含有人參皂苷的納米乳劑及其製備方法和用途的製作方法

2023-07-23 00:28:56 2

專利名稱：含有人參皂苷的納米乳劑及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種納米乳劑及其製備方法和用途，具體地涉及含有人參皂苷C-K的納米乳劑及其製備方法和用途。
背景技術：
人參皂苷C-K為人參中提取得到的化合物，人參皂苷C-K在體外具有良好的抑制和殺傷腫瘤細胞的作用、體外逆轉腫瘤細胞的多藥耐藥等作用，見[Int.Ginseng Symp.(Seoul)2002335-342]。
由於人參皂苷單組分化合物多為疏水性，因此製備注射液需要大量的有機溶媒或是使用大量有毒融作用的增溶劑，如使用聚氧乙烯蓖麻油類(Cremophor-EL)等表面活性劑，該類表面活性劑具有致敏性，大量使用後過敏反應的發生率較高，見[魏曉慧，等Chinese Journalof Pharmaceuticals 2001，32(4)188-192]。鑑於此本發明提供了一種人參皂苷乳劑。

發明內容
本發明提供了含有人參皂苷C-K的納米乳劑，其中C-K為20(R)-人參皂苷C-K、20(S)一人參皂苷C-K或20(R，S)-人參皂苷C-K。
本發明提供了人參皂苷C-K的納米乳劑的製備方法。
本發明提供了人參皂苷C-K納米乳劑在製備治療或預防腫瘤的藥物中的應用。
本發明提供的納米乳劑，含有人參皂苷、油、表面活性劑、調等滲劑和水，其中人參皂苷∶油∶表面活性劑∶調等滲劑的重量比為1∶1-50∶1-10∶1-10。其還可以含有穩定劑，可以是膽固醇、長鏈醇(C14-22)、油酸、亞油酸或其衍生物，用量是人參皂苷的0-200倍。
本發明所述的油是指生物可接受的物質，可以是植物油、動物油、精油、礦物油或合成油中的一種或幾種。其中，植物油選自大豆油、玉米油、花生油、橄欖油、蓖麻油、棕櫚油、椰子油、菜籽油、芝麻油或棉子油中的一種或幾中；動物油選自魚油、油酸、鯨蠟油、單、雙、三甘油酯中的一種或幾種；精油選自五味子油、沙棘油、桃仁油、杏仁油、紅花油、茶油、月見草油、小麥胚芽油、紫蘇油、山蒼子油、鴉膽子油或莪朮油中的一種或幾種；礦物油選自脂肪烴、蠟基烴、芳香烴或石蠟油中的一種或幾種；合成油選自亞油酸、共軛亞油酸、油酸乙酯、氫化蓖麻油、氫化花生油、氫化棉子油、亞油酸乙酯、共軛亞油酸乙酯、自乳化單硬脂酸酯、辛/癸酸甘油酯或甘油三乙酯中的一種或幾種。根據上述油相的理化性質及對人體的有益性優選為富含甘油三酯的豆油。
本發明所述的表面活性劑可以是兩性表面活性劑、非離子表面活性劑。其中兩性表面活性劑選自豆磷脂、蛋黃磷脂、磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、絲氨酸磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸、腦磷脂或氫化磷脂中的一種或幾種；非離子表面活性劑選自蔗糖脂肪酸酯類(如蔗糖酯)、司盤類、吐溫類、聚氧乙烯脂肪酸酯類(如賣澤Myrij)、聚氧乙烯脂肪醇醚類(如卞澤Brij)、Cetomacrogol類或泊洛沙姆類(如poloxamer)中的一種或幾種。經毒理學及物理化學研究篩選，其優選為大豆磷脂、蛋黃磷脂、氫化磷脂或聚氧乙烯-聚氧丙稀嵌段聚合物(泊洛沙姆)中的一種或幾種。
本發明所述的調等滲劑是甘油。
本發明提供的人參皂苷乳劑，活性成分的含量為0.1～10mg/ml。
製備人參皂苷乳劑，一般採用有機溶劑來溶解人參皂苷，這樣不但造成注射劑中殘留有機溶劑而且油相中活性成分的含量較低，因此給臨床用藥帶來困難。本發明人經過大量的實驗研究，提供了一種人參皂苷乳劑的製備方法，該方法不採用有機溶劑，且滿足了臨床藥效所需要的人參皂苷油相高濃度。
本發明提供的人參皂苷乳劑的製備方法為將人參皂苷和表面活性劑先溶解於油中，還可以加入穩定劑，在加熱情況下(30-90℃)，混合至澄明，再將溶於水相的表面活性劑和調等滲劑分散到水中。在高速攪拌下把含有人參皂苷的油溶液加到水相中形成粗乳劑。所得的粗乳劑通過超聲粉碎機、高壓乳勻機進一步乳化，得放置穩定、粒度均勻、無毒的乳劑。
