百合試管小鱗莖誘導方法

2023-07-13 21:02:46 1

專利名稱：百合試管小鱗莖誘導方法
技術領域：
本發明涉及一種百合的快速繁育方法，具體涉及一種百合小鱗莖的誘導方法。
背景技術：
長期以來，百合一直以傳統的分球、分珠芽、鱗片扦插、鱗片包埋等方式進行繁殖，存在繁殖係數小、種性退化、病毒積累等不足。

發明內容
針對現有技術的不足，本發明的目的就是要提供一種縮短組培苗生產時間，降低成本，有效地脫去植株體內病毒，防止種性退化，培育成本低的百合小鱗莖的誘導方法。
本發明的目的是這樣實現的一種百合小鱗莖的誘導方法，包括以下步驟
1)鱗片低溫處理選擇生長健壯百合鱗莖球，洗淨後冷藏7-10天；
2)外植體殺菌將經低溫貯藏的百合鱗莖球剝去外面的1-2層鱗片，選取內部鱗片為外植體，將外植體洗淨後在超淨工作檯上先用酒精浸泡、再用氯化汞液消毒，並用無菌水衝洗後將鱗片置於無菌濾紙上，切成方塊接種於分化培養基上啟動培養；
3)啟動培養將接種有的外植體的分化培養基置於環境條件為溫度25±1°C、溼度75±2%、光照14h、光照強度1800-20001x的恆溫培養室內，培養15天後從百合切口處及腹部邊沿脫分化產生白色團狀愈傷組織，繼續通過20天的培養，白色團狀愈傷組織上再分化叢生芽；
4)鱗莖誘導培養當叢生芽長到3-5cm時，將叢生芽分割成小單芽後進行壯苗培養，將健壯幼苗置於10°C光照培養箱內處理14d，再轉接到鱗莖誘導培養基中，將轉接有健壯幼苗的鱗莖誘導培養基置於恆溫培養室內進行試管內百合小鱗莖誘導，通過45天培養誘導出鱗莖。步驟2)和3)所述的分化培養基配方是
Ms+6-BAl. 5mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA0. lmg/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂粉 5g/L。步驟4)中所述的鱗莖誘導培養基的配方是
Ms+6-BAO. 5 mg/L +NAAO. I mg/L + 鹿糖 30 g/L+ 瓊脂粉 5 mg/L。步驟I)選用外植體鱗莖球低溫處理時冰箱的冷藏溫度為5°C，時間7-10天。步驟4)中將轉接有健壯幼苗的鱗莖誘導培養基置於恆溫培養室內進行試管內百合小鱗莖誘導時，恆溫培養室內的溫度為10± I °C、溼度75±2%、光照14h、光照強度1800-20001x.。本發明提供的百合小鱗莖的誘導方法，具有以下有益效果
I、百合用經低溫貯藏的百合鱗莖為外植體，接種在培養基啟動誘導叢生苗；再將叢生苗以10°C低溫處理14d後，轉接到鱗莖誘導培養基誘導試管小鱗莖，比直接誘導產生叢生芽，試管內不形成健壯小鱗莖移栽成活高，成本費用低。2、百合直接從試管誘導小鱗莖，可將小鱗莖直接煉苗移栽，大大縮短組培苗生產時間，降低成本。3、百合通過不斷試管繼代培養誘導產生小鱗莖，能有效地脫去植株體內病毒，防止種性退化。
具體實施例方式分化培養基製備以Ms為基本培養基，培養基內添加蔗糖30g/L和瓊脂粉5g/L，培養基內的添加的激素組合是6-BAl. 5mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA0. lmg/L ；
鱗莖誘導培養基製備以Ms為基本培養基，培養基內添加蔗糖30g/L和瓊脂粉5g/L，培養基內的添加的激素組合是6_BA0. 5 mg/L +NAAO. I mg/L。其中6_BA是6-苄基腺嘌呤、NAA是奈乙酸、IBA是吲哚丁酸。
誘導過程實例
1)鱗片低溫處理選擇生長健壯百合鱗莖球，洗淨後置於5°C冰箱進行冷藏7-10天左
右；
2)外植體殺菌將經低溫貯藏的鱗莖剝去外面的1-2層鱗片，選取內部鱗片為外植體，將外植體置於5%洗衣粉溶液中浸泡IOmin並清洗，再置於流水衝洗lh，衝洗後在超淨工作檯上先用75%酒精浸泡30s,經0. 1%升氯化萊液(單位lg/L)消毒15min,再用無菌水衝洗5次，衝洗後的外植體鱗片置於無菌濾紙上，切成Icm2方塊接種於分化培養基上啟動培養；
