Ncx1和nckx4作為診斷動脈導管閉合或開放的標誌物的製作方法
2023-07-07 20:51:26 1
Ncx1和nckx4作為診斷動脈導管閉合或開放的標誌物的製作方法
【專利摘要】本發明涉及NCX1和NCKX4作為診斷動脈導管閉合或開放的標誌物。本發明通過western blot、Qrt-PCR和免疫螢光三種方法對動脈導管閉合及開放的患者進行了蛋白表達差異的分析，首次證明NCX1、NCKX4蛋白在人動脈導管組織中表達，並且這些蛋白在閉合和開放的兩組動脈導管組織中的相對表達量具有明顯的差異，可能是調控動脈導管閉合或開放的關鍵因子，可用於動脈導管未閉的臨床診斷，且診斷的準確度高。
【專利說明】NCX1和NCKX4作為診斷動脈導管閉合或開放的標誌物
【技術領域】
[0001] 本發明涉及分子生物學及醫學的臨床診斷【技術領域】，具體地說，涉及NCX1和 NCKX4作為診斷動脈導管閉合或開放的標誌物。
【背景技術】
[0002] 動脈導管是主動脈與肺動脈之間的一根管道，為胎兒循環的重要通路。小兒出生 後，動脈導管即在功能上關閉，絕大多數嬰兒生後3個月左右在解剖上逐漸閉合成為動脈 初帶，若不閉合即稱動脈導管未閉。動脈導管的閉合分為兩期；1.第一期為生理閉合期。嬰 兒出生啼哭後第一 口吸氣，肺泡即膨脹，肺血管阻力隨之下降，肺動脈血流開始直接進入肺 髒，建立正常的肺循環，而不流經動脈導管，促進其閉合。動脈導管的組織學結構與兩側的 主動脈、肺動脈不同，管壁主要由平滑肌而不是彈性纖維組織組成，中層含粘性物質。足月 嬰兒出生後血氧張力升高，作用於平滑肌，使之環形收縮，同時管壁粘性物質凝固，內膜墊 突入管腔，造成血流阻滯，營養障礙和細胞分解性壞死，因而導管發生生理性閉合。一般在 出生後10?15小時內完成，但在7?8天內有潛在性再開放的可能。2.此後內膜墊瀰漫 性纖維增生完全封閉管腔，最終形成導管初帶。導管纖維化一般起始於肺動脈側，向主動脈 延伸，但主動脈端可W不完成，因而呈壺腹狀。纖維化解剖性閉合，88%嬰兒於8周內完成。 如該閉合過程延遲稱動脈導管延期未閉。動脈導管出生後6個月未能閉合，將終生不能閉 合，則稱持續動脈導管閉鎖不全，臨床上簡稱動脈導管閉鎖不全。
[0003] 軸巧交換蛋白（NC幻是廣泛存在於動物細胞膜上的一種離子轉運蛋白，它在調節 細胞內巧離子平衡中發揮著關鍵的作用。迄今為止，科學家已克隆出8個不同類型、兩大家 族的 NCX，他們分別是 NCX1、NCX2、NCX3 W及鍾 W來的 NCX NCKX1、NCKX2、NCKX3、NCKX4 W 及 NCKX5。
[0004] 有許多從左向右分流也內崎形在胸骨左緣可聽到同樣的連續性機器樣雜音或接 近連續的雙期也雜音，難W辨識，在建立動脈導管未閉診斷進行治療前必須予W鑑別。目前 尚未見關於動脈導管閉合診斷標誌物的報導。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供用於診斷動脈導管未閉的標誌物。
[0006] 在本發明的第一方面，NCX1蛋白可用作診斷動脈導管未閉的標誌物。
[0007] 據此，本發明提供了 NCX1蛋白或其特異性抗體的用途，用於製備診斷動脈導管未 閉的試劑或試劑盒。
[0008] 還提供了一種用於診斷動脈導管未閉的試劑盒，所述的試劑盒包含檢測NCX1蛋 白含量的試劑和檢測目-actin蛋白含量的試劑。
[0009] 優選地，所述的檢測NCX1蛋白含量的試劑為NCX1蛋白的特異性抗體，所述的檢測 目-actin蛋白含量的試劑為目-actin蛋白的特異性抗體。
[0010] 還提供了一種晶片或陣列，所述的晶片或陣列上具有檢測NCX1蛋白的試劑和檢 測目-actin蛋白含量的試劑。
[0011] 優選地，所述的檢測NCX1蛋白含量的試劑為NCX1蛋白的特異性抗體，所述的檢測 目-actin蛋白含量的試劑為目-actin蛋白的特異性抗體。
[0012] 在本發明的另一方面，NCKX4蛋白可用作診斷動脈導管未閉的標誌物。
[0013] 據此，本發明提供了 NCKX4蛋白或其特異性抗體的用途，用於製備診斷動脈導管 未閉的試劑或試劑盒。
[0014] 還提供了一種用於診斷動脈導管未閉的試劑盒，所述的試劑盒包含檢測NCKX4蛋 白含量的試劑和檢測目-actin蛋白含量的試劑。
[0015] 優選地，所述的檢測NCKX4蛋白含量的試劑為NCKX4蛋白的特異性抗體，所述的檢 測目-actin蛋白含量的試劑為目-actin蛋白的特異性抗體。
[0016] 還提供了一種晶片或陣列，所述的晶片或陣列上具有檢測NCKX4蛋白的試劑和檢 測目-actin蛋白含量的試劑。
