C-反應蛋白檢測試劑盒及其製備方法
2023-08-06 03:43:51 1
C-反應蛋白檢測試劑盒及其製備方法
【專利摘要】本發明提供一種C-反應蛋白檢測試劑盒，所述試劑盒基於膠體金免疫比濁法，包括試劑R2，所述試劑R2為含有標記了C-反應蛋白抗體的金納米顆粒的溶液，其特徵在於，所述金納米顆粒的粒徑為62.2nm-79.1nm，所述金納米顆粒和抗體質量比為50：20–60。還本發明還提供該試劑盒的製備方法。本發明試劑盒具有靈敏度高，反應快，特異性強，穩定性好的特點，反應後不產生沉澱，便於生化儀的清洗，延長了生化儀的使用壽命。
【專利說明】C-反應蛋白檢測試劑盒及其製備
【技術領域】
[0001]本申請涉及一種基於膠體金免疫比濁法的C-反應蛋白檢測試劑盒及其製備。
【背景技術】
[0002]C反應蛋白(C-reactive protein, CRP)是急性時相反應蛋白之一，1930年美國洛克菲勒研究院AVERY實驗室的Tillett和Fransic發現急性感染患者的血清能和肺炎雙球菌細胞壁上的C多糖發生沉澱反應，後證實參與反應的是一種蛋白質，故稱之為C反應蛋白。CRP基因位於I號染色體q23，序列上高度保守，CRP屬於穿透素家族成員之一，相對分子質量為115X 103，由5個相同的亞單位以非共價鍵形式結合，形成對稱的環狀五球體，中間環繞一孔型結構，其凹面含有配體結合位點，每個亞單位有206個胺基酸殘基，相對分子質量為23X 103。正常狀態下，CRP分子以五聚體形式存在，在酸性或鹼性環境中也可分解為單體，從而引起某些免疫反應，但由於CRP單體存在於細胞膜而非血清中，故很難檢測。炎症、感染、組織損傷時，在細胞因子(如白細胞介素_6、腫瘤壞死因子)等的刺激下，CRP主要由肝臟生成，並可在其他組織局部，如神經細胞、單核細胞、淋巴細胞及動脈粥樣硬化斑塊內合成。CRP在血中半衰期穩定，約19h，其濃度主要依賴於肝臟的生成量。
[0003]CRP具有多種生物學功能，參與多種自身生理及病理生理過程。CRP與磷脂膽鹼殘基具有高度親和力，並且可以和多種自身配體(如漿細胞脂蛋白、損傷細胞的細胞膜、小核糖體蛋白顆粒、調理素細胞等)或外來配體(如多聚糖、磷脂以及細菌、真菌、寄生蟲等微生物的組分)相結合。CRP與這些配體結合後，被Clq識別，可以激活補體活化的經典途徑。但經典途徑的激活僅限於其初級階段，即產生調理素Cl?C4，幾乎不能激活晚期補體蛋白C5?C9，因此不激活C5?C9膜攻擊複合體的強烈促炎作用，限制補體激活晚期炎症反應的發展及強度，同時CRP還能通過H因子的介導抑制補體激活替代途徑及MBL途徑。可以看出:一方面CRP參與機體的防禦功能。另一方面，CRP對補體激活後的炎症反應所帶來的潛在破壞性具有限制作用。
[0004]此外，CRP還具有和IgG及補體相似的調理和凝集作用，增強巨噬細胞對各種細菌和異物的吞噬功能，從而減少由於外來抗原暴露所帶來的異常免疫反應。CRP還可誘導白介素-1受體的表達，增加抗炎細胞因子白介素-10的釋放並阻礙幹擾素-Y的釋放，從而發揮抗炎作用。有研究結果表明=CRP可以結合自身抗體，有助於凋亡細胞的清除，可能在SLE及其他自身免疫性疾病中發揮保護作用，注射CRP也可使小鼠腎炎發病明顯延遲。
[0005]傳統的CRP測定方法有多種，如免疫沉澱法、免疫濁度法、標記免疫法等,其中以免疫濁度法最常用。通常情況下，新生兒血清CRP < 2mg/L，兒童和正常成年人血清中CRP ( 10mg/L。種族、性別、年齡、肥胖、妊娠等因素均可能影響CRP的水平，CRP基因選擇性多態性也可以影響其在健康人群中的水平。
[0006]超敏C反應蛋白(hypersensitive-CRP, hs-CRP)與普通CRP屬同一種蛋白，只是由於其測定方法更敏感而得名。採用臨床常規方法測定CRP時，檢測的線性範圍一般為3?200mg/L，因檢測方法缺乏足夠的敏感性，無法測出血液中含量更低的CRP。早期主要採用酶聯免疫吸附測定法檢測hs-CRP，近年來相繼採用膠乳增強的免疫散射比濁法、免疫投射比濁法、免疫發光法等技術使檢測的靈敏度得到了很大提高，檢測低限延伸為0.005?
