一種降脂及抗脂肪肝中藥發酵液的製備的製作方法

2023-06-11 17:03:46

專利名稱：一種降脂及抗脂肪肝中藥發酵液的製備的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥加工及生物發酵領域，特別涉及中藥山楂的發酵工藝，及通過這種方法得到的發酵產物的降脂及抗脂肪肝作用。
背景技術：
治療脂肪肝主要有效成分為黃酮，廣泛存在於許多中藥特別是山楂中含量較大。山楂總黃酮是山楂的主要有效成分之一，單體達30餘種，其清除自由基及抗氧化作用效果明顯[1]。，並且近年來有學者研究發現山楂黃酮具有較強的抗氧化作用。ZhangZSt2]等人研究了山楂黃酮對田鼠降低膽固醇機制，實驗組每日灌胃0.5%的山楂提取物，結果顯示實驗組總膽固醇和甘油三酯的含量比對照組分別減少10%和13%。
山楂藥酒治療脂肪肝效果顯著。其作用為通過降解膽固醇並抑制膽固醇合成來降低血清膽固醇含量。也增加膽汁酸的排洩來阻止膽固醇在肝臟內堆積[2]。可以明顯增強低密度脂蛋白的活性。謝偉華、林秋實[3][4]等利用山楂黃酮治療小鼠高脂血症，藥理證明山楂及山楂黃酮能顯著降低血清和肝中MDA含量，增加紅細胞與肝臟SOD活性。中藥是我國的瑰寶，中藥資源極其豐富，經過千年傳承已擁有數萬種成方、驗方，但是再近些年來對中藥的現代化研究比較緩慢，導致了中藥中有效成分的提取受到限制，使中藥資源遭到浪費。利用真菌對中藥進行發酵處理是中藥現代化研究史上的一個重要創新。中藥發酵過程中，由於真菌生長代謝具有強大的分解轉化能力，可將大分子物質分解為小分子活性物質，在發酵過程中會產生新的成分或豐富的次級代謝產物。為中藥的開發開創了新空間。現代中藥發酵製藥技術是在繼承傳統中藥發酵炮製法的基礎上，結合現代生物轉化方法包括發酵技術等，有目的地改變中藥的性能，或根據中藥之間的特性有目的有針對性進行組合[5]，利用單一菌種，或用混合菌種定向發酵。通過微生物在發酵過程中產生的酶系對中藥底物進行氧化、氫化、酯化、甲基化等修飾。經過發酵後能夠給中藥帶來很多有益處，首先是對中藥中有效成分產生影響。微生物在代謝過程中分泌出纖維素酶、蛋白酶、木質素酶等多種酶類，降低了中藥中有效成分浸出的傳質阻力，使其更充分的被提取。另外，因微生物發酵是在常溫常壓下進行，條件溫和，避免了中藥活性成分遭到破壞，並且通過一些特殊酶的作用還可以對中藥中的某些成分進行修飾、轉化，降解生物大分子從而實現提高中藥藥效或產生新藥效的目的。參考文獻[I]時巖鵬，丁杏苞.山楂化學成分的研究，中草藥[J]. 2000,31 (3) :173.[2]Zhang ZS, Chang Q，Zhu M，etal. Charactenrization of antioxidantspresenting hawthornfruits[J]. Journal of Nutrional Biochemistry. 2001,12(3)144-152.[3]謝偉華，孫超，劉淑敏.山楂黃酮對高脂血模型小鼠血脂及生脂基因轉錄表達的影響[J].中國中藥雜誌，1009，34 (2) =224-229.[4]林秋實，等.山楂及山楂黃酮預防大鼠脂質代謝紊亂的分子機制研究[J].營養學報,2000，22 (2) :131-136.[5]葛喜珍.發酵在中藥研究中的應用[J].時珍國醫國藥，2008，19(2) :386 387.[6]阮曉東，張惠文，蔡穎慧，等.微生物在中藥生物轉化中的應用[J].中草藥，2009,40(1) :149-152.