本發明提供的人參皂苷C-K納米乳劑不含有機溶媒及有毒副作用的增溶劑，因此無過敏性，副作用小；且本發明提供的納米乳劑油相中活性成分的含量較高，滿足了臨床藥效所需的高濃度，同時該乳劑還可以改變皂苷在人體內的分布，提高藥物的生物利用度，可以使人參皂苷在體內濃集於腫瘤部位，提高該化合物的抑瘤作用。
具體實施例方式
製備例1製備人參皂苷乳劑將0.5g 20(S)人參皂苷C-K，1.2g蛋黃磷脂，0.04g油酸加入到10g精製大豆油中，加熱(60-90℃)，混合至澄明，得到含人參皂苷50mg/g油溶液。將1.2g泊洛沙姆、2.25g甘油分散至注射用水中得水相，在攪拌條件下，滴加含有人參皂苷的磷脂的油溶液得油相到水相分散體系中，製成粗乳劑，加水至100ml。將所得到的粗乳劑在壓力100Mpa的條件下，通過乳勻機進一步乳化，乳化結束後可於115℃，30min滅菌，分裝即得5mg/ml的乳劑。
製備例2製備人參皂苷乳劑將0.5g人參皂苷C-K、2g豆磷脂、0.5g油酸加入到10g精製大豆油中，加熱，混合至澄明，得到含人參皂苷50mg/g的油溶液。將2.25g甘油、1.2g泊洛沙姆加入至注射用水中製備為水相。在攪拌條件下，滴加含有人參皂苷的磷脂的油溶液到水相分散體系中，製成粗乳劑，加水至100ml。將所得到的粗乳劑在壓力100Mpa的條件下，通過乳勻機進一步乳化，乳化結束後可以於115℃，30min滅菌，分裝即得5mg/ml的乳劑。
製備例3製備人參皂苷乳劑將0.5g 20(R)人參皂苷C-K、3.0g蛋黃磷脂、0.1g油酸加入到10g精製豆油中，混合至澄明，得到含人參皂苷20mg/g油溶液。將2.25g甘油加入至注射用水中，在攪拌條件下，慢慢滴加含有人參皂苷的蛋黃磷脂、油酸的油溶液到分散體系中，製成粗乳劑，加水至100ml。將所得到的粗乳劑在壓力100Mpa下，通過乳勻機進一步乳化，乳化後可以於115℃，30min滅菌，分裝即得5mg/ml的乳劑。
製備例4製備人參皂苷乳劑將1.0g 20(S)人參皂苷C-K，2.0g蛋黃磷脂，0.06g油酸加入到10g精製豆油中，加熱，混合至澄明，得到含人參皂苷100mg/g油溶液。將1.2g泊洛沙姆、2.25g甘油分散至注射用水中得水相。在攪拌條件下，滴加含有人參皂苷的磷脂的油溶液得油相到水相分散體系中，製成粗乳劑，加水至100ml。將所得到的粗乳劑在壓力100Mpa的條件下，通過乳勻機進一步乳化，乳化結束後可於115℃，30min滅菌，分裝即得10mg/ml的乳劑。
試驗例1人參皂苷20(S)C-K乳劑與注射液對S180肉瘤體內增殖的影響乳劑按製備例方法製備；注射液按CN200410002110.8的實施例製備。
取已經傳代一周生長狀態良好的S180腫瘤傳代小鼠，取腹水後，加入三倍體積的注射用生理鹽水稀釋，接種於80隻昆明鼠腋下，每隻0.2ml。接種第二天按體重隨機分為8組，分別為模型對照組、陽性藥組(環磷醯胺60mg/kg，接瘤後第二天單次給藥)、人參皂苷20(S)C-K乳劑高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)劑量組，和人參皂苷20(S)C-K水針高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)劑量組。各組小鼠尾靜脈給藥(模型組給以等量生理鹽水)，每天一次，給藥10天。於末次給藥後24小時處死動物，稱體重，剝取瘤組織稱重，計算抑瘤率。

表1人參皂苷20(S)C-K乳劑與注射液對S180肉瘤體內增殖的影響劑量(mg/kg) 瘤種(g)抑瘤率(％)模型組 ——3.82±1.02 ——環磷醯胺組 601.58±0.53**58.8人參皂苷20(S)C-K乳劑組 501.91±0.54**50.1252.32±0.39**39.212.5 3.28±0.88 14.2人參皂苷20(S)C-K水針組 502.38±0.44**#37.7252.59±0.62**32.112.5 3.31±0.76 13.4與模型組比較P**＜0.01。與相同劑量乳劑組比較P#＜0.05。
