芥菜多糖的提取純化方法

2023-05-27 17:42:16

專利名稱：芥菜多糖的提取純化方法
技術領域：
本發明涉及一種從芥菜中提取芥菜多糖的方法。
背景技術：
芥菜為(Brassica juncea)芸苔屬，十字花科植物。近年來的研究發現芥菜提取物具有抗氧化作用，對預防糖尿病有一定療效，芥菜還具有降血糖和降血脂的作用，這些可能與芥菜多糖有關。包心芥菜價廉易得，可用冬閒農田(晚稻跡地)種植，高產、穩產。該品種定植後75天左右收穫，每畝地約有3500公斤的產量。包心芥菜的這些特點對其多糖的開發極為有利。國外還沒有芥菜(Brassicajuncea)多糖的研究報導。國內內蒙古民族師院的哈森其木格對曾對芥菜多糖進行過初步研究，但分離純化過程很粗糙，沒有得到芥菜多糖純品，對芥菜的品種沒有說明，也沒有後續報導，其提取純化方法如下1、提取稱取芥菜樣品100g用石油醚脫脂24h，脫脂後的樣品在沸水中提取4小時，過濾，殘渣用蒸餾水提取3次，合併三次提取液，過濾，在80℃水浴上濃縮至小體積，加5倍體積的無水乙醇，醇析24小時，將醇析物乾燥，得棕色幹品。
2、純化將步驟1所得的棕色幹品用蒸餾水透析48小時，每隔2小時更換一次水，再用正丁醇-三氯甲烷(1∶5)混合液萃取，除去少量蛋白質後，經雙氧水緩慢脫色，經減壓得白色芥菜多糖。
這種芥菜多糖提取純化方法的缺點如下1、使用大量的石油醚，成本高且汙染環境；2、正丁醇-三氯甲烷有毒，而且會損失多糖，並可能導致芥菜多糖結構的破壞；3、H2O2容易破壞芥菜多糖的結構；4、使用大量的有毒溶劑，汙染環境。

