將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用的製作方法
2023-05-26 12:01:11
專利名稱：將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用的製作方法
技術領域：
本發明是關於一種將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，特別是指一種通過添加中間質溶液使水溶性核酸溶液與非水溶性的介質均勻混合，以獲得含有核酸的非水溶性介質。
背景技術：
隨著生物科技產業的蓬勃發展，生物技術的應用愈來愈廣，不僅是在醫藥方面的運用，例如疾病的預防、檢驗與治療；在農業上的開發，例如農作物的品種改良、家禽家畜的育種養殖；更進一步結合電子數字系統，將個別生物體的獨特性質轉換成數字訊號，例如利用聲音操控家電用品、透過指紋或虹膜辨識的保全系統等等。因此，可以知道結合生物科技並運用至日常生活中是未來科技發展必然的趨勢。
核酸包含去氧核糖核酸(即DNA)及核糖核酸(即RNA)，是負責傳遞遺傳信息的生物分子，組成核酸的單元體核苷酸中的含氮鹼基(嘌呤或嘧啶)具有專一性的配對方式，在去氧核糖核酸(簡稱為DNA)中，A與T配對，中間以兩個氫鍵連接。在核糖核酸(簡稱為RNA)中A與U的間以兩個氫鍵連接。不論是在DNA或RNA，C與G配對，中間以三個氫鍵連接。透過不同排列組合所得到的各種不同序列的核酸分子，在生物體內稱為基因，帶有各種不同的信息。其高度專一性的配對與不受高溫破壞特性使不同序列的核酸分子在實驗室中經常被當作標記使用，透過聚合酶連鎖反應及序列分析來檢驗特定基因序列及分布。
現有的防偽辨識方式主要有兩種除了產品本身特殊的設計及造型，就是以外加標記的方式來達到辨識的目的。傳統的標記多以物理性質或化學反應來設計，例如磁性條形碼、雷射標記圖案、光變色或感熱型油墨；其易被人模仿、破壞，而喪失防偽功能；發明人想到若可以進一步利用核酸分子作為防偽標記，其不容易被識破、也不易仿冒，將是一種十分有效的防偽標記。
但是，眾所皆知核酸為高度水溶性的分子，很容易溶於水溶性溶液中，例如PBS或TE緩衝溶液，但尚無法溶解於非水溶性的溶劑或介質中。目前所應用的類似技術是將DNA水溶性溶液直接塗布在所欲辨識的標的物表面，乾燥後作為一種辨識標示。然而，其最大的缺點在於水溶性DNA溶液容易脫落，亦即DNA標記無法長期完整地附著在所欲辨識的標的物上，因而喪失其防偽標示功能。
發明內容
本發明的主要目的在於提供一種將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其利用添加中間質的過程(Intermediate process)使核酸溶液與液化的非水溶性介質均勻混合，形成單一相含有核酸的非水溶性介質。
本發明的另一目的在於提供一種將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，是將含有已知序列核酸的非水溶性介質塗布在欲辨識的固體標的物上或與液體標的物混合，使該標的物具有特定的核酸標記。
本發明的又一目的在於提供一種含有核酸的非水溶性介質，其具有可塑性可以牢固附著在標的物上，不易脫落。
本發明的再一目的在於提供一種含有核酸的非水溶性介質，其中該介質可以保護該核酸分子使其不易被分解破壞。
為了達到上述目的，本發明提供一種將核酸溶解於非水溶性介質的方法及其應用，其至少包含下列步驟首先將核酸溶解於水溶性溶液中以形成第一溶液；將非水溶性介質溶於溶劑中以形成第二溶液；然後添加中間質溶液於該第一溶液中；最後混合該含有中間質的第一溶液與該第二溶液以形成含有核酸的第三溶液。其中該非水溶性介質為一惰性介質且不會破壞核酸結構；該中間質溶液為一極性介於第一溶液與第二溶液的間的溶液。
本發明附加的利益、目的及特色將通過下面的部分來加以描述，熟知技藝者可由下面的具體實施例及描述而了解、並實施本發明。本發明的目的及其它優點可以通過本說明書及其權利要求書所撰寫的內容，加上流程圖所描繪指示的步驟來實現。
圖1是本發明將核酸溶於非水溶性介質的方法流程圖。
具體實施例方式
為對本發明的結構、特徵及所欲達成的功效有一完整而詳盡的認識與了解，現配合附圖和實施例做一詳細說明。
在本文中「核酸」一詞代表去氧核糖核酸(即DNA)及核糖核酸(即RNA)的總稱。
請參閱圖1，是本發明將核酸溶於非水溶性介質的方法流程圖。其至少包含下列步驟首先，分別將核酸溶解於水溶性溶液中，形成第一溶液；將非水溶性介質溶於溶劑中，形成第二溶液；然後添加中間質溶液於該第一溶液中；最後混合該含有中間質的第一溶液與該第二溶液以形成含有核酸的第三溶液。
上述非水溶性介質為一惰性介質，其不會破壞核酸結構，在此可列舉的例子包含聚合物，選自由聚丙烯(polypropylene，PP)、聚碳酸酯(polycarbonate)及聚苯乙烯(polystyrene，PS)組成的族群。在本發明中較佳的非水溶性介質是聚苯乙烯。
上述溶劑包含有機溶劑，其中該有機溶劑選自由氯仿、二氯甲烷、苯類溶劑所組成的族群。
上述核酸包含天然與合成的核酸。所謂「天然」核酸選自由原核生物，例如細菌；真核生物，例如植物、動物，病毒，菌物(fungi)及其它生物、組織所萃取的核酸。「合成」核酸包含人工合成的載體、片段所組成的族群。
上述水溶性溶液，選自由水、TE緩衝溶液及PBS緩衝溶液組成的族群。
上述中間質溶液為極性介於第一溶液與第二溶液的間的溶液，其用以增加水溶性核酸溶液在非水溶性介質的溶解度。該中間質溶液包含有機溶劑。其中該有機溶劑選自由酒精、丙酮及其混合物組成的族群。上述中間質溶液的添加量約為非水溶性介質的5％至50％。
以含有核酸的非水溶性介質作為標記用途時，是將已知序列的核酸溶於水或水溶性緩衝溶液中，形成第一溶液；將非水溶性介質溶於溶劑中，形成第二溶液；然後添加中間質溶液於該第一溶液中；最後混合該含有中間質的第一溶液與該第二溶液以形成含有核酸的第三溶液，亦即含有已知序列核酸的非水溶性介質。將該含有已知序列核酸的非水溶性介質塗抹在固體標的物上或與液體標的物混合，使該標的物具有核酸標記。
