一種帶濾膜的u型管式微生物學實驗裝置的製作方法

2023-06-12 11:29:11 2

專利名稱：：一種帶濾膜的u型管式微生物學實驗裝置的製作方法
技術領域：
：本實用新型涉及一種微生物學實驗裝置，尤其是一種可阻止細胞接觸但不防礙培養基內其它大分子或小分子物質交換的帶濾膜的u型管式微生物學實驗裝置。
背景技術：
：近年來，隨著對細菌水平基因轉移現象認識的深入，迫切需要一個可以阻止細胞接觸但不防礙培養基內其它大分子或小分子物質交換的微生物學實驗裝置。但目前尚無商品化的帶濾膜的u型管裝置出售，亦無公開的製作方法。1950年BernardD.Davis發明了用於微生物學實驗的裝有濾膜的U型管，並用其證明了接合作用需要細胞接觸，但BernardD.Davis的原始文獻中對該裝置的製作也只是簡短提及，即BernardD.Davis製作的U型管是用玻璃燒制的整體，用燒結的玻璃過濾，所以其孔徑不易控制，過濾裝置不能更換，易破碎，堵塞後不可替換。
發明內容本實用新型的目的是提供一種帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置，該裝置不僅結構簡單、濾膜易更換，而且可阻止細胞接觸但不防礙培養基內其它大分子或小分子物質交換。實現本實用新型目的採用的技術方案是一種帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置，至少包括U型管，構成U型管的兩根玻璃管分別與兩根折型管連接，兩根折型管通過活接頭連接在一起，兩根折型管管口之間設有濾膜。所述的濾膜為混合纖維素濾膜、醋酸纖維素濾膜或其它阻止細胞接觸但不防礙培養基內其它大分子或小分子物質交換的濾膜。由於細菌的直徑一般都在1微米以上，真核細胞直徑一般在10微米左右，而大分子物質直徑為l一100nm，小分子物質直徑小於lnm。根據需要透過物質的大小而選用不同孔徑的濾膜，使濾膜阻止細胞接觸但不防礙培養基內其它大分子或小分子物質交換的濾膜。濾膜覆蓋在折型管的管口處，濾膜的兩側設有與濾膜大小相同支持物，支持物為窗紗或其它網狀材料。兩片支持物外圍分別塗有粘合劑，粘合劑凝固後，用兩片支持物將濾膜夾在中間，三者重疊，共同覆蓋在折型管管口，凝固後的粘合劑對濾膜、支持物與折型管口之間的空隙起密封的作用。所述的活接頭設有活接頭外管和帶螺紋的活接頭內管,支持物和帶螺紋的活接頭內管之間設有墊圈，活接頭外管通過帶螺紋的活接頭內管連接固定，從而將支持物和濾膜固定所述的述玻璃管和折型管的管口通過粘合劑粘接。本實用新型的有益效果是阻止細胞接觸但不防礙培養基內包括病毒顆粒的其它大分子或小分子物質交換，並且可根據實驗要求而選用不同孔徑及不同材料的濾膜，濾膜易更換，可清洗，也可用一次性的，濾膜兩側設有支持物，支持物對濾膜起保護作用，使濾膜不易破損。以下結合附圖和實施例對本實用新型作進一步說明。圖1為本實用新型的結構示意圖。圖2為本實用新型的結構剖視圖。圖中玻璃管l、玻璃管2、折型管3、折型管4、濾膜5、支持物6、墊圈7、帶螺紋的活接頭內管8、活接頭外管9、帶螺紋的活接頭內管IO。具體實施方式實施例1用砂紙將玻璃管1和折型管2的管口打磨後用粘合劑粘接，用砂紙將玻璃管2和折型管4的管口打磨後用粘合劑粘接。折型管3和折型管4的管口之間設有濾膜5,濾膜5為混合纖維素濾膜，其孔徑為220納米，濾膜5的兩側設有支持物6，支持物6為窗紗，且支持物6與濾膜5大小相同，窗紗支持物6外圍用粘合劑塗布一個圓環，將支持物6的外圍粘貼在濾膜5上，濾膜5被兩片支持物6夾在中間，三者重疊，共同覆蓋在折型管管口，粘合劑凝固後使濾膜、支持物與折型管口之間的空隙密封。折型管3和折型管4通過活接頭連接，其中活接頭外管9通過帶螺紋活接頭內管10連接固定，從而將支持物6和濾膜5固定。下面通過轉導實驗證明本實用新型不影響細菌病毒顆粒(噬菌體)在兩折型管內的自由交流。從15d內劃線的平板上挑取AB91047單菌落，接種於5mlLB液體培養基中，180r/min振蕩後培養過夜。然後以1%的接種量轉接至50mlLB液體培養基中，180r/min振蕩後培養46小時。