測定納豆激酶標準活性值的方法
2023-05-26 18:57:06 2
專利名稱：測定納豆激酶標準活性值的方法
技術領域：
本發明涉及一種測定納豆激酶標準活性值的方法，特別是指一種可以針對一未知活性的納豆激酶，能夠正確地獲得其標準活性值的測定納豆激酶標準活性值的方法。
背景技術：
近年來，納豆激酶(Nattokinase)由於被證實具有抗血栓與降低人類腦溢血發生機率的功效，所以造成其需求量激增，有許多的廠商也因此積極地加入生產研發的行列，其所生產製造出來的納豆激酶的品質好壞，便成為重要的課題，其中，納豆激酶的活性值即成為一可以作為判斷品質基準的依據。
所謂納豆激酶的活性值基本上即是代表每單位體積的納豆激酶樣品中具有的納豆激酶的濃度，應該是一種相對值的概念，而非絕對值的概念，日本納豆協會為了規範坊間納豆激酶的活性值，公布了一種可以測試出納豆激酶的標準活性值的方法(以下稱標準測定法)，該方法主要是取待測納豆激酶的樣本與一空白樣本做比較，最後利用公式FU/g＝(AT-AB)/0.01×1/60×1/0.1×D，其中AT為待測納豆激酶樣本對於OD275的吸光值，AB為空白樣本對於OD275吸光值，D為樣品稀釋倍數，計算出納豆激酶的標準活性值，並將其定義成1單位活性(FU)為每克(g)每分鐘使OD275吸光值增加0.01的酶量。
但由於日本納豆協會有接受坊間人員付費而進行檢定納豆激酶的標準活性值的業務，其檢測報告中會大致上將其測試方法(即所謂標準測定法)附給坊間人員，但因為其方法並沒有詳盡告知細節，所以坊間人員若是需要自行測試某一未知活性的納豆激酶時，即便是依據日本納豆協會所提供的標準測定法來進行測試，也無法獲得納豆激酶的正確標準活性值，其中，主要原因是在測試納豆激酶的活性過程中的稀釋步驟，針對不同的稀釋度將會影響其測試出來的活性值的結果，例如請參照圖1所示，若是利用一經過日本納豆協會測試過並標示為4000單位活性(FU)的納豆激酶作為實驗對象，然後再依據不同的稀釋度製作出多個待測樣品，利用日本納豆協會所檢附的標準測定法進行實驗後，可以獲得多個單位活性(FU)值，繪製成如圖1所示的曲線，可以發現當此納豆激酶的稀釋度大約在70倍時，其所測試出來的活性值才會等於日本納豆協會所測試出來的標準活性值；同樣的，再利用另一經過日本納豆協會測試過並標示為8000單位活性(FU)的納豆激酶作為實驗對象，同樣依據不同的稀釋度製作出多個待測樣品，利用日本納豆協會所檢附的標準測定法進行實驗後，也可以獲得多個單位活性(FU)值，繪製成如圖2所示的曲線，可以發現當此納豆激酶的稀釋度大約在160倍時，其所測試出來的活性值才會等於日本納豆協會所測試的標準活性值。
由上述的實驗可以得知，僅利用日本納豆協會所提供的標準測定法所獲得的活性值，仍舊會依據不同的納豆激酶的稀釋度而有所差異，這樣若是針對一未知活性值的納豆激酶而言，由於同時無法知到其標準活性值以及稀釋度，所以此方法根本無法獲知其真正的標準活性值為何？每每僅能將所欲測試活性值的納豆激酶樣本送交日本納豆協會測試，才能得知其正確的標準活性值，這無異是造成納豆激酶成本無法下降的主要原因。
發明內容
本發明的目的在於提供一種測定納豆激酶標準活性值的方法，可以針對一未知活性的納豆激酶，自行測定出其標準活性值。
為達上述目的，本發明提供了一種測定納豆激酶標準活性值的方法，該方法包含下列步驟準備一標準活性值對應曲線；取一未知活性值的納豆激酶稀釋成多個樣本，並分別以一標準測定法測試後，可以分別得知一活性值，獲得一樣本曲線；將樣本曲線與標準活性值對應曲線疊合後，產生一交點；以及該交點所對應的活性值即為納豆激酶的標準活性值。
根據本發明的優選具體實施方案，所述標準測定法的步驟包含取一納豆激酶的樣本與一空白樣本做比較；以及利用公式FU/g＝(AT-AB)/0.01×1/60×1/0.1×D獲得納豆激酶的一標準活性值，其中AT為該納豆激酶的樣本對於OD275的吸光值，AB為空白樣本對於OD275的吸光值，D為該納豆激酶的樣本的稀釋倍數，獲得每克(g)每分鐘使OD275吸光值增加0.01的酶量。
根據本發明的優選具體實施方案，所述標準活性值對應曲線是由多個分別具有標準活性值的納豆激酶依據所述標準測定法實驗後而獲得。
根據本發明的優選具體實施方案，該未知活性值的納豆激酶稀釋成多個樣本的稀釋度間隔值最好不大於100倍，以獲得較佳的精度。
由上述可知，根據本發明提供的測定納豆激酶標準活性值的方法，可解決現有技術中的困擾，在不需要增設任何實驗設備與增加其它實驗成本的狀況下，即能測定一未知活性的納豆激酶的標準活性值，具有產業價值。
圖1為標準活性值為4000FU的納豆激酶稀釋成多個樣本後，經由標準測定法測試的實驗數據圖。
