質檢食函[2001]578號)，禁 止在出口水產品的飼料、養殖(包括環境、器械等的消毒)、加工、保鮮、包裝和運輸等生產 環節使用氯黴素，並要求各地檢驗檢疫機構加強對出口，限期整改，對如期驗收不合格的企 業將取消其出口註冊資格，禁止其產品出口。2002年8月21日農業部和國家質檢總局發出 聯合通知，聲明將對中國水產品進行專項整治，以儘快削除藥物對中國水產品的危害。我國 農業部第235號文規定動物性食品中氯黴素殘留限量為不得檢出。然而由於氯黴素抑菌效 果好且價格低廉，目前我國仍有部分養殖主將氯黴素用於治療家畜、禽類疾病。為了保障人 民健康及擴大與世界各國食品貿易往來，必須對氯黴素殘留進行監控。氯黴素是小分子化合物，常用的檢測方法有高效液相色譜分析法(HPLC)或液相 色譜/質譜聯用分析法(LC/MS)。這些方法普遍存在著儀器昂貴，方法複雜，操作煩瑣，試 劑消耗量大的局限性。20世紀80年代興起的膠體金免疫層析檢測，基於免疫學檢測原理， 操作簡單快捷、結果清晰易於判斷、無需複雜的實驗技能和設備，特別適於現場檢測。能夠 在第一時間檢測水產品中氯黴素殘留，對遏制氯黴素的非法使用具有重要意義。但是目前 市面上的氯黴素膠體金速測產品存在檢測限無法滿足國家限量要求的現狀。解決此問題在 於以下兩個途徑(一)改善抗體質量和競爭物。而改善抗體質量還在於優化免疫原結構； (二)改善包被原結構，從而從競爭物的角度優化抗原抗體識別。
發明內容
針對上訴問題，本發明提供了一種氯黴素免疫原、包被原，該免疫原、包被原能極 大提高氯黴素膠體金速測的靈敏度。本發明的另一個目的是提供該免疫原、包被原在膠體金試紙生產中的應用。上述氯黴素免疫原的製備包括以下步驟
(1)氯黴素半抗原的合成；(2)氯黴素半抗原活潑酯的合成；(3)氯黴素半抗原活潑酯於血藍蛋白進行偶聯；(4)免疫原的純化；(5)免疫原蛋白濃度的確定，分裝。所述的半抗原具有式(I)所示結構
權利要求
1.氯黴素免疫原、包被原，其特徵在於其製備方法為氯黴素半抗原和蛋白進行交聯。
2.根據權利要求1所述的半抗原，其特徵在於所述的半抗原具有式(I)所示結構。
3.根據權利要求1所述的免疫原，其特徵在於所述的免疫原為氯黴素半抗原和血藍蛋 白偶聯的產物，具有式(II)所示結構。
4.根據權利要就1所述的免疫原，其特徵在於其用於免疫實驗動物產生特異性識別氯 黴素的抗體，抗體標記膠體金後，吸附玻璃纖維膜上，置於樣品墊附近，特異性識別氯黴素 分子。
5.根據權利要求1所述的包被原，其特徵在於所述的包被原為氯黴素半抗原和人血清 蛋白偶聯後的產物，具有式(III)所示結構。
6.根據權利要求1所述的包被原，其特徵在於其用於包被於檢測帶附近，識別過量的 膠體金標記氯黴素抗體。
全文摘要
本發明涉及氯黴素免疫原、包被原及其在膠體金試紙中的應用，屬於免疫學技術領域。該免疫原、包被原為氯黴素通過高錳酸鉀氧化後所得的半抗原偶聯載體蛋白的產物。此半抗原在分子結構，立體化學和電子分布上與氯黴素對應體相似。半抗原分子具有便於與蛋白載體偶聯的活性基團，且活性基團的存在對待測物分子的電子分布沒有影響。此半抗原偶連學藍蛋白後能使機體產生效價高，特異性好的針對氯黴素的抗體，吸附於玻璃纖維素膜上；偶連人血清蛋白後構建的包被原可被吸附於硝酸纖維素膜上，用於構建氯黴素膠體金試紙。
文檔編號C07K14/795GK101993487SQ20091018976
公開日2011年3月30日 申請日期2009年8月27日 優先權日2009年8月27日
發明者張世偉, 李細清, 譚攀, 鍾松清 申請人:深圳市三方圓生物科技有限公司