將菌液3800r/min離心10min後，棄上清，用LB液體培養基重懸，然後用15W紫外燈在40cm處照射15s後避光培養23小時。再向培養液中加入氯仿，直至氯仿佔總體積的1%，然後將培養液放在振蕩器上劇烈振蕩30s後靜置5min，再以3800r/min離心10min。取上清至乾淨無菌試管，加氯仿至最終濃度為0.3%，搖勻後置於4'C條件下儲存，得到含游離噬菌體顆粒的細菌細胞裂解液。從15d內劃線的平板上挑取AB91048單菌落，接種於加有20%MgS047H20溶液的5mlLB液體培養基中，180r/min振蕩後培養過夜。然後以1%的接種量轉接至加有20%MgS047H20溶液的5mlLB液體培養基中，180r/min振蕩後培養46小時。將上述含游離噬菌體顆粒的細菌細胞裂解液分別稀釋至10—3、10"、10—5、l(T，並分別取四個稀釋度的稀釋液100Pl置於四個無菌小試管中，再各加入100ulAB91048菌液，緩慢搖勻，靜置5min。然後向四個小試管中分別倒入含有20%MgS047H20溶液的5(TC保溫的LB半固體培養基3.8ml，迅速搓勻，倒入對應的加有20%MgS047&0溶液的底層LB固體培養基上，輕晃使其鋪勻，每種稀釋度倒3皿。待半固體培養基凝固後，在37'C溫室中倒置培養過夜。對噬菌斑進行計數，其結果見表l，計算裂解液效價。表l噬菌斑計數結果complextableseeoriginaldocumentpage5使用10"稀釋度的數據計算噬菌體裂解液效價裂解液效價=平均每平板上噬菌斑數目X2X10X稀釋倍數=33X2X10X103=6.6X105(pfu/ml)從15d內劃線的平板上挑取AB91048單菌落，接種於加有20%MgS047H20溶液5mlLB液體培養基中，180r/min振蕩後培養過夜。然後以1%的接種量轉接至加有20XMgS047H20溶液50mlLB液體培養基中，180r/min振蕩後培養46h。將上述含游離噬菌體顆粒的細菌細胞裂解液稀釋至10—'，在無菌的帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置的左管加入20ml10—'噬菌體裂解液，右管加入20mlAB91048菌液，然後通過橡膠管和移液管將真空泵與U型管管口連接，通過真空泵抽吸5回合。同時在L5mlEP管中加入500P110—1裂解液和500u1AB91048菌液，緩慢搖勻。將U型管和EP管一起於37。C水浴15min。然後將U型管右管中液體和EP管中液體各100u1塗布EMB-gal平板，每種液體塗3皿，分別編號為l、2、3，每皿塗布100ul。然後各取10—'噬菌體裂解液、AB91048菌液和左管中液體100y1塗布EMB-gal平板各一皿(做陰性對照)，在37。C溫室中倒置培養48小時後對編號為1、2、3中的轉導子進行計數，其結果見表2。分別計算U型管和EP管中的轉導頻率。表2轉導子計數結果complextableseeoriginaldocumentpage6計算轉導頻率的公式:轉導頻率=(2X2X平均每平板上轉導子數目X10X10X10)/裂解液效價由此公式可得U型管中轉導頻率為23.64%，EP管中轉導頻率為25.45%，經統計學計算無顯著性差異。故此本實用新型不影響細菌病毒顆粒(噬菌體)在兩折型管間的自由交流。下面通過接合實驗證明本實用新型可基本滿足細菌間水平基因轉移研究的要求。從平板上挑取UCSC152單菌落，接種於加有鏈黴素的5mlLB液體培養基中。同時挑取UCSC082單菌落，接種於加有利福平的5mlLB液體培養基中。均以180r/min振蕩後培養8小時。然後以1%接種量分別轉接於50mlLB液體培養基中，180r/min振蕩後培養12小時。在無菌的帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置的左管中加入UCSC152菌液20ml，右管中加入UCSC082菌液20ml。然後通過橡膠管和移液管將真空泵與U型管式微生物學實驗裝置的管口連接，採用真空泵作為抽吸裝置，抽吸5回合。