一種保護和穩定病毒RNA的採血管的製作方法

2023-07-30 01:28:26

本發明涉及一種保護和穩定病毒RNA的採血管。

背景技術：

自然界的病毒種類數不勝數，其中絕大多數為RNA病毒，如愛滋病病毒，B肝肝炎病毒，SARS 病毒，MERS病毒，伊波拉病毒（EBV），C肝肝炎病毒，甲型H1N1流感病毒，禽流感病毒等。病毒體積非常微小，結構及其簡單，但具有高度的寄生性，完全依賴宿主細胞的能量和代謝系統。當它接觸到宿主細胞時，便脫去蛋白質外套，它的核酸(基因)侵入宿主細胞內，藉助後者的複製系統，按照病毒基因的指令複製新的病毒，最後造成宿主細胞死亡。

人被病毒感染後，病毒借著人的細胞的能量和代謝系統，進行大量的繁殖。當宿主細胞破裂後，病毒就暴露在細胞外，故可通過對血液進行核酸提取，再對核酸進行相關病毒檢測便可確認是否感染了病毒，以及感染的病毒類型。所以，血液病毒RNA的檢測及其在基因診斷等方面的應用對於RNA病毒等的診斷和監測具有十分重要的意義。

但在血液中的病毒RNA濃度非常低，而血液中RNA酶含量多，病毒RNA在沒有保護的狀態下很容易被RNA酶降解。在臨床上，大多數是採用採血管採集人的血液，再對血液進行檢測。

而目前，市面上存在著各種各樣的採血管，這些採血管大多數都只是起到防止血液凝固的作用，而沒有起到保護病毒RNA的作用。而且在臨床過程中，由於條件或時間的限制，常常無法在得到血液後第一時間就進行病毒RNA的提取。細胞破裂，產生更多的RNA酶，在短短的幾個小時內就將大部分的病毒RNA降解了，對後續實驗造成極大的障礙，實驗結果容易產生假陰性，從而無法為臨床提供有價值的信息。

因此，一種可以保護和穩定病毒RNA的採血管是很有必要的。

技術實現要素：

本發明的目的在於製備一種保護和穩定病毒RNA的採血管，該採血管不僅能防止血液凝固，而且能夠保護和穩定、富集其中病毒的RNA。該採血管是由試管、密封膠塞和保護劑組成的。將血液採集到管中後，上下顛倒10次充分混合均勻。在室溫下，血液中的病毒RNA可保存3天，-20℃至-80℃可長期保存。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種保護和穩定病毒RNA的採血管，其特徵在於，所述的試管是由疏水性質的聚對苯二甲酸醇酯材質製造而成，所述的密封膠塞是由丁基橡膠材質製造而成。

一種病毒RNA保護劑，其特徵在於，所述保護劑是由EDTA-3K、IDU、bestain、glycine、AEBSF、核糖核苷複合物、異硫氰酸胍、磁珠按照一定的比例溶解於DEPC水，再進行凍幹而成，其中各組分在所述溶液中的濃度分別為：EDTA-3K（20g-80g/L）、IDU（250-700g/L）、bestain（0.06-0.38g/L）、glycine（15-68g/L）、AEBSF（0.01-0.34g/L）、核糖核苷複合物（0.2ml-1ml/L）、異硫氰酸胍（30-100g/L）、磁珠（0.5-4mg/ml）。

作為優選，本發明所述的病毒RNA保護劑的EDTA-3K、IDU、bestain、glycine、AEBSF、核糖核苷複合物、異硫氰酸胍、磁珠的濃度分別為55g/L、600g/L、0.31g/L、45g/L、0.262g/L、0.2ml/L、40g/L、1mg/ml。

附圖說明

圖1為全血樣本於本發明所述的一種保護和穩定病毒RNA的採血管中分別保存0、1、2、3天後進行核酸提取，提取得到的核酸進行HIV基因實時螢光PCR的檢測結果。

圖2為全血樣本於常規EDTA-Na2採血管中分別保存0、1、2、3天後進行核酸提取，提取得到的核酸進行HIV基因實時螢光PCR的檢測結果。

具體實施方法

以下實施案例僅用於解釋本發明，而不用於限制本發明。

實例：

隨機抽取4份感染HIV的人全血樣本，分別按5ml/人份分成8人份，其中4人份為1組，分成2組。其中1組置於常規EDTA-Na2採血管中，另1組置於本發明所述的保護病毒RNA的採血管中，分別常溫放置0天、1天、2天、3天後進行核酸提取（Qiagen公司的RNeasy Mini Kit (50) -貨號74104試劑盒），以提取的核酸為樣本進行人HIV基因的實時螢光PCR檢測。

檢測結果：

置於常規EDTA-Na2採血管和本發明所述的保護病毒RNA採血管的中的感染了HIV的全血樣本，在常溫放置不同時間後，分別進行核酸提取，提取的核酸進行HIV基因的實時螢光PCR檢測，其檢測結果的Ct值如表1。

表1

由表1可知，本發明所述的保護病毒RNA採血管能夠在3天內有效地保護血液中病毒RNA，只有極其輕微的降解；而常規EDTA-Na2採血管對病毒RNA的穩定性維持時間不到1天且降解情況比較嚴重。

圖1~圖2為表1對應的HIV基因的實時螢光PCR檢測結果圖，其中圖1為全血置於本文所述的保護病毒RNA的採血管中保存不同時間後進行核酸提取，提取得到的核酸進行HIV基因實時螢光PCR的檢測結果圖，由圖可知，在0~3天的檢測時間內，所有檢測樣本都被正確檢出，且穩定性良好，血液中病毒RNA得到了有效的保護；圖2為全血置於常規EDTA-Na2採血管中保存不同時間後進行核酸提取，提取得到的核酸進行HIV基因實時螢光PCR的檢測結果圖，檢測結果顯示，常規EDTA-Na2採血管中的病毒RNA連1天的穩定性都不能維持，降解情況十分嚴重。

本發明所述保護病毒RNA的採血管是一種能夠高效保護病毒RNA的試劑。