一種適用於致病水黴菌保藏的簡易方法
2023-08-06 06:31:11 2
專利名稱：一種適用於致病水黴菌保藏的簡易方法
技術領域：
本發明涉及微生物保藏方法，具體涉及一種適用於致病水黴菌保藏的簡易方法。
背景技術：
水黴菌是危害極大的淡水致病菌，幾乎能夠感染包括斑點叉尾鮰、虹鱒、花鱸等在內的所有淡水魚類。因此，開展致病水黴菌簡易高效保藏方法的研究對從事水產動物水黴病病原學與防治學的科學研究具有重要的意義。然而，從現有的文獻資料來看，水黴菌的保藏大多是採用傳代培養保藏法、冷凍乾燥保藏法等一些常規的微生物保藏方法，而專門針對水黴菌保藏的簡易高效方法極其匱乏。鑑此，本發明專門針對致病水黴菌保藏建立了一種簡易高效的方法，旨在提高水黴菌保藏方法的簡易性及其在保藏期間的存活率，延長保藏時間。
發明內容
本發明的目的在於提供一種適用於致病水黴菌保藏的簡易方法。本發明提供的一種適用於致病水黴菌保藏的簡易方法，包括如下步驟1)水黴菌菌絲的誘生將水黴菌接種於放有無菌油菜籽粒的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基平板上，於25°C恆溫培養直至油菜籽粒上長滿菌絲；2)水黴菌的保藏將長滿菌絲的油菜籽粒分別放入若干個IOmL無菌具塞塑料離心管中，每個塑料離心管中放置3-5粒，然後再用ImL玻璃移液管吸取8. SmL的無菌蒸餾水和lmLpH5. 6的液體沙氏培養基於每個IOmL無菌具塞塑料離心管中，置於4°C恆溫冰箱保藏即可。所述的水黴菌是寄生水黴，其保藏號為ATCC200013 。經測定表明，4 °C恆溫冰箱保藏的IOmL無菌具塞塑料離心管中的寄生水黴 ATCC200013 保藏12個月仍生長正常，而且形態特徵未發生明顯改變。說明本實驗的保藏方法可以有效保藏期至少12個月。本發明與傳代培養保藏法相比保藏期更長，與冷凍乾燥保藏法相比，操作更簡易， 成本更低，是一種簡易高效的致病性水黴保藏方法。
具體實施例方式實施例11材料與方法1.1實驗材料寄生水黴ATCC200013 ，購於美國標準生物品收藏中心；沙氏液體培養基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基平板、無菌蒸餾水、IOmL無菌具塞塑料離心管、ImL玻璃移液管，購於國藥集團(上海)化學試劑有限公司；油菜籽粒，購於上海市古棕路菜市場；4°C恆溫冰箱，購於青島海爾公司；生化培養箱，購於日本三洋公司；pH5. 6的沙氏液體培養基、鑷子、油菜籽粒、ImL玻璃移液管在1 X IO5Pa高壓溼熱滅菌20min後備用。1.2水黴菌的保藏1. 2. 1水黴菌菌絲的誘生將寄生水黴ATCC200013 接種於放有無菌油菜籽粒的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基平板上，於25°C恆溫培養直至油菜籽粒上長滿菌絲。1.2. 2水黴菌的保藏實驗設10個平行組，分別命名為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J，每個平行組中包括12 個IOmL無菌具塞塑料離心管。具體操作如下將360個長滿菌絲的油菜籽粒分別放入120 個IOmL無菌具塞塑料離心管中，即每個IOmL無菌具塞塑料離心管中含3個長滿菌絲的油菜籽粒，然後再用ImL玻璃移液管吸取8. SmL的無菌蒸餾水和ImL pH5. 6的液體沙氏培養基於每個IOmL無菌具塞塑料離心管中，置於4°C恆溫冰箱保藏。1. 2. 3水黴菌保藏期的測定每個月從平行組中分別隨機取出一個4°C恆溫冰箱保藏的IOmL無菌具塞塑料離心管，無菌操作用鑷子從4°C恆溫冰箱保藏的IOmL無菌具塞塑料離心管中取出長滿菌絲的油菜籽粒，接種於馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基平板上，於25°C恆溫培養，連續2天觀察菌絲的生長情況及其形態。2實驗結果實驗結果見表1。實驗結果表明，4°C恆溫冰箱保藏的IOmL無菌具塞塑料離心管中的寄生水黴ATCC200013 保藏12個月仍生長正常，而且形態特徵未發生明顯改變。說明本實驗的保藏方法可以有效保藏期至少12個月。表1寄生水黴ATCC200013 在不同保藏時間下的存活情況
權利要求
1.一種適用於致病水黴菌保藏的簡易方法，其特徵在於，包括如下步驟1)水黴菌菌絲的誘生將水黴菌接種於放有無菌油菜籽粒的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基平板上，於25°C恆溫培養直至油菜籽粒上長滿菌絲；2)水黴菌的保藏將上述3-5粒長滿菌絲的油菜籽粒放入IOmL無菌具塞塑料離心管中，再用玻璃移液管吸取8. SmL的無菌蒸餾水和ImL pH5. 6的液體沙氏培養基於無菌具塞塑料離心管中，置於4°C恆溫冰箱保藏即可。
2.如權利要求1一種適用於致病水黴菌保藏的簡易方法，其特徵在於，所述的水黴菌是寄生水黴，其保藏號為ATCC200013 。
全文摘要
本發明提供了一種適用於致病水黴菌保藏的簡易方法，步驟包括將水黴菌接種於放有無菌油菜籽粒的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基平板上，於25℃恆溫培養直至油菜籽粒上長滿菌絲；將長滿菌絲的油菜籽粒放入無菌具塞塑料離心管中，然後再用玻璃移液管吸取無菌蒸餾水和液體沙氏培養基於無菌具塞塑料離心管中，置於4℃恆溫冰箱保藏即可。本發明與傳代培養保藏法相比保藏期更長，可以有效保藏至少12個月，與冷凍乾燥保藏法相比，操作更簡易，成本更低，是一種簡易高效的致病性水黴保藏方法。
文檔編號C12R1/645GK102382774SQ201110347570
公開日2012年3月21日 申請日期2011年11月7日 優先權日2011年11月7日
發明者何珊, 衛若鵬, 曹海鵬, 歐仁建 申請人:上海海洋大學, 山西衛氏魚康實業有限公司