3)啟動培養將接種有外植體的分化培養基置於環境條件為溫度25±1°C、溼度75±2%、光照14h、光照強度1800-20001x的恆溫培養室內，培養15天後從百合切口處及腹部邊沿脫分化產生白色愈傷組織，繼續通過20天的培養白色團狀愈傷組織上再分化叢生芽；
4)鱗莖誘導培養當叢生芽長到3-5cm時，分割成小單芽後進行壯苗培養，將健壯幼苗置於10°C光照培養箱內處理14d，再轉接到鱗莖誘導培養基後，再置於入恆溫培養室進行試管內小鱗莖誘導，恆溫培養室內的溫度為10±1°C、溼度75±2%、光照14h、光照強度1800-20001x.。通過45天培養誘導出鱗莖的平均鮮重達到I. 4g/個，鱗莖顏色呈乳白色，叢生苗煉苗移栽成活率達到90%以上，小苗生長健壯。
權利要求
1.一種百合小鱗莖的誘導方法，其特徵在於包括以下步驟 1)鱗片低溫處理選擇生長健壯百合鱗莖球，洗淨後冷藏7-10天； 2)外植體殺菌將經低溫貯藏的百合鱗莖球剝去外面的1-2層鱗片，選取內部鱗片為外植體，將外植體洗淨後在超淨工作檯上先用酒精浸泡、再用氯化汞液消毒，並用無菌水衝洗後將鱗片置於無菌濾紙上，切成方塊接種於分化培養基上啟動培養； 3)啟動培養將接種有的外植體的分化培養基置於環境條件為溫度25±1°C、溼度75±2%、光照14h、光照強度1800-20001x的恆溫培養室內，培養15天後從百合切口處及腹部邊沿脫分化產生白色團狀愈傷組織，繼續通過20天的培養，白色團狀愈傷組織上再分化叢生芽； 4)鱗莖誘導培養當叢生芽長到3-5cm時，將叢生芽分割成小單芽後進行壯苗培養，將健壯幼苗置於10°C光照培養箱內處理14d，再轉接到鱗莖誘導培養基中，將轉接有健壯幼苗的鱗莖誘導培養基置於恆溫培養室內進行試管內百合小鱗莖誘導，通過45天培養誘導出鱗莖。
2.根據權利要求I所述的百合小鱗莖的誘導方法，其特徵在於步驟2)和3)所述的分化培養基配方是Ms+6-BAl. 5mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA0. lmg/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂粉 5g/L。
3.根據權利要求I所述的百合小鱗莖的誘導方法，其特徵在於步驟4)中所述的鱗莖誘導培養基的配方是鱗莖誘導培養基Ms+6-BAO. 5 mg/L +NAA0. I mg/L +蔗糖30 g/L+瓊脂粉5 mg/L。
4.根據權利要求I所述的百合小鱗莖的誘導方法，其特徵在於步驟I)選用外植體鱗莖球低溫處理時冰箱的冷藏溫度為5°C，時間7-10天。
5.根據權利要求I所述的百合小鱗莖的誘導方法，其特徵在於步驟4)中將轉接有健壯幼苗的鱗莖誘導培養基置於恆溫培養室內進行試管內百合小鱗莖誘導時，恆溫培養室內的溫度為10±1°C、溼度75±2%、光照14h、光照強度1800-20001x。
全文摘要
一種百合小鱗莖的誘導方法以百合鱗莖為外植體，接種於分化培養基中，先誘導產生叢生苗，再將叢生苗經低溫處理後，接種於鱗莖誘導培養基中，誘導試管小鱗莖，經10℃低溫處理14d，再置入恆溫培養室培養非常有利於試管小鱗莖的膨大。在試管內誘導出健壯百合小鱗莖，有利於縮短組培苗生長的時間，降低生產成本。
文檔編號A01H4/00GK102754598SQ20121023726
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月10日 優先權日2012年7月10日
發明者吳笛, 張國禹, 張海波, 胡梅香, 邱利文, 馬曉波, 黃桂雲 申請人:中國長江三峽集團公司, 長江三峽生態園林有限公司