中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及指紋圖譜的製作方法

2023-06-06 04:15:11 2

中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及指紋圖譜的製作方法
【專利摘要】本發明首次建立了中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立及指紋圖譜，屬於醫藥【技術領域】，包括如下步驟：(1)對照品溶液的製備；(2)供試品溶液的製備；(3)色譜條件：色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相以乙腈-0.4％的1-庚烷磺酸鈉溶液(醋酸調pH至4.0)梯度洗脫，柱溫為45℃，流速為1.0ml/min，紫外檢測波長為205nm；(4)測定本發明的有益效果在於：以吐根的有效特徵成分鹽酸吐根鹼為對照，採用高效液相色譜法建立了吐根的標準指紋圖譜，能有效、準確的監控吐根及其製劑的質量，方法具有簡便、穩定性好、精密度高、重現性好等優點。
【專利說明】中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及指紋圖譜
【技術領域】
[0001]本發明屬於醫藥【技術領域】，具體涉及中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及指紋圖譜。
【背景技術】
[0002]吐根為菌草科植物Cephaelis ipecacuanha (Brot.) A.Rich.或 Cephaelisacuminate Karsten的乾燥根莖,原產於巴西,在其他熱帶氣候地區也有栽培；具有止咳化痰、催吐、抗阿米巴病等功效；有研究表明其主要藥理活性成分為生物鹼類化學成分。目前吐根藥材、吐根粉和吐根糖漿的質量標準在美國藥典、日本藥典和歐洲藥典均有收載。各國藥典中多以吐根鹼和吐根酚鹼的含量做為吐根藥材及其製劑的主要質量評價指標，其中在美國藥典及歐洲藥典中主要是採用示差折光光度法檢測吐根鹼和吐根酚鹼的含量、採用酸鹼滴定的方法測定總生物鹼的含量；日本藥典(JP16)則採用了高效液相色譜法檢測吐根鹼和吐根酚鹼的含量。但是，吐根作為一種中草藥，其藥效並不是來自任何單一的活性成分，其藥效作用應是多種活性成分共同協作的結果。因此，對於吐根及其製劑目前多採用吐根鹼和吐根酚鹼成分進行質量控制的方法並不能準確全面反映產品的內在質量。

