一種利用產朊假絲酵母製備富硒酵母的方法
2023-06-18 12:04:31 1
專利名稱：一種利用產朊假絲酵母製備富硒酵母的方法
技術領域：
本發明涉及一種新的製備富硒酵母的方法，特別涉及利用產朊假絲酵母製備富硒 酵母的的方法。
背景技術：
硒元素是公認的必需微量元素，其在過氧化物的分解和自由基的清除、機體免疫 力的調節、有毒元素的拮抗等方面均發揮著重要作用。目前的補硒添加劑包括無機硒和有 機硒，因有機硒的食用安全性強、生物利用率更高，其是更優的補硒添加劑。通過生物富硒 的方法將無機硒轉化為有機硒是一種安全有效的方法，且富硒酵母的生產較為簡便。因此， 富硒酵母是最常用的補硒添加劑。關於富硒酵母的研究較多，開發成本更低、含硒量更高的富硒酵母是近來研究的
執佔·葛曉光等，「富硒產朊假絲酵母的製備條件研究」，糧食與飼料工業，2009年，第10 期公開了環境條件對產朊假絲酵母細胞生長和富硒能力的影響。發酵菌種為產朊假絲酵 母(Candida utilis SZU 07-01)，在培養基為葡萄糖30. Og/L、硫酸銨8. Og/L、磷酸二氫鉀 3. Og/L、硫酸鎂0. 25g/L，加硒量為10mg/L的條件下發酵，得到的富硒酵母的生物量為Ilg/ L，硒的有機轉化率為90. 2%，其細胞中含硒量為998 μ g/g，有機硒含量為90. 2%。該方法 使用的無機硒少，生產成本低，富硒酵母的生物量高，但是富硒酵母的含硒量低。範秀英等，「高生物量富硒酵母的選育及培養條件初步優化」，生物工程學報，2003 年，第19卷第6期公開了一種高生物量富硒酵母菌株ZFF-觀及其優化培養條件。發酵菌 種為篩選誘變得到的ZFF-28，在培養基為蔗糖糖蜜培養基，加硒量為60μ g/ml的條件下發 酵，得到的富硒酵母的生物量為8. 2g/L，細胞中硒含量為2025 μ g/g,有機硒含量為91 %。 該方法得到的富硒酵母的含硒量較高，但是富硒酵母的生物量低且使用的無機硒多，導致 工業生產成本較高。現有文獻還沒有同時兼顧低生產成本、高生物量和高含硒量的富硒酵母製備方法 的相關報導。
發明內容
為了解決上述問題，本發明提供了一種新的製備富硒酵母的技術方案。本發明提供了一種製備富硒酵母的方法，包括下列步驟a,取保藏號為CICC 1422的產朊假絲酵母復甦並製備種子；b，將步驟a得到的種子接種於發酵培養基中發酵，發酵時間為24-36小時；c，在發酵液中加入硒，硒的終濃度為10 20mg/L，繼續發酵，發酵時間為小 時，收集菌液；d，將步驟c得到的菌液離心，收集菌體，烘乾，即得富硒酵母。步驟b所述的發酵培養基為YPS培養基；步驟b所述的發酵時間為M小時；步驟b和步驟c的發酵pH為4 6. 5，優選為5. 1 ；步驟b和步驟c的發酵溫度為觀 30°C ；步 驟c所述的硒的終濃度為15mg/L ；步驟c所述的硒為亞硒酸鈉；步驟c所述的發酵時間為 36小時。本發明還提供一種由前述方法製備得到的富硒酵母。本發明提供的製備富硒酵母的方法成本低，加硒量僅為15mg/L，得到的富硒酵 母的生物量高，可達到為9. 7g/L，富硒酵母的含硒量高，可達到1430 μ g/g，有機硒含量為 1300μ g/g。本發明提供的方法可以在生產成本較低的情況下，得到生物量和含硒量均較高 的富硒酵母，適於產業化生產。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發明的上述內容作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實施例。凡基於本發明上述內 容所實現的技術均屬於本發明的範圍。
圖1不同pH對產朊假絲酵母生長的影響。圖上的7個點從左至右分別表示發酵 PH為4,4. 5、5、5· 5、6、6· 5、7得到的酵母菌的生物量。圖2酵母菌的重量隨pH變化的趨勢線。該曲線是根據圖1的曲線經回歸分析得 出的曲線。圖3不同接種量的產朊假絲酵母生長曲線。圖上曲線2%表示接種量為2%時產 朊假絲酵母的生長情況；圖上曲線5%表示接種量為5%時產朊假絲酵母的生長情況；圖上 曲線10%表示接種量為10%時產朊假絲酵母的生長情況。
具體實施例方式1材料與試劑1. 1 菌種產朊假絲酵母(Candida utilis)，購於中國工業微生物菌種保藏管理中心，保藏 號為CICC 1422 ；啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，購於中國工業微生物菌種保藏 管理中心，保藏號為CICC 31362。1. 2 儀器HZS-HA水浴振蕩器、SHEN AN手扶式高壓滅菌鍋、101-3A電熱鼓風恆溫乾燥箱、雷 磁PHS-3D PH計、90-1型恆溫磁力攪拌器、722光柵分光光度計、新苗QYC-2102大容量雙層 全溫搖床、Sff-CJ-IFD單人單面淨化工作檯、BI0FUGE冷凍離心機1. 3 試齊[J蔗糖(分析純)、酵母粉(生化試劑)、蛋白腖(生化試劑)、酒石酸(分析純)、亞 硒酸鈉(優級純)、瓊脂(生化試劑)1. 4硒母液的配製1)標準硒貯備液準確稱取2. 190g乾燥的亞硒酸鈉，溶於蒸餾水，添加80ml、48% 的HBr，然後用蒸餾水稀釋至1L，製備成含硒lg/L的標準硒貯備液。2)硒標準溶液取上述貯備液Iml加蒸餾水定容為1L，即含硒量為lmg/L，高壓滅 菌，備用。
