殼囊孢菌素b在製備抗真菌藥物中的應用的製作方法
2023-07-30 08:41:26 1
專利名稱：殼囊孢菌素b在製備抗真菌藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種來源於紅樹植物內生真菌-小穴殼菌HTF3(Dothiorella sp.HTF3)的殼囊孢菌素B化合物在製備抗真菌藥物中的應用。
背景技術：
紅樹林是生長在港灣河口地區的淤泥灘涂上的木本植物群落，作為獨特的海陸邊緣生態系統在自然生態平衡中起著特殊的作用。紅樹林植物不僅是重要的經濟植物，也是民間常用的藥用植物，如紅樹植物老鼠簕(Acanthus ilicifolius)的樹皮熬汁可以用於治血尿；角果木(Ceriops tagal)的樹皮搗碎可以止血、通便和治療惡瘡，種子榨油可以止癢和治療癬，還可治療凍瘡等。
紅樹植物中存在著豐富的內生真菌，有報導認為紅樹植物的藥用成分都是由其內生真菌產生的，不多的文獻(1、Brady，S.，Wagenaar，M.W，Singh，M.，et al.The cytosporonesisolated from an endophytic fungus.Org.Lett.2000，2(25)4043-4046；2、Bandaranayake，W.M..Traditional and medicinal uses of mangroves.Mangroves and Salt Marshes，1998，2133-148；3、Bandaranayake，W.M..Bioactivities，bioactive compounds and chemicalconstituents of mangrove plants.Wetland Ecology and Management，2002，10421-452；4、Lin Y.，Wu X.，Deng z.，et al.The metabolites of the mangrove fungus Verruculina enalia No.2606 from a salt lake in the Bahamas.Phytochemistry，2002，59469-471)報導也已證明紅樹植物的內生真菌確實可以產生具有新結構和強的生理活性的化合物。但目前國內外在這方面的工作才剛剛開始，為此其研究具有較高的理論價值和實際應用價值。
發明內容
本發明的目的在於提供一種來源於紅樹植物內生真菌(cytosporone B)的化合物在製備抗真菌藥物中的應用。
本發明所用的紅樹植物內生真菌-小穴殼菌HTF3(Dothiorella sp.HTF3)已保藏於中國典型培養物保藏中心(CCTCC，中國武漢大學校內)，保藏號為CCTCC NOM203067，保減日期為2003年8月29日。
本發明所說的殼囊孢菌素B(cytosporone B)化合物的結構式為 (3，5-二羥基-2-辛酮基)-苯乙酸乙酯所說的殼囊孢菌素B化合物可採用以下製備方法1)內生真菌(Dothiorella sp.HTF3)的種子培養培養基以g為單位，馬鈴薯去皮、切碎20，水煮，在過濾後的濾液中加葡萄糖1～3，瓊脂1.5～2.0，海水定容至100ml，滅菌，製成試管斜面，挑取菌種接入斜面，室溫下培養5～15天；2)內生真菌的發酵培養發酵培養基以g為單位馬鈴薯去皮、切碎20，水煮，在過濾後的濾液中加葡萄糖1～3，海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養好的菌株挑入發酵培養基，室溫下培養5～15天；3)將上述發酵培養液過濾除去發酵液後得到菌體；4)菌體烘乾，用乙酸乙酯反覆浸泡，合併乙酸乙酯，減壓濃縮，所得的膏狀物用矽膠柱層析分離，石油醚/乙酸乙酯＝100/0到0/100進行梯度洗脫，收集二者比例為1/1時的洗脫液，減壓濃縮即得到該化合物，含量為9mg/g菌體乾重。
所得該化合物的實驗數據為無色油狀物；EMSm/z(rel.int.)323.3[M+H]+(100)，345.3[M+Na]+(11.4)，361.2[M+K]+(4.2)；1H NMR和13C NMR(400MHz，CDCl3，ppm)見表1。
本發明所說的殼囊孢菌素B化合物可用於製備抗真菌藥物。
本發明提供了一類來源於紅樹林內生真菌的化合物殼囊孢菌素B對人體致病真菌和植物致病真菌有較好的抑制作用，可用於製備抗真菌藥物。
表1.殼囊孢菌素B的NMR數據
具體實施方式
實施例1以下實施例給出所說的殼囊孢菌素B化合物的製備方法。
1)內生真菌的種子培養將20g馬鈴薯去皮、切碎，水煮30min，在過濾後的濾液中加葡萄糖1g，瓊脂1.6g，50％海水定容至100ml，滅菌，製成試管斜面，挑取菌種接入斜面，25℃下培養10天；2)內生真菌的發酵培養將20g馬鈴薯去皮、切碎，水煮30min，在過濾後的濾液中加葡萄糖1.5g，50％海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養好的菌株挑入發酵培養基，26℃下培養8天；3)將上述發酵培養液過濾除去發酵液後得到菌體；4)菌體烘乾，用乙酸乙酯反覆浸泡，合併乙酸乙酯，減壓濃縮，所得的膏狀物用矽膠柱層析分離，石油醚/乙酸乙酯＝100/0到0/100進行梯度洗脫，收集二者比例為1/1時的洗脫液，減壓濃縮即得到該化合物，含量為9mg/g菌體乾重。
本發明所說的殼囊孢菌素B化合物可用於製備抗真菌藥物，其抗真菌活性檢測實驗如下
1)真菌指示菌株白色假絲酵母菌、黑麴黴菌、木黴菌、鐮刀菌、交鏈孢黴菌、白色麵包黴菌、枝孢黴菌2)化合物cytosporone B的配置取一定量的cytosporone B，用甲醇溶解並調整濃度為1mg/ml，0.22μm孔徑的濾膜過濾除菌，4℃保存備用。
3)活性檢測(最低抑菌濃度MIC的測定)a用無菌水將在PDA(馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂)斜面培養基上生長的各指示菌洗下，製成孢子濃度為107個/ml的菌懸液，4℃保存備用；b cytosporone B的樣品溶液按兩倍稀釋法，用甲醇稀釋成一系列的濃度梯度，取20μl加入到已在超淨工作檯的紫外燈下照射30min的96孔板中。用超淨工作檯的風機鼓風吹乾甲醇；c真菌懸液用PD(馬鈴薯-葡萄糖)培養基稀釋成104個/μl的菌液，取100μl加入到上述96孔板上，25℃培養48h，肉眼觀測，沒有真菌生成的最小稀釋濃度即為MIC。
d實驗結果cytosporone B對白色假絲酵母菌、黑麴黴菌、木黴菌、鐮刀菌、交鏈孢黴菌、白色麵包黴菌、枝孢黴菌的MIC分別是0.156mg/ml、0.125mg/ml、0.0625mg/ml、0.0625mg/ml、0.07mg/ml、0.125mg/ml和1mg/ml。
權利要求
1.殼囊孢菌素B化合物用於製備抗真菌藥物的用途。
全文摘要
涉及一種來源於紅樹植物內生真菌—小穴殼菌HTF
文檔編號A61P31/10GK1720909SQ20051008567
公開日2006年1月18日 申請日期2003年11月8日 優先權日2003年11月8日
發明者徐慶妍, 黃耀堅, 鄭忠輝, 宋思揚, 蘇文金 申請人:廈門大學