一種檢測馬杜黴素的方法及其專用酶聯免疫試劑盒的製作方法
2023-08-06 03:02:16
專利名稱：一種檢測馬杜黴素的方法及其專用酶聯免疫試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測馬杜黴素的方法及其專用酶聯免疫試劑盒。
背景技術：
馬杜黴素(Melamine)，是一種三嗪類含氮雜環有機化合物，重要的氮雜環有機化 工原料。純白色單斜稜晶體，無味。溶於熱水，微溶於冷水，極微溶於熱乙醇，不溶於醚、苯 和四氯化碳，可溶於甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等。在一般情況下較穩定，但在 高溫下可能會分解放出氰化物。由於馬杜黴素的分子式中含氮量為66%左右，而蛋白質的平均含氮量為16%左 右，因此，常被一些不法商人用作食品添加劑，以提升食品檢測中的蛋白質含量指標，因此 馬杜黴素被俗稱為「蛋白精」。雖然，目前廣泛認為馬杜黴素毒性比較低微，大鼠口服的半 數致死量大於3g/kg體重，但長期攝入仍不容忽視，會造成生殖、泌尿系統的損害，膀胱、腎 部結石，並可進一步誘發膀胱癌。1994年國際化學品安全規劃署和歐洲聯盟委員會合編的 《國際化學品安全手冊》第三卷和國際化學品安全卡片說明長期或反覆大量攝入馬杜黴素 可能對腎與膀胱產生影響，導致產生結石。因此，需要靈敏、準確、快速的檢測方法。目前檢測馬杜黴素含量的化學方法有高效液相色譜法和液相色譜-串聯質譜法， 由於複雜的儀器設備和繁瑣的過程，不適合現場監控和大量樣本篩查。
發明內容
本發明的一個目的是提供一種可用作馬杜黴素半抗原的化合物。本發明所提供的馬杜黴素半抗原化合物，其結構式如式I所示
權利要求
1.一種馬杜黴素單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCC No. 3391的馬杜黴素單克隆抗體 雜交瘤細胞株MAD分泌產生的。
2.保藏編號為CGMCCNo. 3391的馬杜黴素單克隆抗體雜交瘤細胞株MAD。
3.一種化合物，其結構式如式I所示
4.權利要求3所示化合物與載體蛋白的偶聯物；所述載體蛋白為鼠血清蛋白、甲狀腺 蛋白、牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或血藍蛋白。
5.權利要求3所述化合物和/或權利要求4所述化合物與載體蛋白的偶聯物在製備馬 杜黴素單克隆抗體中的應用。
6.權利要求3中所述化合物、權利要求4中所述偶聯物和/或權利要求1中所述馬杜 黴素單克隆抗體在製備檢測馬杜黴素的酶聯免疫試劑盒中的應用。
7.—種檢測馬杜黴素的酶聯免疫試劑盒，為下述1)、2)、；3)或4)中任一所述酶聯免疫 試劑盒1)酶聯免疫試劑盒中包括權利要求4中所述偶聯物、權利要求1中所述馬杜黴素單克 隆抗體和酶標記抗抗體；其中，所述偶聯物作為包被原；2)酶聯免疫試劑盒中包括權利要求3中所述化合物的酶標記物、權利要求1中所述馬 杜黴素單克隆抗體和抗抗體；其中，所述抗抗體作為包被原；3)酶聯免疫試劑盒中包括權利要求3中所述化合物的酶標記物、權利要求1中所述馬 杜黴素單克隆抗體；其中，所述馬杜黴素單克隆抗體作為包被原；4)酶聯免疫試劑盒中包括權利要求4中所述偶聯物、權利要求1中所述馬杜黴素單克 隆抗體的酶標記物；其中，所述偶聯物作為包被原。
8.一種檢測樣品中馬杜黴素的方法，包括如下步驟1)將待測樣品用提取劑進行提取，得到提取溶液，即為待測樣本溶液；2)用權利要求7所述試劑盒對所述待測樣本溶液進行檢測；所述提取劑為甲醇與氯化鈉的混合溶液；所述待測樣品為動物肝臟或動物肌肉。
9.一種製備權利要求3中所述化合物的方法，包括如下步驟將每IOOmg馬杜黴素胺， 溶解於ImL 二噁烷中；然後加入70 μ L無水三正丁胺，4°C冷卻，並攪拌15min ；加入15 μ L 重蒸的氯甲酸異丁酯，4°C攪拌30min，得到溶液I ；稱取30mg對氨基苯甲酸溶於水中，調pH 至9. 0，得到溶液II ；將溶液I逐滴加入到溶液II中，並於4°C攪拌4小時，得到權利要求3 中所述化合物。
10. 一種製備權利要求4中所述化合物與載體蛋白的偶聯物的方法，包括如下步驟將 IOOmg馬杜黴素胺，溶解於ImL 二噁烷中；然後加入70 μ L無水三正丁胺，4°C冷卻，並攪拌 15min ；加入15 μ L重蒸的氯甲酸異丁酯，4°C攪拌30min，得到溶液I ；稱取30mg對氨基苯甲 酸溶於水中，調PH至9. 0，得到溶液II ；將溶液I逐滴加入到溶液II中，得到溶液III ；稱取50mg 1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和25mg N-羥基硫代琥珀醯 亞胺加入到所述溶液III中，攪拌混勻，25°C反應12小時，得到溶液IV ；稱取載體蛋白50mg 溶解於3mL碳酸溶液中，逐滴加入到溶液IV中，25°C繼續攪拌4h ；透析，得到權利要求4中 所述化合物與載體蛋白的偶聯物。
全文摘要
本發明公開了一種檢測馬杜黴素的方法及其專用酶聯免疫試劑盒。該酶聯免疫試劑盒，包括馬杜黴素單克隆抗體。該馬杜黴素單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCCNo.3391的馬杜黴素單克隆抗體雜交瘤細胞株MAD分泌產生的。本發明的酶聯免疫試劑盒主要採用間接競爭ELISA方法定性或定量檢測動物肌肉和肝臟中馬杜黴素的含量。本發明試劑盒及檢測方法對樣品的前處理要求低，樣品前處理過程簡單，能同時快速檢測大批量樣品；採用高特異性的馬杜黴素單克隆抗體，檢驗方法方便易行，具有特異性高、靈敏度高、精確度高、準確度高等特點。
文檔編號C07K14/47GK102079789SQ20091024130
公開日2011年6月1日 申請日期2009年11月27日 優先權日2009年11月27日
發明者史為民, 吳小平, 徐飛, 朱奎, 江海洋, 潘淨如, 王奇昌, 王戰輝, 王進 申請人:北京維德維康生物技術有限公司