一種華重樓誘導培養基及其應用的製作方法

2023-07-27 16:48:31

本發明屬於生物技術領域，具體涉及一種華重樓誘導培養基及其應用。

背景技術：

重樓為滇重樓(Paris polyphylla var.yunnanensis)和華重樓(Paris polyphylla var.chinensis)的地下莖，前者主產於雲南，後者主產於四川。重樓具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚等功效外，還有止血、抗腫瘤、抗生育、免疫調節及心血管等多方面的生理活性，用於痛腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、驚風抽搐等症的治療。

目前制約重樓植物規模化栽種的主要問題是重樓種苗的短缺。重樓種子由於存在種胚發育不完全，胚乳堅硬，胚軸後熟等明顯「雙重休眠」特性，因此播種後通常需要經歷兩冬一夏才能萌發成苗，是典型的「二年生種子」，而且在自然狀態下，即使經過了長時間休眠，重樓種子的出苗率也不高，因此目前僅靠重樓種子進行有性繁殖已無法滿足華重樓植物大面積栽種的需要。

中國專利CN103548682B公開了一種華重樓植株的快速繁殖方法，包括愈傷組織的誘導、不定芽的分化、生根培養及煉苗和移栽步驟，所採用的不定芽的誘導和快速增殖培養基為MS+6-BA 1.0～4.0mg/L+IAA 0.1～1.0mg/L+KT 0.1～1.0mg/L+頭孢曲松鈉200～500mg/L，生根培養基為1/2MS+IBA 0.1～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+活性碳0.1～1.0％。該發明培育的組培苗生長速度快、且保留了華重樓的優良特性，但其愈傷組織誘導率有待提高。

技術實現要素：

為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的在於提供一種華重樓誘導培養基及其應用。本發明提供的華重樓誘導培養基具有良好的愈傷組織誘導率，解決了華重樓植物規模化栽種的問題。

本發明提供了一種華重樓誘導培養基，所述誘導培養基組成為：

MS基礎培養基、6-苄氨基嘌呤1-2mg/L、萘乙酸0.1-0.5mg/L、油菜素內酯0.03-0.07mg/L、瓊脂4-6g/L和蔗糖15-65g/L。製備方法：稱取相應量的6-苄氨基嘌呤，萘乙酸，油菜素內酯，瓊脂和蔗糖依次加入到MS培養基中，攪拌均勻，調節pH值，120℃滅菌30min，即得。

本發明提供的華重樓誘導培養基中油菜素內酯與其他激素協同促進細胞的分裂、植物的生理代謝，從而提高培養基愈傷組織誘導率。

進一步地，所述的華重樓誘導培養基的組成為：

MS基礎培養基、6-苄氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.3mg/L、油菜素內酯0.05mg/L、瓊脂5g/L和蔗糖40g/L。

進一步地，所述誘導培養基的pH值為5.8。

進一步地，所述的華重樓誘導培養基在華重樓快速繁殖中的應用。

與現有技術相比，本發明提供的華重樓誘導培養基具有良好的愈傷組織誘導率，解決了華重樓植物規模化栽種的問題。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發明做進一步詳細說明，這些實施例僅用於例證的目的，絕不限制本發明的保護範圍。

實施例1一種華重樓誘導培養基

所述華重樓誘導培養基的組成為：

MS基礎培養基、6-苄氨基嘌呤1mg/L、萘乙酸0.1mg/L、油菜素內酯0.03mg/L、瓊脂4g/L和蔗糖15g/L。

製備方法：稱取相應量的6-苄氨基嘌呤，萘乙酸，油菜素內酯，瓊脂和蔗糖依次加入到MS培養基中，攪拌均勻，調節pH為5.8，120℃滅菌30min，即得。

實施例2一種華重樓誘導培養基

所述華重樓誘導培養基的組成為：

MS基礎培養基、6-苄氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.3mg/L、油菜素內酯0.05mg/L、瓊脂5g/L和蔗糖40g/L。

製備方法與實施例1類似。

實施例3一種華重樓誘導培養基

所述華重樓誘導培養基的組成為：

MS基礎培養基、6-苄氨基嘌呤2mg/L、萘乙酸0.5mg/L、油菜素內酯0.07mg/L、瓊脂6g/L和蔗糖65g/L。

製備方法與實施例1類似。

對比例1一種華重樓誘導培養基

所述華重樓誘導培養基的組成為：

MS基礎培養基、6-苄氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.3mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L、瓊脂5g/L和蔗糖40g/L。

製備方法與實施例1類似。

與實施例2的區別在於，將油菜素內酯替換為2，4-二氯苯氧乙酸。

對比例2一種華重樓誘導培養基

所述華重樓誘導培養基的組成為：

MS基礎培養基、6-苄氨基嘌呤1.55mg/L、萘乙酸0.3mg/L、瓊脂5g/L和蔗糖40g/L。

製備方法與實施例1類似。

與實施例2的區別在於，未添加油菜素內酯，增加了6-苄氨基嘌呤的用量。

試驗例一、愈傷組織誘導率測試

1.試驗材料：實施例1-3及對比例1-2製備的華重樓誘導培養基。

2.試驗內容：

選取多年生、健壯，無病蟲、無損傷的華重樓植物根莖，洗淨並晾曬，切除根莖上的不定根，再切取帶芽體的6個莖節，用無菌水衝洗6次後切除其上的芽體，最後將該根莖莖節切成1.5cm3大小後接入所述試驗材料的愈傷組織誘導培養基中，先置於10℃的冰箱中低溫處理18天，再轉放在培養溫度為25℃、每天光照12h和光照強度為1200lx的條件下進行培養，培養55天後統計其愈傷組織誘導率。

3.試驗結果：愈傷組織誘導率測試結果見表1。

表1愈傷組織誘導率測試結果

由表1可知，本發明製備的華重樓誘導培養基中愈傷組織誘導率較高。而對比例1-2製備的華重樓誘導培養基愈傷組織誘導率比實施例1-3製備的華重樓誘導培養基的差，說明本發明配伍合理科學，各組相互作用，協同起提高其愈傷組織誘導率的作用，克服了其規模化栽種的問題。