包含非成蛋白質性的胺基酸的二肽的製作方法
2023-06-11 11:08:01 1
包含非成蛋白質性的胺基酸的二肽的製作方法
【專利摘要】本發明描述了包含非成蛋白質性的胺基酸的二肽、製備所述二肽的方法、和在製備包含一個或多個非成蛋白質性的胺基酸的多肽或蛋白的方法中使用所述二肽的方法。
【專利說明】包含非成蛋白質性的胺基酸的二肽
【技術領域】
[0001]本發明涉及包含非成蛋白質性的(non-proteogenic)胺基酸的二肽、製備所述二肽的方法、和使用所述二肽生產包含一個或多個非成蛋白質性的胺基酸的多肽或蛋白的方法。
【背景技術】
[0002]已經批准大量多肽和蛋白用於醫療實踐。所述多肽和蛋白可以通過重組DNA技術在合適的宿主細胞中生產，或它們可以通過非常確定的肽合成技術合成生產。但是，天然的多肽和蛋白傾向於表現出高清除率，這對於許多在延長的時間段內需要多肽的高血漿濃度的臨床適應症而言是不可接受的。
[0003]天然的多肽和蛋白可以從天然形式改變成類似物及其衍生物，以改變或增強某些特徵。例如，可以將非成蛋白質性的胺基酸(即非天然胺基酸)添加或置換進多肽或蛋白中，以例如賦予對抗水解(諸如DPP-1V對GLP-1肽的水解)的某種保護。
[0004]可以如下製備含有一個或多個非成蛋白質性的胺基酸的多肽，諸如N端修飾的GLP-1類似物:經由化學合成以逐步方式引入非成蛋白質性的胺基酸(一個或多個)，其中對於要向多肽或蛋白添加的每個胺基酸應用偶聯步驟和隨後的去保護步驟。
[0005]但是，所述逐步合成是費時的和不方便的，它可能導致許多副產物的形成，可能需要中間純化步驟，且 它可能導致某些胺基酸殘基(諸如組氨酸殘基)的大量外消旋化。
[0006]可替換地，可以將包含非成蛋白質性的胺基酸(一個或多個)的肽片段偶聯至剩餘的多肽或蛋白上，其中在所述方法中使用被完全保護的片段，例如在N端氨基和側鏈氨基上被保護的片段。
[0007]但是，這樣的肽片段可能不溶於水性介質中，從而限制了它的應用。此外，如果在所述片段中存在正交保護基，需要幾個去保護步驟，且如果分離的話，合成步驟之間的中間純化可能是必要的，並且可能發生中間分離的問題。
[0008]WO 2009/083549涉及一種用於製備含有非成蛋白質性的胺基酸的GLP-1類似物和衍生物的方法。專利申請WO 2007/147816 Al和WO 2010/125079 A2涉及肽片段的合成偶聯。Bourgault，S.等人在 PEPTIDES,第 29 卷，第 6 (I)期，2008 年 6 月，第 919-932 頁中描述了常規肽化學的用途。
[0009]仍然需要這樣的肽片段:其用在改進的用於得到含有一個或多個非成蛋白質性的胺基酸的多肽的方法中。
【發明內容】
[0010]本發明涉及化學式I的二肽:
【權利要求】
1.化學式I的二肽:
2.權利要求1的二肽，其中所述氨基保護基選自:Boc、Trt、Bpoc、Fmoc、Nsc、Cbz、Alloc、oNBS、pNBS、dNBS、ivDde 和 Nps。
3.權利要求1或2的二肽，其中所述可除去的烷基選自:苄基和叔丁基。
4.權利要求1-3中的任一項的二肽，其中，當R1和R2共同形成環時，所述共同形成的環選自:酞醯亞胺和1，3，5- 二噁嗪。
5.權利要求1-4中的任一項的二肽，其中 R1 是 H 或選自以下的氛基保護基:Boc、Trt、Bpoc、Fmoc、Nsc、Cbz、Alloc、oNBS、pNBS、dNBS、ivDde 和 Nps,且 R2 是選自以下的氛基保護基:Boc、Trt、Bpoc、Fmoc、Nsc、Cbz、Alloc、oNBS、pNBS、dNBS、ivDde 和 Nps ;或者 R1是選自苄基和叔丁基的可除去的烷基，且R2是H或選自苄基和叔丁基的可除去的燒基；或者 R1和R2共同形成選自以下的環:酞醯亞胺和1，3，5- 二噁嗪； &是11或與羧酸根基團形成鹽的仲銨陽離子、叔銨陽離子、鹼金屬陽離子或鹼土金屬陽離子；且 R4不存在，或是選自以下的酸性鹽:TFA的鹽、HCl的鹽、HBr的鹽和硫酸氫鹽的鹽。
6.權利要求1-5中的任一項的二肽，其中R4不存在。
7.權利要求1-5中的任一項的二肽，其中R4是選自以下的酸性鹽:TFA的鹽、HCl的鹽、HBr的鹽和硫酸氫鹽的鹽。
8.根據權利要求1-3中的任一項的二肽，所述二肽是 化學式 2 的 Fmoc-His-Aib-OH
9.根據權利要求1-3中的任一項的二肽，所述二肽是Fmoc-His-Aib-OH的TFA鹽:
Fmoc-His-Aib-OH, TFA 其中His是組氨酸，Aib是人工胺基酸2-氨基異丁酸，Fmoc是保護基9-芴基甲氧羰基，且TFA是二氣乙酸。
10.根據權利要求1-9中的任一項的二肽，所述二肽用活化劑諸如基於鱗的偶聯劑諸如(苯並三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基鱗六氟磷酸鹽(PyBOP)活化。
11.一種用於生產根據權利要求1-10中的任一項的二肽的方法。
12.一種用於得到包含一個或多個非成蛋白質性的胺基酸的多肽或蛋白的方法，其中所述方法包括以下步驟:使根據權利要求ι-?ο中的任一項的二肽與多肽或蛋白反應。
13.一種用於得到根據權利要求12的多肽或蛋白的方法，其中在去保護步驟中在鹼性條件下除去所述二肽的R1和/或R2。
14.一種用於得到根據權利要求12-13中的任一項的多肽或蛋白的方法，其中所述水性介質的pH是在pH 8.7至pH 9.4之間。
15.用於得到根據權利要求12-14中的任一項的多肽或蛋白的方法，其中使所述二肽與所述多肽或蛋白的α-N端反應。
【文檔編號】C07K14/605GK104011064SQ201280064827
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2012年12月20日 優先權日:2011年12月29日
【發明者】C.克裡斯坦森, M.勞恩克傑, R.塞維林森, J.C.諾裡爾德 申請人:諾沃—諾迪斯克有限公司