圖2為標準活性值為8000FU的納豆激酶稀釋成多個樣本後，經由標準測定法測試的實驗數據圖。
圖3為本發明的測定納豆激酶標準活性值的方法的流程方塊示意圖。
圖4為標準活性值對應曲線的實驗數據圖。
圖5為一未知活性值的納豆激酶的樣本曲線與標準活性值對應曲線疊合的實驗數據圖。
圖中主要符號說明20標準活性值對應曲線30樣本曲線P交點具體實施方式
請參照圖3所示，為本發明的測定納豆激酶標準活性值的方法的流程示意圖。
首先，必須先準備一標準活性值對應曲線，針對這一目標，必須先準備多個分別具有標準活性值的納豆激酶，也就是說，這些多個納豆激酶均由日本納豆協會所測定後的其分別的標準活性值，再依據標準測定法實驗後獲得其相對應的稀釋值，形成一標準活性值對應曲線；舉例而言，請參照圖4所示，可以先準備標準活性值分別為4000FU、8000FU、12000FU、16000FU、20000FU的納豆激酶樣本，但無須以此為限，若是提供更多的納豆激酶樣本更可以提高其正確率，這些納豆激酶樣本的標準活性值均需經由日本納豆協會所測定的，經過標準測定法實驗後可以獲得其相對應的稀釋值，即可以繪製成一標準活性值對應曲線20。
接下來，針對一未知活性值的納豆激酶，將其稀釋成多個樣本，其稀釋度間隔值儘量越小越好，這樣可以獲得較佳的精度，優選地，多個樣本的稀釋度間隔值不大於100倍，並分別以標準測定法測試每個樣本後，可以分別得知其相對的活性值，並繪製成一樣本曲線，其中，標準測定法即為前述日本納豆協會所公布的測定納豆激酶的標準活性值的方法；舉例而言，請參照圖5所示，可以將一未知活性值的納豆激酶，以稀釋度間隔值為50倍為例，稀釋成9個樣本，也就是說，將9個樣本中分別以100倍、150倍、…、450倍與500倍的稀釋度等進行稀釋，然後將每一個樣本由標準測定法測試後即可以得到多個活性值，以上述為例，其活性值分別可為5467FU、7200FU、12000FU、15333FU、15600FU、17276FU、20800FU、21600FU與26600FU等，即可以繪製出如圖5中的樣本曲線30。
再者，將樣本曲線30與標準活性值對應曲線20疊合在一起，如圖5所示，兩條曲線疊合後可以產生至少一交點P，該交點P所對應的活性值即為該未知活性的納豆激酶的標準活性值，以上述為例，兩條曲線的交點P所對應的活性值(約12000FU)即為該未知活性的納豆激酶的標準活性值。
依據本發明上述的方法，即可在不需要增設任何實驗設備與增加其它實驗成本的狀況下，藉由所預先準備的標準活性值對應曲線與其樣本曲線的疊合，測定一未知活性的納豆激酶的標準活性值，解決了現有技術中在無法同時得知一未知活性的納豆激酶的稀釋度以及其標準活性值時，無法獲得其標準活性值的困擾，可見本發明實為具有產業價值的方法。
以上所述僅為本發明的優選實施例而已，上述實施例僅用來說明而非用以限定本發明的保護範圍。凡依本發明內容所作的均等變化與修飾，皆應屬於本發明的涵蓋範圍。
權利要求
1.一種測定納豆激酶標準活性值的方法，該方法包含下列步驟準備一標準活性值對應曲線；取一未知活性值的納豆激酶稀釋成多個樣本，並分別以標準測定法測試後，可以分別得知一活性值，獲得一樣本曲線；將該樣本曲線與該標準活性值對應曲線疊合後，產生一交點；以及該交點所對應的活性值即為該納豆激酶的標準活性值。
2.如權利要求1所述的測定納豆激酶標準活性值的方法，其中該標準測定法的步驟包含取一納豆激酶的樣本與一空白樣本做比較；以及利用公式FU/g＝(Aτ-AB)/0.01×1/60×1/0.1×D獲得該納豆激酶的標準活性值，其中Aτ為該納豆激酶的樣本對於OD275的吸光值，AB為空白樣本對於OD275的吸光值，D為該納豆激酶的樣本的稀釋倍數，獲得每克每分鐘使OD275吸光值增加0.01的酶量。
3.如權利要求1所述的測定納豆激酶標準活性值的方法，其中該標準活性值對應曲線是由多個分別具有標準活性值的納豆激酶依據標準測定法實驗後而獲得。
4.如權利要求1所述的測定納豆激酶標準活性值的方法，其中取該未知活性值的納豆激酶稀釋成多個樣本的稀釋度間隔值不大於100倍。
全文摘要
本發明涉及一種測定納豆激酶標準活性值的方法，其步驟包含準備一標準活性值對應曲線；取一未知活性值的納豆激酶稀釋成多個樣本，並分別以一標準測定法測試後，可以分別得知一活性值，獲得一樣本曲線；將樣本曲線與標準活性值對應曲線疊合後，產生一交點；該交點所對應的活性值即為納豆激酶的標準活性值。
文檔編號C12Q1/25GK1936015SQ20051010538
公開日2007年3月28日 申請日期2005年9月23日 優先權日2005年9月23日
發明者呂志翼, 鄭俊明 申請人:人宇生物科技股份有限公司