鮮澤漆汁在製備抗單純皰疹病毒藥物中的應用的製作方法

2023-07-22 19:02:16

專利名稱：鮮澤漆汁在製備抗單純皰疹病毒藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及鮮澤漆汁的新用途，具體是涉及鮮澤漆汁用於製備治療單純皰疹病毒疾病藥物的應用。
背景技術：
近年來，隨著社會人口老齡化、器官移植、免疫抑制劑應用及人類免疫缺陷病毒(HIV)感染的增加，導致患者機體免疫功能下降。其中，HIV感染導致的機體免疫功能低下是單純皰疹病毒感染和復發的主要原因，而單純皰疹病毒又作為輔助因子增加HIV傳播的可能性，促進愛滋病發病並影響預後，臨床調查顯示皰疹病毒的復發感染是免疫功能受損者的主要死亡原因。HSV-I感染能引起唇皰疹、皰疹性甲溝炎和其他皮疹如外傷性皰疹、皰疹性溼疹，皰疹性角膜炎，嚴重非季節性局灶性腦炎等；HSV-2能引起生殖器皰疹、皰疹性直腸 炎、新生兒皰疹等，臨床表現變化多樣，常不典型或無症狀，且可造成潛伏感染，易被人們忽視，同時也是HSV水平和垂直傳播的重要因素。HSV感染的嚴重程度與宿主的免疫功能狀態密切相關，宿主免疫功能受損程度越重，病毒就越容易被激活，病毒激活後疾病會越嚴重。因此，積極防治愛滋病患者的皰疹病毒感染和復發非常重要。目前，愛滋病合併皰疹病毒感染的治療，主要使用的抗病毒藥物包括(I)核苷類藥物一代為阿昔洛韋(ACV，治療HSV和VZV感染)，二代為更昔洛韋(治療CMV感染)、伐昔洛韋，三代為泛昔洛韋(治療VZV感染)；(2)非核苷類藥物膦甲酸鈉、索立夫定(治療HSV感染);(3)生物抗病毒藥物幹擾素及幹擾素誘生劑。但是，這些藥物嚴重的副作用和病毒抗藥株的出現，使研製新的低毒、高效抗病毒藥物刻不容緩。天然藥物具有來源廣泛、不良反應較少的特點，其抗病毒作用日益受到重視。澤漆為大戟科植物澤漆的全草，別名五朵雲、貓兒眼草、奶漿草。據《本草綱目》記載，它具有利水消腫、消痰退熱等功效，為民間常用草藥。澤漆分布廣泛，資源豐富，因此很有必要開發新的抗皰疹病毒的藥物。

發明內容
發明目的本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，通過大量實驗篩選，研究開發出鮮澤漆汁在製備治療單純皰疹病毒疾病藥物的應用。作為優選方案，以上所述的鮮澤漆汁在製備治療單純皰疹病毒藥物中的應用，所述的單純皰疹病毒為單純皰疹病毒I型或2型。本發明提供的鮮澤漆汁和藥學上可接受的載體如稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合齊U、溼潤劑、崩解齊U、吸收促進齊U、表面活性齊U、吸附載體、潤滑劑等，必要時還可以加入香味齊U、甜味劑等製備成治療單純皰疹病毒藥物。本發明所述的藥物可按藥學領域常規方法製備成注射液、片劑、粉針劑、顆粒劑、膠囊、口服液、凝膠劑、乳劑、膏劑、霜劑等多種劑型。本發明提供的鮮澤漆汁製成片劑時把鮮澤漆汁和載體乳糖或玉米澱粉，需要時加入潤滑劑硬脂酸鎂，混合均勻，然後壓片製成片劑。
本發明提供的鮮澤漆汁製成膠囊劑時把鮮澤漆汁和載體乳糖或玉米澱粉混合均勻，整粒，然後裝膠囊製成膠囊劑。本發明提供的鮮澤漆汁製成顆粒劑時，把鮮澤漆汁和稀釋劑乳糖或玉米澱粉混合均勻，整粒，乾燥，製成顆粒劑。本發明提供的鮮澤漆汁製成注射液時，取鮮澤漆汁加入生理鹽水溶解然後加入活性碳，攪拌均勻，80°C加熱30分鐘，過濾，調節PH值，用垂熔玻璃漏鬥或其它濾器過濾至澄明，灌裝，在100至115°C滅菌30分鐘製成注射液。本發明所述的鮮澤漆汁在製備治療單純皰疹病毒藥物中的應用，所述的鮮澤漆汁的製備方法為取新鮮澤漆，除去根，洗淨，將新鮮莖葉花搗碎，紗布過濾擠壓汁液，得到含新鮮生藥18g/ml的新鮮汁液，過濾除菌後-20°C保存，用於製備治療單純皰疹病毒藥物。本發明以體外單純皰疹病毒感染VERO細胞作為研究對象，與現有技術相比具有·以下優點