0.10mg/L,使得低濃度CRP (如0.15?10mg/L)的測定更加準確。但是，不同方法測定的hs-CRP結果會有一定差異，美國疾病預防控制中心及世界衛生組織都已制定了相關參考標準，為hs-CRP的測定提供參考。
[0007]由此可見，hs-CRP和CRP實際上測定的都是C反應蛋白，只是測定方法、靈敏度、精密度以及可測定的線性範圍不同。
[0008]近年來關於CRP、hs-CRP的研究越來越多，應用越來越廣泛。在感染、心腦血管性疾病、糖尿病、代謝症候群、外周血管病、慢性阻塞性肺病、哮喘、腫瘤等多種疾病中用於指導臨床診療。目前已經知道，CRP和hs-CRP的臨床意義並不完全相同，CRP在感染性疾病和結締組織病中有較高的應用價值，而hs-CRP近年來在心腦血管疾病、糖尿病中越來越受到關注。
[0009]C反應蛋白的常用檢測有免疫比濁法和酶聯免疫吸附法等。由於酶聯免疫吸附法檢測耗時且操作複雜，已經不能滿足大型醫院快速定量檢測的要求，而免疫比濁法隨著全自動生化儀的普及，已經發展出來多種快速免疫比濁檢測技術。
[0010]乳膠增強免疫透射比濁法的基本原理是，首先將抗體吸附在一種膠乳顆粒上，當遇到相應的抗原時，抗原抗體結合而出現乳膠凝集。單個乳膠顆粒的大小在入射波長之內，光線可透過，當兩個以上的乳膠顆粒凝集時，可阻礙光線透過，使得透射光減少，其減少程度與抗原的量成正比。此法提高了檢測的靈敏度和準確度，得到了廣泛的應用。然而，乳膠增強免疫比濁法反應後會產生沉澱，不利於生化儀的清洗，幹擾試驗結果，且乳膠製造成本較高，導致免疫比濁試劑盒價格和檢測成本偏高。因此又出現了納米顆粒增強的免疫比濁法,如專利CN101680890便公開了一種通過比濁法測量人抑半骯氨酸蛋白酶蛋白C的比濁免疫測定方法和試劑組合，以及中國專利CN101819208中公開了一種利用微球免疫比濁法檢測腦鈉肽試劑盒。專利CN101680890中具體公開了，表面修飾了抗體的由聚苯乙烯、聚氯乙烯、環氧樹脂、聚偏1，1-二氯乙烯、聚-α-萘基甲基丙稀酸酯、聚乙烯萘以及它們相應的共聚物製成的粒徑在80-105nm的有機高分子膠體納米顆粒。
[0011]本發明研究表明，許多納米顆粒此範圍之內並不滿足試驗的要求，比如:氧化鐵等磁性納米顆粒在40nm以上時由於順磁性和比重等因素而容易聚沉無法達到應有的穩定性；金納米顆粒在粒徑80-150nm的範圍內穩定性太差而不合適等。根據中國專利CN102749454的教導，本發明以直徑為35nm_60nm的膠體金顆粒進行試驗，發現，靈敏度較差，無法滿足臨床中對靈敏度小於Ing/mL的要求，和最低檢測限5ng/mL的要求，且線性範圍不覆蓋臨床中正常生理和病理情況的濃度區間，因此常常造成假陰性的結果；同時還存在反應時間長(平衡時間5-10min)，無法達到快速檢驗的要求。
【發明內容】
[0012]為了克服現有技術存在的錯誤教導，解決現有技術中存在的上述缺陷，本發明提供一種基於膠體金免疫比濁法的C反應蛋白檢測試劑盒。該試劑盒線性範圍寬、靈敏度高，製造成本低，反應後不產生沉澱，方便生化儀清洗。
[0013]根據本發明的一方面，提供一種基於膠體金免疫比濁法的C反應蛋白檢測試劑盒，該試劑盒包括試劑R2，所述試劑R2為含有標記了 C反應蛋白抗體的金納米顆粒的溶液，所述金納米顆粒的粒徑為62.2nm-79.lnm,優選67.2nm-72.4nm ;所述金納米顆粒和抗體質量比在 50:20 - 60，優選 50:40-60ο
[0014]具體來講，所述試劑R2為PH值5.0-9.5，優選6.0-8.5的溶液。
[0015]進一步地，所述試劑R2還含有促凝劑、穩定劑、蔗糖和甘油，其中，促凝劑為重量體積比0.4%以內的PEG20000，穩定劑為重量體積比2%以內的BSA，蔗糖的重量體積比為20%以下，甘油的重量體積比為20%以下。