發明內容
本發明依據現代科技研究成果，選用山楂作為實驗原料，其主要功效成分為黃酮。並且以同樣具有抗氧化功效成分的食藥真菌冬蟲夏草作為發酵菌種。以總黃酮成分能夠在發酵液中充分浸出為目的，篩選出山楂生物轉化的最佳發酵培養基和發酵條件。具體技術內容如下
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I以中藥山楂為發酵底物，利用食藥真菌冬蟲夏草對其進行發酵，並考察不同時間發酵液中總黃酮含量的變化情況，確定了到第5天時，發酵液中總黃酮含量最高，為16. 9mg/g。並且通過單因素和正交試驗，以發酵液中總黃酮含量為指標,對冬蟲夏草發酵山楂的培養基及發酵條件進行優化，得出最佳培養基為可溶性澱粉2g/100mL，硝酸鉀
0.4g/100mL，磷酸二氫鉀0. 4g/100mL，硫酸鎂0. 2/100mL，最佳發酵條件為接種量3%，山楂添加量8g/100mL，溫度30°C，初始pH值5. 5，培養時間為3_7d。最後採用優化後工藝進行驗證得出發酵液中總黃酮含量為17. 4mg/g。2用山楂發酵液做小鼠藥理實驗結果顯示，山楂黃酮能較明顯降低小鼠血清中TC與TG含量，增加SOD活性。目前中藥抗脂肪肝作用研究日漸增多，但是發酵中藥開發的較少。本發明採用微生物發酵的方法，目的在於提高藥效，獲得一劑具有良好抗氧化作用效果的發酵液，為以中藥為原材料的抗脂肪肝產品研究開闢了一條新思路，同時在山楂的進一步應用及提取研究上提供了理論基礎。
具體實施例方式實施例一山楂發酵液的製備以中藥山楂為發酵底物，利用食藥真菌冬蟲夏草對其進行發酵，採用發酵培養基為可溶性澱粉2g/100mL，硝酸鉀0. 4g/100mL，磷酸二氫鉀0. 4g/100mL，硫酸鎂0. 2/100mL,最佳發酵條件為接種量3%，山楂添加量8g/100mL，溫度26°C，初始pH值5. 5，培養時間為3-7d，得山楂發酵液，經3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及藥品使用，或者用於製備食品、保健品及藥品的原料。實施例二 小鼠模型建立實驗動物健康的雌性昆明小鼠，18_22g，清潔級。採用高脂飲食配合CCl4注射的方法進行造模。實施例三指標檢測實驗藥物山楂發酵液
動物分組對60隻造模成功的小鼠觀察一周後隨機分成3組，即模型對照組、陽性對照組、山楂發酵液組，每組20隻，空白對照組20隻(健康小鼠)，共80隻。各試驗組分別灌服20天，每天一次。陽性對照組給予東寶甘泰液9mL/kg (!，空白對照組及模型對照組給予0. 5ml蒸餾水，第20天處死小鼠進行理化指標測定。動物實驗及實驗結果(I)山楂發酵液對脂肪肝小鼠臟器指數的影響頸椎脫臼法處死小鼠，電子大平精確稱量小鼠體重後，解剖小鼠，取肝臟、脾臟及胸腺稱重，計算臟器指數。結果如表I所
/Jn o肝指數=^^),100%脾指數=^xl00%
小鼠#S (g)小鼠體軍(g)
胸AM=^xioo%
小鼠傾(g)表I三種發酵液對小鼠臟器係數的影響(n = IOJ 士s )Table I The effect of three fermented brass on organ coefficient inrats (n = 10,^±s )
WJi肝臟係數(％)脾臟係數(％)胸腺係數(％)
空白對照組4.28 + 0.24*0.553 + 0.0630.211 + 0.016
模型對照組5. 74±0.43a0.415±0.037a0.117±0.033a
山楂發酵液組4.96±0.34**0.514±0.017*0. 136±0.034Z