1、澤漆資源廣泛，易得，成本較低，可持續開發，應用前景廣泛，實驗結果表明抗單純皰疹病毒活性強，並且經毒性實驗結果表明，本發明提供的有效劑量較小，毒性小，不良反應低，使用更安全；
2、澤漆能和不同的賦形劑製備成不同的藥物劑型，能方便臨床應用。
具體實施例方式 下面結合具體實施例，進一步闡明本發明，應理解這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍，在閱讀了本發明之後，本領域技術人員對本發明的各種等價形式的修改均落於本申請所附權利要求所限定的範圍。實施例I
鮮澤漆汁的製備取新鮮澤漆，除去根，洗淨，將新鮮莖葉花搗碎，紗布過濾擠壓汁液，得到含新鮮生藥18g/ml的新鮮汁液，過濾除菌後_20°C保存，備用。實施例2藥理實驗 I材料
1.1細胞株Veix)細胞(非洲綠猴腎細胞)，購自中國科學院上海細胞庫，本實驗室傳代、保存。I. 2藥物。本發明實施例I製備得到的鮮澤漆汁，澤漆水煎劑(製備方法為取乾燥的澤漆，加入10倍量的蒸餾水於100°C煎煮至一半體積，過濾得到濾液，濃縮至浸膏，使得含生藥量20mg/ml，4°C保存);陽性對照藥物為無環鳥苷(ACV)，湖北潛江製藥股份有限公司，批號為20040802。1.3 主要試劑青黴素(山東魯抗)，硫酸鏈黴素(Amresco)，MTT (噻唑鹽，Genebase)，胰蛋白酶(南京生興)，EDTA(Sigma)，RPMI-1640 培養基(GIBC0)，碘化丙啶(PI，Sigma，美國)，RPMI-1640 (GIBC0),新生小牛血清(蘭州民海，Hyclone合資)，96孔培養板(Corning 產品)。1.4儀器超淨工作檯(蘇淨公司，SW-CJ-1F)，CO2培養箱(美國Thermo)，倒置顯微鏡(Olympus，X41)，酶標儀(Bio-Teck，P0WERWAVE340)。I. I. 2 病毒
人類單純皰疹病毒I (HSV-I)和II型(HSV-2)，本實驗室增殖，保存。
2 方法
2.I病毒毒力測定將vero細胞按IX IO5的濃度，接種到96孔細胞培養板上，每孔0. 2ml, 18^24h長成單層細胞，棄去上清，備用。將HSV-I和HSV-2兩種病毒稀釋成不同濃度(10 —1UO +2、10 —3、10 —4、10 —5、10 —6、10 —7、10 —8、10 —9)，加入 20iiL 病毒液，每個濃度4個復孔，吸附lh，棄去未吸附的病毒，加入細胞培養液0. 2ml，37°C 5%0)2培養7211。根據出現細胞病變(CPE)情況，計算病毒的半數組織感染量(TCID5tlX2. 2藥物處理
取本發明實施例I製備得到的鮮澤漆汁和澤漆水煎劑(製備方法為取乾燥的澤漆，力口A 10倍量的蒸餾水於10(TC煎煮至一半體積，過濾得到濾液，濃縮至浸膏，使得含生藥量20mg/ml, 4°C保存)，用10%血清RPMI-1640培養基稀釋分別得到終濃度含澤漆生藥lg/ml。2.3藥物對細胞的毒性作用
