一種應用絲狀免疫捕獲載體分離純化細菌的方法

2023-05-27 06:32:36

一種應用絲狀免疫捕獲載體分離純化細菌的方法
【專利摘要】本發明涉及一種應用絲狀免疫捕獲載體分離純化細菌的方法。該方法應用絲狀聚合材料作為載體，將捕獲目標病原菌的抗體包被在絲狀載體上，經過緩衝液洗滌，將包被好抗體的絲狀載體放入樣品抽提緩衝液中進行捕獲反應，捕獲反應完成後，用無菌水洗滌絲狀載體，之後將絲狀載體放置於培養基上，根據捕獲目標病原菌的生長條件進行培養，24小時-72小時後觀察到絲狀載體邊緣有菌落生長，根據目標病原菌菌落特徵進行分離純化。本方法靈敏、高效、操作簡便、成本低，在植物樣品材料、食品材料、環境體系中細菌的分離應用中，尤其在植物檢疫領域有很大的利用空間，該方法作為核心技術還能夠開發相關的細菌分離純化試劑盒，因此具有推廣應用價值。
【專利說明】一種應用絲狀免疫捕獲載體分離純化細菌的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及植物病原細菌檢疫、食品和環境微生物檢測方法，尤其涉及一種應用絲狀免疫捕獲載體分離純化細菌的方法。
【背景技術】
[0002]以目前植物病原細菌檢疫工作為例。植物病原細菌的檢疫工作有三個步驟:1、樣品的症狀觀察；2、植物病原細菌的分離；3、病原菌鑑定。其中，第二個步驟即病菌的分離是工作的重點和難點，是植物病原細菌檢疫工作的關鍵。只有拿到分離純化的病原菌，這樣才能進行之後的鑑定工作。目前對植物病原細菌樣品進行初篩通常採取一些分子檢測方法(如常規PCR、螢光PCR、ELISA、基因晶片、液相晶片等)，這些方法只用於樣品的初篩，即初步判定樣品是否攜帶某些病原細菌，但不作為結果判定的最終依據。所以，分離獲得目標病原菌是檢驗結果的證據，也是植物病原細菌檢疫工作的關鍵。
[0003]目前雖然病原菌分離的方法較多，通過分析，均不適應當前植物檢疫工作需要具有快速、準確等特點。若干不同分離方法的比較見表1。目前來看，基於免疫吸附技術的分離方法是植物病原細菌檢疫中的最有效手段。雖然免疫磁珠法具有自動化程度高，分離效果較好的優點，但是方法中採用的設備成本高。因此探尋一種新的分離方法，以適應當前植物檢疫工作需要快速、準確的要求勢在必行。
[0004]表1
【權利要求】
1.一種應用絲狀免疫捕獲載體分離純化細菌的方法，其特徵在於，該方法應用絲狀聚合材料作為載體，將捕獲目標病原菌的抗體包被在絲狀載體上，經過包被緩衝液洗滌，將包被好抗體的絲狀載體放入樣品抽提緩衝液中進行捕獲反應，捕獲反應完成後，用無菌水洗滌絲狀載體，之後將絲狀載體放置於培養基上，根據捕獲目標病原菌的生長條件進行培養，24小時-72小時後觀察到絲狀載體邊緣有菌落生長，根據目標病原菌菌落特徵進行分離純化。
2.根據權利要求1所述的一種應用絲狀免疫捕獲載體分離純化細菌的方法，其特徵在於，該方法應用釣魚線作為絲狀載體`。
【文檔編號】C12N1/20GK103740620SQ201410004439
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月6日 優先權日:2014年1月6日
【發明者】劉鵬, 牛春敬, 郭京澤, 張瑩, 馮潔, 林宇, 羅加鳳, 廖芳 申請人:天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心