陽性對照組5.04±0. 15*0.529±0.0920. 138±0_042注與模型組比較，* :P < 0. 05 ;** P < 0. 01與空白組比較，A P < 0. 05。從表I中可知，模型組與空白對照組相比肝臟係數與脾臟係數明顯增加，胸腺係數降低，均具有差異顯著性(P < 0. 05)。山楂發酵液組肝臟係數顯著性降低了(P < 0. 01)。(2)灌胃山楂發酵液後小鼠血清中TC、TG含量變化如表2所示表2 TC 和 TG 含量(n = IOJ ±s)Table2 Content of TC and TG(n = 10,x±s)
組別劑Mmg/g 按生藥汁TC/mmol.L1TG/mmol-L1
空白對照組2.04 + 0. 140.91 + 0. 13
模型對照組——3. 22±0.98''a1.68±0.43
山楂發酵液組401.34±0.45**0.91±0_25**
陽性對照組402.01 ±0.430.%±0.24*注與模型組比較，*:p < 0. 05 # p < 0. 01與空白組比較，Ap < 0. 05 AA p < 0. 01由表2中數據可以看出脂肪肝模型組TC和TG含量明顯高於空白對照組，具有極顯著性差異(P < 0. 01)。山楂發酵液高劑量組明顯降低TC和TG含量(P < 0. 01)，低劑量組也具有顯著性(P < 0. 05)。(3)灌胃山楂發酵液後小鼠肝組織勻漿中SOD和MDA含量見表3 :表3 SOD 和 MDA 含量(n = 10，； 士s )Table 3 Content of SOD and MDA(n = 10,x±s)
權利要求
1.一種山楂發酵液，其特徵是以中藥山楂為發酵底物，利用食藥真菌冬蟲夏草對其進行發酵，採用發酵培養基為可溶性澱粉2g/100mL，硝酸鉀0. 4g/100mL,磷酸二氫鉀0.4g/100mL，硫酸鎂0. 2/100mL，最佳發酵條件為接種量3%，山楂添加量8g/100mL，溫度26°C，初始pH值5. 5，培養時間為3-7d，得山楂發酵液，經3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及藥品使用，或者用於製備食品、保健品及藥品的原料。
2.—種中藥發酵液，其特徵是將山楂與冬蟲夏草發酵，該發酵液具有一定抗脂肪肝作用，可以在製備抗脂肪肝藥品、食品及保健品中應用。
3.根據權利要求I所述的中藥發酵液，其特徵在於該發酵液可以單獨或與其它藥物配伍或加入藥學上可以接受的輔料，製備成軟膠囊、硬膠囊、片劑、分散片、顆粒劑、口服液、栓齊U，經口服方式應用。
4.本發明是採用搖瓶的方法進行的，如進行放大生產，可根據本發明的基本原理採用各種生物反應器、發酵罐等方式進行發酵處理，另外除本發明中所用食藥真菌外，也可是其它大型食藥真菌如香菇、黑木耳、金針菇等，這是本領域的研究人員所能理解的。
全文摘要
本發明提供一種降脂及抗脂肪肝中藥發酵液的製備方法，涉及中藥加工及生物發酵領域，尤其是中藥山楂的發酵方法。本發明以食藥真菌冬蟲夏草作為發酵山楂的菌種。通過添加少量菌種生長繁殖所需的營養物質，對中藥進行發酵，將此法所得發酵液進行小鼠藥理實驗。並且闡述了本發明中中藥發酵液具有明顯降脂及抗脂肪肝作用。該組方可製備藥品、保健品和食(飲)品的各種劑型。包括散劑、丸劑、膏劑、丹劑、片劑、軟膠囊、硬膠囊、衝劑、栓劑、口服液、注射液。
文檔編號A61P1/16GK102696994SQ20121019291
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月13日 優先權日2012年6月13日
發明者付莉莉, 姜雲, 張建峰, 汪樹生, 王剛, 王莘, 董浩, 陳 光 申請人:吉林農業大學