結果表明，20(S)C-K乳劑和水針劑50mg/kg和25mg/kg均能明顯抑制體內S180肉瘤的生長腫瘤(P＜0.01)，乳劑組在50 mg/kg時的抑瘤作用明顯優於水針劑組(P＜0.05)。
試驗例2人參皂苷20(S)C-K乳劑對H22肝癌體內增殖的影響取已經傳代一周生長狀態良好的H22腫瘤傳代小鼠，取腹水後，加入三倍體積的注射用生理鹽水稀釋，接種於80隻昆明鼠腋下，每隻0.2ml。接種第二天按體重隨機分為8組，分別為模型對照組、陽性藥組(環磷醯胺60mg/kg，接瘤後第二天單次給藥)、人參皂苷20(S)C-K乳劑高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)劑量組，和人參皂苷水針高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)劑量組。各組小鼠尾靜脈給藥(模型組給以等量生理鹽水)，每天一次，給藥10天。於末次給藥後24小時處死動物，稱體重，剝取瘤組織稱重，計算抑瘤率。
表2人參皂苷20(S)C-K乳劑與注射液對H22肝癌體內增殖的影響劑量(mg/kg) 瘤種(g)抑瘤率(％)模型組 ——4.09±0.64 ——環磷醯胺組 60 1.68±0.64**56.1人參皂苷20(S)C-K乳劑組 50 1.90±0.52**50.425 2.37±0.84**38.012.53.21±0.91 15.9人參皂苷20(S)C-K水針組 50 2.41±0.52**#36.925 2.42±0.72**36.712.53.27±0.81 14.3
與模型組比較P**＜0.01。與相同劑量乳劑組比較P#＜0.05結果表明，人參皂苷20(S)C-K乳劑和水針劑50mg/kg和25mg/kg均能明顯抑制H22肝癌的體內增殖(P＜0.01)，乳劑組在50mg/kg時的抑瘤作用明顯優於水針劑組(P＜0.05)。
試驗例3人參皂苷20(S)C-K乳劑與注射液對U14宮頸癌體內增殖的影響乳劑按製備例方法製備，注射液按CN200410002110.8的實施例製備。
取已經傳代一周生長狀態良好的U14腫瘤傳代小鼠，取腹水後，加入三倍體積的注射用生理鹽水稀釋，接種於80隻昆明鼠腋下，每隻0.2ml。接種第二天按體重隨機分為8組，分別為模型對照組、陽性藥組(環磷醯胺60mg/kg，接瘤後第二天單次給藥)、人參皂苷20(S)C-K乳劑高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)劑量組，和人參皂苷20(S)C-K水針高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)劑量組。各組小鼠尾靜脈給藥(模型組給以等量生理鹽水)，每天一次，給藥10天。於末次給藥後24小時處死動物，稱體重，剝取瘤組織稱重，計算抑瘤率。
表3人參皂苷20(S)C-K乳劑與注射液對U14宮頸癌體內增殖的影響劑量(mg/kg) 瘤種(g)抑瘤率(％)模型組 ——3.96±0.88 ——環磷醯胺組 60 1.37±0.54**64.0人參皂苷20(S)C-K乳劑組 50 1.59±0.47**58.525 2.25±0.75**41.212.53.10±0.86 18.8人參皂苷20(S)C-K水針組 50 2.04±0.44**#46.625 2.30±0.69**39.812.53.13±0.63 18.0與模型組比較P**＜0.01。與相同劑量乳劑組比較P#＜0.05。
結果表明，人參皂苷20(S)C-K乳劑和水針劑50mg/kg和25mg/kg均能明顯抑制U14宮頸癌的體內增殖(P＜0.01)，乳劑組的抑瘤作用相對較強，50mg/kg時作用明顯優於水針劑組(P＜0.05)。
實驗例3人參皂苷20(S)C-K乳劑和水針劑對ESC腹水癌小鼠生存期的作用比較乳劑按製備例方法製備；注射液按CN200410002110.8的實施例製備。