發明內容
本發明的目的是提供一種芥菜多糖的提取純化方法，其成本較低、環保、且可完整保持芥菜多糖結構。
本發明的技術方案是這樣的芥菜多糖的提取純化方法，由下列步驟實現(1)提取在芥菜乾品中按1∶20～65(W/V)的料液比加入蒸餾水，於89.5～90.5℃下在恆溫熱水中浸提1.8～2.2h，過濾，棄濾渣，得粗提液；(2)醇析將步驟(1)所得的粗提液在65～75℃下濃縮至原體積的1/10～1/8後加入乙醇溶液，使乙醇濃度達到55％，醇析2.5～3.5h，初步去除脂溶性小分子物質和色素，並得到芥菜多糖沉澱物；(3)乾燥將步驟(2)所得的芥菜多糖沉澱物用無水乙醇洗滌2～3次，再用揮發性溶劑洗滌2～3次，冷凍乾燥得粗品；(4)透析步驟(3)所得的粗品在適量的蒸餾水中充分溶解，棄不溶物，得上清液，用透析袋將上清液在流水中透析45～51h，再用去離子水中透析22～26h，每7～9h換一次水，進一步去除還原糖、寡糖、無機鹽、色素等小分子雜質；(5)純化將經步驟(4)透析後的液體濃縮，加入DEAE-葡聚糖凝膠A-50柱，用0～1.5mol/L的NaCl進行梯度洗脫，分部收集，收集液用苯酚硫酸法檢測，合併多糖峰的收集液，濃縮，透析真空乾燥，得層析純芥菜多糖。
上述步驟(1)中芥菜乾品與蒸餾水的料液比為1∶40(W/V)。
上述步驟(1)中的恆溫水槽中熱水的溫度為90℃。
上述步驟(3)中的揮發性溶劑為丙酮。
上述步驟(3)中的揮發性溶劑為乙醚。
採用上述技術方案後，所得的芥菜多糖純品中水溶性總糖可達芥菜乾品的15％左右，水溶性多糖可達芥菜乾品的9％左右，而蛋白質含量僅芥菜乾品的0.2％，脂肪含量僅為芥菜乾品的0.4×10-3％。本發明的芥菜多糖的提取純化方法，可以省下大量的有機溶劑，不僅生產成本較低、環保，而且芥菜多糖能夠保持比較完整的結構。且工藝流程簡單，省時省力。
具體實施例方式
本發明芥菜多糖的提取純化方法，由下列步驟實現(1)提取稱取適量的包心芥菜乾品，按1∶40(W/V)的料液比加入蒸餾水，於90℃下在恆溫水槽中熱水浸提2h，四層紗布過濾，棄濾渣，得粗提液。
(2)醇析將步驟(1)所得的粗提液用旋轉蒸發儀在70℃下濃縮至原體積的1/10後加入無水乙醇，使乙醇濃度達到55％，醇析3h，初步去除脂溶性小分子物質和色素，並得到芥菜多糖沉澱物。
(3)乾燥將步驟(2)所得的芥菜多糖沉澱物用無水乙醇洗滌2～3次，再用丙酮或乙醚洗滌2～3次，冷凍乾燥得粗品。
(4)透析將步驟(3)所得的粗品按1∶15(W/V)的料液比加入蒸餾水中溶解，6000r.p.m離心15min，棄不溶物，得上清液，用截留分子量為1000的透析袋將上清液在流水中透析48h，再用去離子水中透析24h，每8h換一次水，進一步去除還原糖、寡糖、無機鹽、色素等小分子雜質。
(5)純化將經步驟(4)透析後的液體濃縮到原體積的1/2～2/3，取2.5ml上DEAE-葡聚糖凝膠A-50柱，DEAE-葡聚糖凝膠A-50柱的規格為2.5×42cm，柱床高度為38cm，用0～1.5mol/L的NaCl進行梯度洗脫，洗脫速度為0.75ml/min，分部收集，每管收集3ml，共收集100管，收集液用苯酚硫酸法檢測，合併多糖峰的收集液，濃縮，透析真空乾燥，得層析純芥菜多糖。
權利要求
1.芥菜多糖的提取純化方法，其特徵在於由下列步驟實現(1)提取在芥菜乾品中按1∶20～65(W/V)的料液比加入蒸餾水，於89.5～90.5℃下在恆溫熱水中浸提1.8～2.2h，過濾，棄濾渣，得粗提液；(2)醇析將步驟(1)所得的粗提液在65～75℃下濃縮至原體積的1/10～1/8後加入乙醇溶液，使乙醇濃度達到55％，醇析2.5～3.5h，初步去除脂溶性小分子物質和色素，並得到芥菜多糖沉澱物；(3)乾燥將步驟(2)所得的芥菜多糖沉澱物用無水乙醇洗滌2～3次，再用揮發性溶劑洗滌2～3次，冷凍乾燥得粗品；(4)透析步驟(3)所得的粗品在適量的蒸餾水中充分溶解，棄不溶物，得上清液，用透析袋將上清液在流水中透析45～51h，再用去離子水中透析22～26h，每7～9h換一次水，進一步去除還原糖、寡糖、無機鹽、色素等小分子雜質；(5)純化將經步驟(4)透析後的液體濃縮，上DEAE-葡聚糖凝膠A-50柱，用0～1.5mol/L的NaCl進行梯度洗脫，分部收集，收集液用苯酚硫酸法檢測，合併多糖峰的收集液，濃縮，透析真空乾燥，得層析純芥菜多糖。
2.根據權利要求1所述的芥菜多糖的提取純化方法，其特徵在於上述步驟(1)中芥菜乾品與蒸餾水的料液比為1∶40(W/V)。
3.根據權利要求1所述的芥菜多糖的提取純化方法，其特徵在於上述步驟(1)中的恆溫水槽中熱水的溫度為90℃。
4.根據權利要求1所述的芥菜多糖的提取純化方法，其特徵在於上述步驟(3)中的揮發性溶劑為丙酮。
5.根據權利要求1所述的芥菜多糖的提取純化方法，其特徵在於上述步驟(3)中的揮發性溶劑為乙醚。
全文摘要
本發明公開了一種芥菜多糖的提取純化方法，其以芥菜乾品為原料，經提取、醇析、乾燥、透析和純化，得芥菜多糖純品，所得的芥菜多糖純品中水溶性總糖可達芥菜乾品的15％左右，水溶性多糖可達芥菜乾品的9％左右，而蛋白質含量僅芥菜乾品的0.2％，脂肪含量僅為芥菜乾品的0.4×10
文檔編號C08B37/00GK1699426SQ20051004054
公開日2005年11月23日 申請日期2005年6月11日 優先權日2005年6月11日
發明者李夏蘭, 魏國棟, 王昭晶 申請人:華僑大學