【發明內容】

[0003]為簡便、快捷、科學、準確、多指標控制吐根藥材及其製劑的質量，本發明提供了中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及指紋圖譜，通過獲取中藥吐根及其製劑的高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜，以有效的控制中藥吐根及其製劑的質量，保證臨床療效及安全用藥。
[0004]本發明中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及指紋圖譜，所採用的步驟包括如下:
[0005](I)對照品溶液的製備
[0006]精密稱取鹽酸吐根鹼對照品，用甲醇製成每Iml含鹽酸吐根鹼10-30 μ g的溶液，作為對照品溶液。
[0007](2)供試品溶液的製備
[0008]取吐根粉末，置於容量瓶中，加體積比為1: 200的鹽酸-60%甲醇水溶液，密塞，靜置浸潤，超聲處理，放冷後，加甲醇定容至刻度，搖勻，離心，取上清即得供試品溶液；或取吐根製劑置容量瓶中，加甲醇水溶液溶解並定容，搖勻，離心，取上清即得供試品溶液。
[0009]進一步優化為:取吐根粉末0.1-0.5g，置於50_100ml容量瓶中，加體積比為
I: 200的鹽酸-60%甲醇水溶液，密塞，靜置浸潤，超聲處理，放冷後，加甲醇定容至刻度搖勻，離心，取上清即得供試品溶液；或取吐根製劑0.2-lml，加30-70%甲醇水溶液溶解並定容至50-100ml，搖勻，離心，取上清即得供試品溶液。
[0010]更優化為:取吐根粉末0.25g，置於IOOml容量瓶中，加體積比為1: 200的鹽酸-60%甲醇水溶液，密塞，靜置浸潤30分鐘後，以功率250w，頻率40kHz超聲處理，放冷後，加甲醇定容至刻度搖勻，離心，取上清即得供試品溶液；或取吐根製劑0.5ml，加60%甲醇水溶液溶解並定容至IOOml ;搖勻，離心，取上清即得供試品溶液。
[0011]⑶色譜條件
[0012]色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，流動相以乙腈-0.4%的1-庚烷磺酸鈉溶液(醋酸調PH至4.0)梯度洗脫，梯度洗脫程序見表I，柱溫為45 V，流速為1.0ml/min,紫外檢測波長為205nm，；理論板數按鹽酸吐根鹼峰計算應不低於3000 ；
[0013]表1:乙腈-0.4%的1-庚烷磺酸鈉溶液(醋酸調pH至4.0)梯度洗脫
[0014]
【權利要求】
1.中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)對照品溶液的製備:精密稱取鹽酸吐根鹼對照品，用甲醇製成每Iml含鹽酸吐根鹼10-30 μ g的溶液，作為對照品溶液； (2)供試品溶液的製備:取吐根粉末，置於容量瓶中，加體積比為1: 200的鹽酸-60%甲醇水溶液，密塞，靜置浸潤，超聲處理，放冷後，加甲醇定容至刻度，搖勻，離心，取上清即得供試品溶液；或取吐根製劑置容量瓶中，加甲醇水溶液溶解並定容，搖勻，離心，取上清即得供試品溶液； (3)色譜條件:色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，流動相以乙腈-0.4%的1-庚烷磺酸鈉溶液，梯度洗脫，柱溫為45°C，流速為1.0ml/min,紫外檢測波長為205nm ； (4)測定:精密吸取供試品溶液，注入高效液相色譜儀，按步驟(3)色譜條件測定，即得指紋圖譜。
2.根據權利要求1所述的中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特徵在於: 步驟(2)供試品溶液的製備:取吐根粉末0.1-0.5g，置於50-100ml容量瓶中，加體積比為1: 200的鹽酸-60%甲醇水溶液，密塞，靜置浸潤，超聲處理，放冷後，加甲醇定容至刻度搖勻，離心，取上清即得供試品溶液；或取吐根製劑0.2-lml，加30-70%甲醇水溶液溶解並定容至50-100ml，搖勻，離心，取上清即得供試品溶液； 步驟(4)測定:精密吸取各供試品溶液5-25 μ 1，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，即得吐根指紋圖譜。
3.根據權利要求1所述的中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特徵在於: 步驟(2)供試品溶液的製備:取吐根粉末0.25g，置於IOOml容量瓶中，加體積比為I: 200的鹽酸-60%甲醇水溶液，密塞，靜置浸潤30分鐘後，以功率250w，頻率40kHz超聲處理，放冷後，加甲醇定容至刻度搖勻，離心，取上清即得供試品溶液；或取吐根製劑0.5ml，加60%甲醇水溶液溶解並定容至IOOml ;搖勻，離心，取上清即得供試品溶液； 步驟(4)測定:精密吸取各供試品溶液10 μ 1，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，即得吐根指紋圖譜。
4.根據權利要求1所述的中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特徵在於:步驟(3)中所述的梯度洗脫，程序如下:
5.根據權利要求1所述的中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特徵在於:所述中藥吐根及其製劑的指紋圖譜有11個共有峰，其中11號峰鹽酸吐根鹼為參照峰，各峰相對保留時間和相對峰面積分別為:相對保留時間:1號峰:0.116~0.124，2號峰:0.135~0.142，3號峰:0.195~0.201，.4 號峰:0.221 ~0.229,5 號峰:0.285 ~0.291,6 號峰:0.348 ~0.356,7 號峰:0.496 ~.0.504，8 號峰:0.790 ~0.798，9 號峰:0.811 ~0.819，10:0.882 ~0.891，11 號峰:1.000 ；相對峰面積:1號峰:0.017~0.078，2號峰:0.008~0.030，3號峰:0.011~0.045，.4 號峰:0.013 ~0.020,5 號峰:0.710 ~1.421,6 號峰:0.066 ~0.082,7 號峰:0.019 ~.0.071，8 號峰:0.008 ~0.035，9 號峰:0.004 ~0.049，10 號峰:0.201 ~2.522，11 號峰:.1.000。
6.根據權利要求1所述的中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特徵在於:其製劑指吐根流浸膏、吐根浸膏或吐根酊劑。
7.根據權利要求6所述的中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特徵在於:吐根流浸膏每Iml相當Ig生藥材。
8.根據權利要求1所述的中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特徵在於:所述步驟(2)中離心條件為12000r/min離心10~15min。
9.根據權利要求1所述的中藥吐根及其製劑高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特徵在於:所述指紋圖譜的建立方法，採用國家藥典委員會制定的《中藥指紋圖譜相似度計算軟體》(2004)，經過多點校正，色譜峰的匹配，計算供試品溶液指紋圖譜與制定的標準指紋圖譜的相似度；指紋圖譜相似度計算參數設置為:時間寬度為0.5s ;校正方式採用多點校正，校正色譜峰的匹配點為共有峰，5號峰:0.285~0.291，10號峰:0.882~0.891，11號峰:1.000。
【文檔編號】G01N30/02GK103454353SQ201310336998
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年7月30日 優先權日:2013年2月6日
【發明者】賈放, 孫曄, 張志生, 邊婧, 何珊珊, 杜麗麗, 朱長兵, 黃日羨 申請人:廣東先強藥業股份有限公司