[0016]作為優選，上述R2為含有粒徑為72.4±1.5nm且標記了 C反應蛋白的金納米顆粒、重量體積比20%蔗糖、重量體積比0.2% PEG20000、重量體積比0.5% BSA和重量體積比5%甘油的，pH7.2的磷酸鹽緩衝液，其中，金納米顆粒和抗體的重量比為50:40-60。
[0017]更進一步地，所述基於膠體金免疫比濁法的C反應蛋白檢測試劑盒還包括起緩衝和穩定作用的試劑Rl，所述試劑Rl為含有重量體積比0.2 % BSA、重量體積比0.1 %的NaN3和重量體積比0.05% Tween20的，pH7.2的磷酸鹽緩衝液。在本發明的試劑盒中，發明點主要在試劑R2，試劑Rl也可以使用現有免疫比濁法中檢測試劑盒的試劑R1。
[0018]上述試劑R2通過如下方法製備:
[0019]製備金納米顆粒；
[0020]將抗體偶聯到金納米顆粒，得偶聯抗體的納米金顆粒溶液；
[0021]偶聯抗體的納米金顆粒溶液中加入穩定劑和促凝劑；
[0022]2800rpm 離心 2 小時；
[0023]離心沉澱用含重量體積比20%蔗糖、重量體積比0.2% PEG20000、重量體積比
0.5% BSA和重量體積比5%甘油，pH值7.2的磷酸鹽緩衝液重懸，調整濃度至OD54tlnm為0.2。
[0024]抗體的活性容易受到蛋白酶的分解、高溫變性、滲透壓等影響，可加入穩定劑來穩定抗體的結構和活性。所述穩定劑可以是蛋白質、PEG、糖和可溶性的鹼金屬和鹼土金屬的無機鹽中的一種或多種；其中，所述蛋白質優選牛血清白蛋白(BSA)或明膠；所述糖可以是單糖、二糖或者多糖，其中，單糖優選甘露糖、半乳糖和/或葡萄糖；二糖優選乳糖和/或蔗糖；多糖優選海藻糖、葡聚糖、甘露糖和葡萄糖中的一種或多種；所述無機鹽優選齒素鹼金屬和鹼土金屬的無機鹽，更優選氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣中的一種或多種。
[0025]本發明的試劑盒中，試劑R2還可以加入促凝劑，以增加抗原抗體反應速率。
[0026]本發明所提供試劑盒中R2可以是磷酸鹽緩衝液、硼酸鹽緩衝液、甘氨酸緩衝液、檸檬酸-磷酸鹽緩衝液、Tris緩衝液和HEPES緩衝液中的一種或多種緩衝液體系；優選磷酸鹽緩衝液體系。
[0027]本發明至少實現了如下有益效果:
[0028]本發明試劑盒具有靈敏度高，特異性強，穩定性好的特點，反應時間短，顯色反應時間小於30s，平衡時間小於2min，可用於檢測血清或血漿中C反應蛋白含量，適用於臨床全自動生化分析儀。本發明試劑盒檢測C反應蛋白的靈敏度可以達到1.0mg/L，檢測線性範圍達 1.0 ?300.0mg/L ο
[0029]本發明試劑盒反應後不產生沉澱，便於生化儀的清洗，延長了生化儀的使用壽命。
[0030]本發明的試劑盒採用膠體金標記抗體，降低了膠體金免疫比濁法的C反應蛋白檢測試劑盒的製造成本，具有較大的市場競爭力。【專利附圖】
【附圖說明】
[0031]圖1:本發明實施例1-7檢測的標準曲線。
[0032]圖2:本發明實施例9-15檢測的標準曲線。
【具體實施方式】
[0033]以下，將詳細說明本發明的具體實施例，以便本領域技術人員能夠更詳細地理解本發明。
[0034]金納米顆粒以類似膠體狀態存在，又稱膠體金。
[0035]本發明所提供基於膠體金免疫比濁法的C反應蛋白檢測試劑盒中，試劑Rl可以使用現有技術中免疫比濁法檢測試劑盒中的試劑R1，即已有的商用品。具體來講，試劑Rl可以是含有0.2% BSA(w/v)作為穩定劑、0.1% NaN3 (w/v)作為防腐劑和0.05% Tween20 (w/V)作為促凝劑的，50mM的磷酸鹽緩衝液(pH7.2),是一種促使抗原位點暴露促進抗原抗體反應的緩存液。
