螢光探針及其製備方法與在檢測超氧陰離子中的應用的製作方法
2023-07-09 15:35:36
螢光探針及其製備方法與在檢測超氧陰離子中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種螢光探針及其製備方法與在檢測超氧陰離子中的應用，螢光探針的結構式如下：該螢光探針的製備方法為在惰性氣體保護下，將三聚氰胺、咖啡酸溶於DMF和CH2Cl2的混合液中，再加入HOBT和EDC.HCL，室溫下攪拌反應8～16小時；反應後，濃縮，除去溶劑，得螢光探針粗產品；再將螢光探針粗產品用矽膠薄層色譜板分離提純，即得螢光探針純品。本發明的螢光探針結構新穎、靈敏度、選擇性好、光穩定性好。
【專利說明】螢光探針及其製備方法與在檢測超氧陰離子中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種螢光探針，及其製備方法，以及在檢測超氧陰離子中的應用，屬於 生物檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 大量證據表明，活性氧（ROS)與許多疾病的發生發展密切相關，例如退行性疾病， 手術中的缺血在灌注損傷等。由於超氧陰離子自由基（〇 2'_)是其他R〇S(包括過氧化氫，過 氧化亞硝醯陰離子等）的前體，因此揭示O2'_的水平與疾病的關係顯得尤為重要。
[0003] 靈敏性高是單光子（OP)螢光成像的明顯優勢，所以應用OP螢光顯微鏡可視化細 胞內的O 2 ^水平是一種有效檢測O2'1 勺方法。但是，目前檢測細胞內O2 ^的螢光探針仍然 存在諸多問題，例如：來自其他ROS對小分子螢光探針測定的幹擾；響應時間較長；不可逆 反應等。
[0004] 雙光子（TP)螢光成像的優勢包括更深的穿透深度和更低的樣本光損傷，這是由 於TP螢光是同時吸收兩個能量更低的光子激發造成的。但是目前檢測細胞和活體內O 2勺 TP螢光探針尚未見報導。鑑於細胞內O2 ^的濃度極低、壽命短、對環境敏感等特點，檢測 〇2'_的探針既需要具備深組織成像和光損傷低的特性，還需要高靈敏度、瞬時和可逆性；此 夕卜，還應便於根據不同樣品的厚度靈活地選擇成像方式。因此檢測O 2^的探針的設計仍是 生命科學與化學分析領域最困難的問題之一。
【發明內容】
[0005] 針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種動態、可逆檢測超氧陰離子的螢光 探針，及其製備方法，以及其基於單雙光子雙模式螢光成像在檢測細胞和活體內超氧陰離 子的應用，該螢光探針結構新穎、靈敏度、選擇性好、光穩定性好。
[0006] 為實現上述目的，本發明採用如下技術方案：
[0007] 本發明的螢光探針，其結構式如下式I所示：
[0008]
【權利要求】
1. 一種螢光探針，其特徵在於，該螢光探針的結構式如式I所示：
2. 權利要求1所述的螢光探針的合成方法，其特徵在於，步驟如下： 在惰性氣體保護下，將三聚氰胺、咖啡酸溶於DMF和CH2Cl2的混合液中，再加入HOBT和 EDC. HCL，室溫下攪拌反應8?16小時；反應後，濃縮，除去溶劑，得螢光探針粗產品； 再將螢光探針粗產品用矽膠薄層色譜板分離提純，即得螢光探針純品； 所述三聚氰胺、咖啡酸、HOBT和EDC. HCL四者的物質的量比為1: (2-3. 5) : (2-3. 5): (2-3. 5)； 所述DMF和CH2Cl2的混合液中，DMF和CH2Cl2的體積比為1 :2-6。
3. 如權利要求2所述的螢光探針的合成方法，其特徵在於，所述三聚氰胺、咖啡酸、 HOBT和EDC四者的物質的量比為1:2 :2 :2。
4. 如權利要求2所述的螢光探針的合成方法，其特徵在於，所述DMF和CH2Cl2的混合 液中，DMF和CH 2Cl2的體積比為1 :4。
5. 如權利要求2所述的螢光探針的合成方法，其特徵在於，所述用矽膠薄層色譜板分 離提純時，洗脫劑為乙酸乙酯-環己烷混合液，其中，乙酸乙酯：環己烷的體積比為5 :1。
6. 權利要求1所述的螢光探針在檢測細胞內O2^中的應用。
7. 如權利要求6所述的應用，其特徵在於，應用方法為：將培養好的待檢測細胞放於含 有探針分子的緩衝溶液中孵化，孵化後，將細胞用生理PBS緩衝液洗去多餘的探針，然後進 行雷射共聚焦顯微成像。
【文檔編號】C07D251/70GK104371707SQ201410606425
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年10月31日 優先權日:2014年10月31日
【發明者】唐波, 李平, 張雯, 肖海濱 申請人:山東師範大學