取長成單層細胞的96孔細胞培養板，棄去上清，將含不同濃度本發明實施例I製備得到的鮮澤漆汁和澤漆水煎劑(製備方法為取乾燥的澤漆，加入10倍量的蒸餾水於100°C煎煮至一半體積，過濾得到濾液，濃縮至浸膏，使得含生藥量20mg/ml，4°C保存)的細胞維持液
0.2ml加入細胞，不含藥物的正常細胞對照，4個復孔，370C 5% CO2培養72h，倒置顯微鏡下觀察並記錄細胞病變情況。每孔加入20 ii L 5mg/ml的MTT溶液，繼續培養4h，棄去上清，力口A 0. 2mL DMSO充分溶解，酶標儀570_630nm雙波長法測0. D值，計算藥物半數細胞毒性濃度(TC50)。以最大無毒濃度為起始濃度，2倍倍比稀釋幾個濃度，進行體外抗病毒實驗。2. 4藥物抑制單純皰疹病毒致細胞病變作用
將Vero細胞接種至96孔培養板，18 24h細胞長成單層，棄去培養上清，設藥物組包括本發明實施例I製備得到的鮮澤漆汁和澤漆水煎劑(製備方法為取乾燥的澤漆，加入10倍量的蒸餾水於100°C煎煮至一半體積，過濾得到濾液，濃縮至浸膏，使得含生藥量20mg/ml，4°C保存)、陽性對照組、病毒對照組和細胞對照組。將單純皰疹病毒(HSV)病毒液用PBS稀釋成iooxtcid5Q (hsv-i稀釋io4倍，hsv-2稀釋io倍)，每孔接種20ml稀釋的病毒液，每板均留4孔作正常細胞對照，病毒吸附Ih後，棄上清液。將含實施例I製備得到的不同濃度鮮澤漆汁和不同濃度澤漆水煎劑(製備方法為取乾燥的澤漆，加入io倍量的蒸餾水於100°c煎煮至一半體積，過濾得到濾液，濃縮至浸膏，使得含生藥量20mg/ml，4°C保存)的10%血清RPMI-1640培養基分別加入接種病毒的細胞培養板上，含0. 2mg/mL阿昔洛韋的10%血清RPMI-1640培養基作為陽性對照，病毒對照組和細胞對照組為10%血清RPMI-1640培養基，每孔200ML，設4個復孔。培養板密封后置入37°C、5%C02恆溫箱內培養72h，每24h在倒置顯微鏡下觀察細胞病變效應(CPE)，記錄CPE程度。72h後，每孔加入20 ii L 5mg/ml的MTT溶液，繼續培養4h，棄去上清，加入0. 2mL DMSO充分溶解，酶標儀570_630nm雙波長法測0. D值，計算50%病毒抑制率，公式如下
權利要求
1.鮮澤漆汁在製備治療單純皰疹病毒藥物中的應用。
2.根據權利要求I所述的鮮澤漆汁在製備治療單純皰疹病毒藥物中的應用，其特徵在於所述的單純皰疹病毒為單純皰疹病毒I型或2型。
3.根據權利要求I或2所述的鮮澤漆汁在製備治療單純皰疹病毒藥物中的應用，其特徵在於將澤漆提取物和藥學上可接受的載體製備成注射液、片劑、粉針劑、顆粒劑、膠囊、凝膠劑、乳劑、膏劑、霜劑或口服液劑型的藥物。
4.根據權利要求I或2所述的鮮澤漆汁在製備治療單純皰疹病毒藥物中的應用，其特徵在於所述的鮮澤漆汁的製備方法為取新鮮澤漆，除去根，洗淨，將新鮮莖葉花搗碎，紗布過濾擠壓汁液，得到含新鮮生藥18g/ml的新鮮汁液，過濾除菌後，_20°C保存，備用。
全文摘要
本發明公開了鮮澤漆汁在製備治療單純皰疹病毒藥物中的應用，本發明通過大量實驗篩選，實驗結果表明鮮澤漆汁體外對單純皰疹病毒致細胞病變效應具有明顯的抑制作用，並且毒性低，不良反應小，且澤漆資源廣泛，易得，成本較低，可持續開發，應用前景廣泛，有望開發成新的抗單純皰疹病毒藥物。
文檔編號A61K36/47GK102716177SQ20121023561
公開日2012年10月10日 申請日期2012年7月10日 優先權日2012年7月10日
發明者何立巍, 孟玉芬, 張軍峰, 董偉, 詹瑧, 馬宏躍, 馬肖兵 申請人:南京中醫藥大學