[0036]以下各實施例僅製備試劑R2。
[0037]實施例1
[0038]本實施例試劑R2的製備分為三步，首先製備膠體金溶液，然後將抗體偶聯到金納米顆粒上，最後和緩衝鹽、促凝劑和防腐劑等混溶成完整的體系。
[0039]具體過程如下:
[0040]I) 50nm的膠體金的製備按如下步驟:
[0041]在清洗乾淨的IOOOml圓底燒瓶中放入磁力攪拌子I枚，加入500ml超純水；
[0042]加入5ml濃度為1% (w/v)氯金酸，600rpm左右高速攪拌，並加熱至溶液沸騰，然後迅速將6ml濃度為1% (w/v)檸檬酸鈉溶液快速加入到燒瓶中，保持加熱和劇烈攪拌lOmin，溶液顏色先變黑色，然後逐漸變紫紅色；
[0043]關閉加熱開關並繼續攪拌lOmin，然後停止攪拌冷卻至室溫，用超純水恢復到原體積 500ml ；
[0044]使用透射電鏡觀察製得的膠體金顆粒的大小，對1000粒進行統計後直徑約為50.4±1.2nm,超濾除掉小分子後備用。
[0045]2)將抗體偶聯到金納米顆粒上，具體過程如下:
[0046]將待標記的抗體移入透析袋內，在IOmM的磷酸鹽緩衝液(pH7.2)中透析，以除去抗體溶液中的其他小分子物質；
[0047]透析後的抗體轉移到離心管內，15000rpm離心60min，收集上清；
[0048]在紫外-可見分光度計上測量溶液OD26tol吸收值，計算出溶液中抗體的濃度，並用IOmM磷酸鹽緩衝液將抗體稀釋至lmg/ml(w/v)；
[0049]取10支1.5毫升的離心管，加入I毫升製備好的膠體金溶液；
[0050]用10 %的碳酸鉀溶液將離心管內的膠體金溶液調至pH9 ；
[0051]將l、2、4、8、10、20、40、60、80、100ul的抗體分別加到上述10支離心管中，震蕩30分鐘，此時每支試管中金納米顆粒和抗體的質量比分別為50:1,50:2,50:4,50:8、50:10、50:20,50:40,50:60、50:80、50:100 ；[0052]向上述溶液中加入IOOul濃度為10%的NaCl溶液，混勻，靜置2h後觀察各管，發現在金納米顆粒和抗體的質量比達到50:100時，有顏色改變和少量的沉澱析出，這表明當比例達50:100時,是標記蛋白的最大需求量,金納米顆粒和抗體的質量比小於50:100無顏色改變和無沉澱析出，；
[0053]根據以上結果，將500ml膠體金溶液加入三角瓶中，邊攪拌邊用10%的碳酸鉀調整溶液的PH值至9 ;
[0054]將小於50ml的抗體加入到上述溶液中，繼續攪拌30分鐘，在此過程中抗體同納米顆粒在庫侖力和範德華力的作用下，突破膠體顆粒表面的水化層實現接觸，在靜電力和範德瓦爾德力的相互作用，膠體顆粒同蛋白質分子實現偶聯；
[0055]3)試劑R2的配製按如下步驟進行:
[0056]在偶聯後的膠體金溶液中加入一定量的BSA作為穩定劑，終濃度為1% (w/v)，攪拌5min使之完全溶解；
[0057]在上述溶液中加入一定量的PEG20000，終濃度為0.2% (w/v)，攪拌10分鐘；
[0058]將上述溶液移至離心管中，用2800rpm離心2h，棄上清，保留沉澱；
[0059]用濃度為20%蔗糖作為穩定劑、0.2% PEG20000作為促凝劑、0.5% BSA作為穩定劑、和5%甘油作為穩定劑的IOmmol的磷酸鹽緩衝液(pH7.2)重懸沉澱物，調整濃度至OD540nm 為 0.2 ;
[0060]得到R2溶液，分裝備用。
[0061]實施例2
[0062]實施例2與實施例1的差別僅在於，通過調整所加入還原劑的量，使得實施例2製備的膠體金顆粒粒徑為55nm。