同時在1.5mlEP管中加入500u1UCSC152菌液和500u1UCSC082菌液，混勻。將U型管和EP管一起於37'C水浴1小時。取出時振蕩。取該實驗裝置右管液體塗布加有利福平的基本培養基平板(MR)1皿，塗布加有鏈黴素的基本培養基平板(MS)1皿，每皿塗布50u1;取該實驗裝置左管液體50!i1分別塗布MR平板1皿，塗布加有脯氨酸和利福平的基本培養基平板(MPR)l皿。以上四個平板分別標記為l、2、3、4號平板。EP管中液體分別稀釋至10—3和10—7，1(T3稀釋度塗布MR平板3皿(標記為5、6、7號平板)，l(T稀釋度塗布MS平板3皿(標記為8、9、IO號平板)，每皿50u1。37'C倒置培養48小時後計數。實驗結果用U型管式微生物學實驗裝置進行實驗的1、2、3、4號平板均未長菌，說明細菌不可以通過濾膜到對側，也無法進行接合作用；用EP管進行實驗的510號平板計數結果如下complextableseeoriginaldocumentpage7轉導頻率=[23.3X103X(1000/50)]/[494.5X107X(1000/50)]"4.7X10—'故此本實用新型基本滿足細菌間水平基因轉移研究的要求，即阻止細胞接觸。綜上所述，本實用新型阻止了細菌接觸但不防礙培養基內細菌病毒顆粒(噬菌體)的交換。權利要求1.一種帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置，至少包括U型管，其特徵是構成U型管的兩根玻璃管分別與兩根折型管連接，兩根折型管通過活接頭連接在一起，兩根折型管管口之間設有濾膜。2.根據權利要求1所述一種帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置，其特徵是濾膜覆蓋在折型管的管口處。3.根據權利要求1所述一種帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置，其特徵是濾膜為混合纖維素濾膜、醋酸纖維素濾膜或其它阻止細胞接觸但不防礙培養基內其它大分子或小分子物質交換的濾膜。4.根據權利要求1或2或3所述一種帶濾膜的U型管式的微生物學實驗裝置，其特徵是濾膜的兩側設有與濾膜大小相同的支持物，支持物為窗紗或其它網狀的材料。5.根據權利要求1所述所述一種帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置，其特徵是活接頭設有活接頭外管和帶螺紋的活接頭內管。6.根據權利要求1或4或5所述一種帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置，其特徵是帶螺紋的活接頭內管和支持物之間設有墊圈。7.根據權利要求4或6所述一種帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置，其特徵是支持物外圍塗布粘合劑，粘合劑凝固後將濾膜、支持物與折型管口之間的空隙密封。8.根據權利要求1所述帶濾膜的U型管式的微生物實驗裝置，其特徵是玻璃管通過粘合劑與折型管的管口粘接。專利摘要本實用新型提供了一種帶濾膜的U型管式微生物學實驗裝置，至少包括U型管，構成U型管的兩根玻璃管分別與兩根折型管連接，兩根折型管通過活接頭連接在一起，兩根折型管管口之間設有混合纖維素濾膜、醋酸纖維素膜或其它阻止細胞接觸但不防礙培養基內其它大分子或小分子物質交換的濾膜，濾膜覆蓋在折型管的管口處，濾膜的兩側設有與濾膜大小相同的支持物，支持物為窗紗或其它網狀的材料，支持物外圍塗布粘合劑，粘合劑凝固後將濾膜、支持物與折型管口之間的空隙密封。活接頭設有活接頭外管和帶螺紋的活接頭內管，帶螺紋的活接頭內管和支持物之間設有墊圈。本實用新型結構簡單、濾膜易更換，且能阻止細胞間接觸但不阻止培養基內其它大分子或小分子物質交換。文檔編號C12M1/12GK201071368SQ20072008640公開日2008年6月11日申請日期2007年8月10日優先權日2007年8月10日發明者青嚴,周勤潔,王凌宇,陳向東申請人:武漢大學