[0017] 優選地，所述的檢測NCKX4蛋白含量的試劑為NCKX4蛋白的特異性抗體，所述的檢 測目-actin蛋白含量的試劑為目-actin蛋白的特異性抗體。
[001引本發明優點在於：
[0019] 本發明通過western blot、化t-PCR和免疫英光H種方法對動脈導管閉合及開放 的患者進行了蛋白表達差異的分析，首次證明NCX1、NCKX4蛋白在人動脈導管組織中表達， 並且該些蛋白在閉合和開放的兩組動脈導管組織中的相對表達量具有明顯的差異，可能是 調控動脈導管閉合或開放的關鍵因子，可用於動脈導管未閉的臨床診斷，且診斷的準確度 商。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0020] 附圖 1 是 NCX1、NCKX3 和 NCKX4 的 Western-blot 實驗結果。
[002。 附圖2是NCX1、NCKX3和NCKX4的化t-PCR實驗結果，其中白色立柱為閉合組，黑 色立柱為開放組。
[0022] 附圖3是NCX1、NCKX3和NCKX4的免疫英光實驗結果，其中白色立柱為閉合組，黑 色立柱為開放組。
【具體實施方式】
[0023] 下面結合附圖對本發明提供的【具體實施方式】作詳細說明。下列實施例中未注 明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件如Sambrook等人，分子克隆；實驗手冊（New York:Cold Spring Harbor L油oratory Press, 1989)中所述的條件，或按照製造廠商所建 議的條件。
[0024] 實施例1
[00幼 1.材料和方法
[0026] 1. 1分離人動脈導管組織
[0027] 該實驗所有步驟和過程均獲得上海交通大學醫學院倫理委員會批准。開放（n = 10,年齡=30. 2 + 6. 3天）或閉合（n = 10,年齡=25. 3 + 7. 9天）的動脈導管組織取自於 手術過程中的動脈導管依賴的先天性也髒病患兒（患兒詳細信息見表1)。所有病人在手 術前均使用前列腺素El,但閉合組的動脈導管在手術前依然閉合了。動脈導管的狀態（開 放或閉合）均經過也髒超聲和CT確認，並在手術過程加W確認。所有樣本用生理鹽水衝洗 後，分成四部分，並迅速凍存於液氮中。
[002引表1患兒臨床信息
[0029]
【權利要求】
1. NCX1蛋白或其特異性抗體的用途，其特徵在於，用於製備診斷動脈導管未閉的試劑 或試劑盒。
2. -種用於診斷動脈導管未閉的試劑盒，其特徵在於，所述的試劑盒包含檢測NCX1蛋 白含量的試劑和檢測0 -actin蛋白含量的試劑。
3. 根據權利要求2所述的試劑盒，其特徵在於，所述的檢測NCX1蛋白含量的試劑為 NCX1蛋白的特異性抗體，所述的檢測0-actin蛋白含量的試劑為0-actin蛋白的特異性 抗體。
4. 一種晶片或陣列，其特徵在於，所述的晶片或陣列上具有檢測NCX1蛋白的試劑和檢 測@ -actin蛋白含量的試劑。
5. 根據權利要求4所述的晶片或陣列，其特徵在於，所述的檢測NCX1蛋白含量的試劑 為NCX1蛋白的特異性抗體，所述的檢測0-actin蛋白含量的試劑為0-actin蛋白的特異 性抗體。 6. NCKX4蛋白或其特異性抗體的用途，其特徵在於，用於製備診斷動脈導管未閉的試劑 或試劑盒。
7. -種用於診斷動脈導管未閉的試劑盒，其特徵在於，所述的試劑盒包含檢測NCKX4 蛋白含量的試劑和檢測0 -actin蛋白含量的試劑。
8. 根據權利要求7所述的試劑盒，其特徵在於，所述的檢測NCKX4蛋白含量的試劑為 NCKX4蛋白的特異性抗體，所述的檢測0 -actin蛋白含量的試劑為0 -actin蛋白的特異性 抗體。
9. 一種晶片或陣列，其特徵在於，所述的晶片或陣列上具有檢測NCKX4蛋白的試劑和 檢測0 -actin蛋白含量的試劑。
10. 根據權利要求9所述的晶片或陣列，其特徵在於，所述的檢測NCKX4蛋白含量的試 劑為NCKX4蛋白的特異性抗體，所述的檢測0 -actin蛋白含量的試劑為0 -actin蛋白的 特異性抗體。
【文檔編號】G01N33/68GK104502604SQ201410723762
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月3日 優先權日:2014年12月3日
【發明者】劉錦紛, 洪海筏, 葉霖財 申請人:上海交通大學醫學院附屬上海兒童醫學中心