[0063]製備55nm顆粒加入還原劑1%檸檬酸鈉為5.6ml。透射電鏡觀察製得的膠體金顆粒，直徑約為56.2±1.5nm。
[0064]實施例3
[0065]實施例3與實施例1的差別僅在於，通過調整所加入還原劑的量，使得實施例3製備的膠體金顆粒粒徑為62.2nm。
[0066]製備62.2nm顆粒加入還原劑1%檸檬酸鈉為5.4ml。透射電鏡觀察製得的膠體金顆粒，直徑約為62.2±1.lnm。
[0067]實施例4
[0068]實施例4與實施例1的差別僅在於，通過調整所加入還原劑的量，使得實施例4製備的膠體金顆粒粒徑為67nm。
[0069]製備67nm顆粒加入還原劑1%檸檬酸鈉為5.2ml。透射電鏡觀察製得的膠體金顆粒，直徑約為67.2±1.5nm。
[0070]實施例5
[0071]實施例5與實施例1的差別僅在於，通過調整所加入還原劑的量，使得實施例5製備的膠體金顆粒粒徑為72nm。
[0072]製備72nm顆粒加入還原劑1%檸檬酸鈉為5.1ml0透射電鏡觀察製得的膠體金顆粒，直徑約為72.4±1.5nm。
[0073]實施例6[0074]實施例6與實施例1的差別僅在於，通過調整所加入還原劑的量，使得實施例6製備的膠體金顆粒粒徑為79nm。
[0075]製備79nm顆粒加入還原劑1%檸檬酸鈉為4.9ml。透射電鏡觀察製得的膠體金顆粒，直徑約為79.l±1.6nm。
[0076]實施例7
[0077]實施例7與實施例1的差別僅在於，通過調整所加入還原劑的量，使得實施例7製備的膠體金顆粒粒徑為83nm。
[0078]製備83nm顆粒加入還原劑1%檸檬酸鈉為4.7ml。透射電鏡觀察製得的膠體金顆粒，直徑約為83.5±1.6nm。
[0079]實施例8
[0080]基於膠體金免疫比濁的C反應蛋白檢測試劑盒的臨床使用效果測定:
[0081](I)本發明試劑盒的測試條件及參數如下
[0082]a)測定步驟:先加入240ul試劑R1，然後加入3ul樣本，37°C孵育5min後加入60ul試劑R2，在540nm波長測量吸光度，三秒後讀取第一點數據，反應5分鐘後讀取另一點，得到吸光度值的差值。
[0083]b)計算方法:6點定標法，以樣條函數為計算模式。根據吸光度與參考血清的值做工作曲線，樣品含量可根據其吸光度值在工作曲線上算出。
[0084](2)檢測標準曲線
[0085]通過本發明的方法，採用日立7180型自動分析儀檢測6種不同含量的C反應蛋白參考品，根據結果做標準曲線，X軸表示C反應蛋白的含量，Y軸表示吸光度差值。
[0086](3)通過上述的方法對上述實施例中製備的7個試劑盒測定標準曲線，分析最優粒徑。結果如下:
[0087]金納米顆粒大小為50.4nm 時，y = -0.000003x+l.5871，R2 = 0.3216 ；
[0088]金納米顆粒大小為56.2nm 時，y = -0.0001x+l.6009，R2 = 0.9266 ；
[0089]金納米顆粒大小為62.2nm 時，y = -0.0033x+l.5993，R2 = 0.9866 ；
[0090]金納米顆粒大小為67.2nm 時，y = -0.0034x+l.6015，R2 = 0.9879 ；
[0091]金納米顆粒大小為72.4nm 時，y = -0.0035x+l.6105，R2 = 0.9915 ；
[0092]金納米顆粒大小為79.1nm 時，y = -0.0034x+l.5101，R2 = 0.9473 ；
[0093]金納米顆粒大小為83.5nm 時，y = -0.0027x+l.0172，R2 = 0.3652。
[0094](4)對上述結果，進行靈敏度、線性相關係數、線性範圍和穩定性分析。