上述的非水溶性介質為一惰性介質，其不會破壞核酸結構，在此可列舉的例子包含聚合物，選自由聚丙烯(polypropylene，PP)、聚碳酸酯(polycarbonate)及聚苯乙烯(polystyrene，PS)組成的族群。在本發明中較佳的非水溶性介質是聚苯乙烯。
上述的溶劑包含有機溶劑，其中該有機溶劑選自由氯仿、二氯甲烷、苯類溶劑所組成的族群。
在此所使用的核酸包含天然與合成的核酸。所謂「天然」核酸選自由原核生物，例如細菌，真核生物，例如植物、動物，病毒，菌物(fungi)及其它生物、組織所萃取的核酸。「合成」核酸包含人工合成的載體、片段所組成的族群。
上述的水溶性溶液，選自由水、TE緩衝溶液及PBS緩衝溶液組成的族群。
上述中間質溶液為極性介於第一溶液與第二溶液的間的溶液，其用以增加水溶性核酸溶液在非水溶性介質的溶解度。該中間質溶液包含有機溶劑。其中該有機溶劑選自由酒精、丙酮及其混合物組成的族群。上述中間質溶液的添加量約為非水溶性介質的5％至50％。
上述的固體標的物在此可列舉的例子，包含古董、雕塑品、珠寶飾品、畫作、金融卡、信用卡、其它辨識用卡片及其它收藏品。上述的液體標的物在此可列舉的例子，包含油墨、油漆、潤滑油、汽油、顏料、化妝品、印泥及膠水。
此外，該含有核酸的非水溶性介質可以直接當作原料，製成各種含有核酸標記的產品。
本發明較佳實施例如下
將去氧核糖核酸(DNA)溶於聚苯乙烯(Polystyrene)的方法。
材料去氧核糖核酸、水、聚苯乙烯、氯仿、95％乙醇與丙酮(作為中間質溶液)方法將5μg的去氧核糖核酸溶於100μl的水中，將5g的聚苯乙烯溶於50ml氯仿中，其最後濃度為10％(w/v)。之後將10μl的95％乙醇與丙酮溶液分別加入上述去氧核糖核酸溶液中，最後將溶於氯仿的聚苯乙烯與含有中間質的去氧核糖核酸溶液充分混合(vigorous vortex)。通過添加的中間質溶液使去氧核糖核酸溶液與溶於氯仿的聚苯乙烯可以完全混合，形成單一相含有去氧核糖核酸的聚苯乙烯(非水溶性介質)。
權利要求
1.一種將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是至少包含下列步驟將核酸溶解於水溶性溶液中，形成第一溶液；將非水溶性介質溶於溶劑中，形成第二溶液；添加中間質溶液於該第一溶液中；以及混合該含有中間質的第一溶液與該第二溶液以形成含有核酸的第三溶液；其中該非水溶性介質為一惰性介質且不會破壞核酸結構，該中間質溶液為一極性介於第一溶液與第二溶液的間的溶液。
2.如權利要求1所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該非水溶性介質包含一聚合物。
3.如權利要求2所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該聚合物選自由聚丙烯、聚碳酸酯、聚苯乙烯組成的族群。
4.如權利要求1所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該溶劑包含有機溶劑。
5.如權利要求4所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該有機溶劑選自由氯仿、二氯甲烷、苯類溶劑所組成的族群。
6.如權利要求1所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該中間質溶液包含有機溶劑。
7.如權利要求6所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該有機溶劑選自由酒精、丙酮及其混合物所組成的族群。
8.如權利要求1所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該中間質溶液的添加量約為非水溶性介質的5％至50％。
9.如權利要求1所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該核酸選自由天然核酸及人工合成核酸所組成的族群。
10.如權利要求9所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該人工合成核酸包含人工合成的載體或人工合成的核酸片段。
11.如權利要求1所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是該水溶性溶液包含水或TE緩衝溶液或PBS緩衝溶液。
12.一種含有核酸的非水溶性介質溶液，其特徵是由權利要求1所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法製備得到。
13.如權利要求1所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是進一步包含將該第三溶液塗抹於固體物上以及乾燥該塗有第三溶液的固體物的步驟。
14.如權利要求1所述的將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，其特徵是進一步包含將該第三溶液與液體混合物混合的步驟。
全文摘要
本發明是關於一種將核酸溶於非水溶性介質的方法及其應用，特別是指一種通過添加中間質溶液使水溶性核酸溶液與液化的非水溶性介質能夠均勻混合，以獲得含有核酸的非水溶性介質，並可利用溶於非水溶性介質的核酸作為防偽標記，標示固體或液體目標物。
文檔編號B42D15/10GK1487093SQ03155949
公開日2004年4月7日 申請日期2003年8月27日 優先權日2002年8月30日
發明者許俊傑, 梁明華, 詹淳勝 申請人:博微生物科技股份有限公司