取接種ESC腹水7天後小鼠的乳白色腹水，加入三倍體積生理鹽水稀釋，在無菌條件下給80隻昆明鼠腹腔注射0.2ml(約500萬細胞)，接種後次日隨機分為8組，分別為模型對照組、陽性藥組(環磷醯胺60mg/kg，接瘤後第二天單次給藥)、人參皂苷20(S)C-K乳劑高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)劑量組，和人參皂苷20(S)C-K水針高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)劑量組。各組小鼠尾靜脈給藥(模型組給以等量生理鹽水)，每天一次，給藥10天。停藥後觀察小鼠生存狀態，記錄死亡時間，按生存天數計算生命延長率。
表4人參皂苷20(S)C-K乳劑和水針劑對ESC腹水癌小鼠生存期的影響劑量(mg/kg) 生存天數(天) 生命延長率(％)模型組 —— 15.6±1.71——環磷醯胺組 60 26.6±1.07**70.5人參皂苷20(S)C-K乳劑組 50 24.4±2.41**56.425 21.2±3.08**35.912.516.7±1.347.1人參皂苷20(S)C-K水針組 50 21.8±2.53**#39.725 20.0±2.58**28.212.516.6±1.436.4與模型組比較P**＜0.01。與相同劑量乳劑組比較P#＜0.05。
結果表明，人參皂苷20(S)C-K乳劑和水針劑50mg/kg和25mg/kg均能明顯延長ESC腹水癌小鼠的生存時間(P＜0.01)，乳劑組的生命生長作用相對較強，50mg/kg時作用明顯優於水針劑組(P＜0.05)。
權利要求
1.含有人參皂苷的納米乳劑，其特徵為含有人參皂苷C-K、油、表面活性劑、調等滲劑和水，其中人參皂苷∶油∶表面活性劑∶調等滲劑的重量比為1∶1-50∶1-10∶1-10。
2.根據權利要求1所述的乳劑，其特徵在於人參皂苷C-K為20(R)-人參皂苷C-K、20(S)-人參皂苷C-K或20(R，S)-人參皂苷C-K。
3.根據權利要求1或2所述的乳劑，油可以是植物油、動物油、精油、礦物油、合成油中的一種或幾種。
4.根據權利要求3所述的乳劑，油優選為富含甘油三酯的豆油。
5.根據權利要求1或2所述的乳劑，表面活性劑可以是兩性離子表面活性劑或非離子表面活性劑中的一種或其組合。
6.根據權利要求5所述的乳劑，表面活性劑優選為大豆磷脂、蛋黃磷脂、氫化磷脂或聚氧乙烯-聚氧丙稀嵌段聚合物(泊洛沙姆)中的一種或幾種。
7.根據權利要求1或2所述的乳劑，調等滲劑是甘油。
8.根據權利要求1或2所述的乳劑，其還可以含有穩定劑，穩定劑可以是膽固醇、長鏈醇(C14-22)、油酸、亞油酸或其衍生物，其用量是人參皂苷的0-200倍。
9.權利要求1-8任一所述的乳劑的製備方法將人參皂苷、表面活性劑加入到油中，還可以加入穩定劑，在加熱條件下(30-90℃)，混合至澄明，再將溶於水相的表面活性劑和調等滲劑分散到水中，在高速攪拌下將含有人參皂苷的油溶液加到水相中形成粗乳劑，再通過超聲粉碎機、高壓乳勻機進一步乳化，即得。
10.權利要求1-8任一所述的乳劑在製備治療或預防腫瘤的藥物中應用。
全文摘要
本發明提供了人參皂苷的納米乳劑及其製備方法和用途。本發明提供的人參皂苷乳劑含有人參皂苷，水，油、調等滲劑和表面活性劑，還可以含有穩定劑。本發明提供的乳劑不含有機溶媒及有毒副作用的增溶劑，因此無過敏性，副作用小；且本發明提供的納米乳劑油相中活性成分的含量較高，滿足了臨床藥效所需的高濃度，同時該乳劑還可以改變皂苷在人體內的分布，提高藥物的生物利用度，可以使人參皂苷在體內濃集於腫瘤部位，提高該化合物的抑瘤作用。
文檔編號A61K31/7028GK1626102SQ20041007500
公開日2005年6月15日 申請日期2004年8月24日 優先權日2003年8月25日
發明者林東海, 張雪梅, 王振華, 劉培麗, 劉珂 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司