[0095]靈敏度定義為測試體系對不同濃度的標準樣品測試值的差異，差異越大表明約靈敏，沒有差異則表明體系過於穩定，不能引起比濁改變。靈敏度可以通過擬合後的標準曲線的斜率的絕對值表徵。
[0096]線性相關係數即相關性方程的R值，表明試驗測試結果和擬合曲線的重合度，R值越高，表明線性越好。
[0097]線性範圍即測試對應的結果中呈線性關係的區間，線性範圍寬有利於測試更大範圍濃度的樣品。
[0098]穩定性是指在該體系中膠體金穩定存在、不發生團聚或沉澱的程度，一般來講顆粒越大越容易聚沉，引起濁度的改變，顆粒越小越穩定，對待測試劑濃度變化不敏感，即靈敏度差。將待測試劑放置在40°C的環境中，以穩定性時間的時間長短來表示穩定性的好壞，測試時間是12月。
[0099]通過上述四個參數的對比，我們可以從中選出最適合的粒徑範圍，將各種金顆粒尺寸條件下的結果匯總於表1。
[0100]表1
[0101]
【權利要求】
1.一種c-反應蛋白檢測試劑盒，所述試劑盒基於膠體金免疫比濁法，包括試劑R2，所述試劑R2為含有標記了 C-反應蛋白抗體的金納米顆粒的溶液，其特徵在於，所述金納米顆粒的粒徑為62.2nm-79.lnm，所述金納米顆粒和抗體質量比為50:20 - 60。
2.權利要求1所述試劑盒，其特徵在於，所述金納米顆粒的粒徑為67.2nm-72.4nm。
3.權利要求1所述試劑盒，其特徵在於，所述金納米顆粒和抗體質量比為50:40-60。
4.權利要求2或3任意一項所述試劑盒，其特徵在於，所述試劑R2為PH值5.0-9.5的溶液。
5.權利要求4所述試劑盒，其特徵在於，所述試劑R2為PH值6.0-8.5的溶液。
6.權利要求5所述試劑盒，其特徵在於，所述試劑R2還含有促凝劑、穩定劑、蔗糖和甘油，其中，所述穩定劑為蛋白質、PEG、糖和可溶性的鹼金屬和鹼土金屬的無機鹽中的一種或多種；所述蛋白質為牛血清白蛋白或明膠；所述糖為單糖、二糖或者多糖；所述無機鹽為滷素鹼金屬和鹼土金屬的無機鹽；試劑R2為是磷酸鹽緩衝液、硼酸鹽緩衝液、甘氨酸緩衝液、檸檬酸-磷酸鹽緩衝液、Tris緩衝液和HEPES緩衝液中的一種或多種的組合。
7.權利要求6所述試劑盒，其特徵在於，所述促凝劑為重量體積比0.4%以內的PEG20000,所述穩定劑為重量體積比2%以內的牛血清白蛋白，所述蔗糖的重量體積比為20 %以下，所述甘油的重量體積比為20 %以下。
8.權利要求7所述試劑盒，其特徵在於，所述試劑R2為含有粒徑為72.4± 1.5nm且標記了 C-反應蛋白抗體的金納米顆粒、重量體積比20%蔗糖、重量體積比0.2%PEG20000、重量體積比0.5% BSA和重量體積比5%甘油，pH7.2的磷酸鹽緩衝液，其中，金納米顆粒和抗體的重量比為50:40-60。
9.權利要求7所述試劑盒，其特徵在於，所述試劑盒還包括試劑R1，所述試劑Rl為含有重量體積比0.2 % BSA、重量體積比0.1 %的NaN3和重量體積比0.05 % Tween20的，pH7.2的磷酸鹽緩衝液。
10.製備權利要求1-9任意一項所述試劑盒的方法，其特徵在於，所述方法包括: 製備金納米顆粒； 將抗體偶聯到金納米顆粒，得偶聯抗體的納米金顆粒溶液； 偶聯抗體的納米金顆粒溶液中加入穩定劑和促凝劑； 2800rpm離心2小時； 離心沉澱用含重量體積比20%蔗糖、重量體積比0.2% PEG20000、重量體積比0.5%BSA和重量體積比5%甘油，pH值7.2的磷酸鹽緩衝液重懸，調整濃度至OD54tol為0.2。
【文檔編號】G01N33/566GK103940992SQ201410194025
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年5月8日 優先權日:2014年5月8日
【發明者】侯淑霞, 王萬霞 申請人:北京玖佳宜科技有限公司