1. 5培養基的製備1)斜面培養基取去皮土豆200g，切成小塊，加蒸餾水1L。小火煮沸45 60min，用紗布過濾，然 後補足失水至1L，並同時加入蔗糖20g ；瓊脂粉20g ；酵母粉2g ；蛋白腖2g。趁熱分裝於 試管中，裝入量為試管長度的1/3，加塞後經121°C滅菌20min。在培養基未凝固前呈15° 斜面放置，凝固並經恆溫37°C培養24h鑑定無菌後，置於4°C冰箱貯存備用。2)天然培養基(PS4)，種子培養基取去皮土豆200g，切成小塊，加蒸餾水1L。小火煮沸45 60min，用紗布過濾，然 後補足失水至1L，並同時加入蔗糖40g，121C滅菌20min後，置於4°C冰箱貯存備用。3)YPG取酵母粉10g，蛋白腖10g，葡萄糖20g，加蒸餾水至1L，121°C滅菌20min後，置於 4°C冰箱貯存備用。4) YPS取酵母粉10g，蛋白腖10g，蔗糖50g，加蒸餾水至1L，121V滅菌20min後，置於4°C
冰箱貯存備用。本發明試驗數據採用SAS 8. OGLM程序進行統計分析，REG程序建立線性回歸方 程，並進行顯著性檢驗。實施例1菌種及培養基的確定1、菌種復甦分別將啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和產朊假絲酵母 (Candidautilis)在無菌條件下，用接種環接種於斜面培養基上，於觀 30°C下培養Mh， 復甦菌種，復甦兩代。2、酵母種子培養在250ml三角瓶中(裝液量為50ml)裝入種子培養基，取復甦後的菌種分別接種 於種子培養基中，150r/min、28 30°C下培養Mh，作為種子。3、發酵培養在250ml三角瓶中分別裝入50ml PS4、YPG和YPS液體培養基，以10%的接種量 將兩種酵母種子分別接入不同的培養基中，150r/min、28 30°C下培養72h。收穫菌液，離 心(5000r/min，IOmin)後棄上清液收穫菌體，將菌體在65 70°C烘乾，以菌體重量達到恆 重為準，即得酵母，稱重。4、結果結果見表1 表1兩種酵母在不同培養基中的生長情況(g/L)
權利要求
1.一種製備富硒酵母的方法，其特徵在於包括下列步驟 a，取保藏號為CICC 1422的產朊假絲酵母復甦並製備種子；b，將步驟a得到的種子接種於發酵培養基中發酵，發酵時間為M 36小時； c，在發酵液中加入硒，硒的終濃度為10 20mg/L，繼續發酵，發酵時間為24-48小時， 收集菌液；d，將步驟c得到的菌液離心，收集菌體，烘乾，即得富硒酵母。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟b所述的發酵培養基為YPS培養基。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟b所述的發酵時間為M小時。
4.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟b和步驟c的發酵溫度為^ 30°C。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於所述的發酵pH為4 6.5。
6.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於所述的發酵pH為5.1。
7.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟c所述的硒的終濃度為15mg/L。
8.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟c所述的硒為亞硒酸鈉。
9.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟c所述的發酵時間為36小時。
10.權利要求1 9任意一項所述的方法製備得到的富硒酵母。
全文摘要
一種利用產朊假絲酵母製備富硒酵母的方法，涉及一種新的製備富硒酵母的方法。一種製備富硒酵母的方法，包括下列步驟a，取保藏號為CICC 1422的產朊假絲酵母復甦並製備種子；b，將步驟a得到的種子接種於發酵培養基中發酵，發酵時間為24-36小時；c，在發酵液中加入硒，硒的終濃度為5～20mg/L，繼續發酵，發酵時間為24-48小時，收集菌液；d，將步驟c得到的菌液離心，收集菌體，烘乾，即得富硒酵母。本發明的方法可以較好的兼顧生產成本、富硒酵母的生物量以及富硒酵母的含硒量，在消耗少量無機硒的情況下，得到生物量和含硒量均較高的富硒酵母，適於產業化生產。
文檔編號C12R1/72GK102146355SQ20111000359
公開日2011年8月10日 申請日期2011年1月10日 優先權日2011年1月10日
發明者何軍, 餘冰, 陳代文 申請人:四川農業大學