一種油菜硫甙的速測方法及其測試板的製作方法

2023-07-28 02:43:56 3

專利名稱：一種油菜硫甙的速測方法及其測試板的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種用於對油菜籽中硫甙含量進行速測的方法及其測定所用的測試板，它的應用能有效促進雙低油菜的推廣和發展，以提高油菜的內在品質。
背景技術：
油菜是我國第一大油料作物，菜籽油佔我國食用植物油總量的60％，而菜籽餅粕則是飼料業的優質蛋白源。雙低油菜即低芥酸低硫甙油菜，它對油菜籽中芥酸和硫甙兩項內在化學品質指標有明確的限量，其中菜籽油芥酸含量應低於2％，這樣的菜籽油營養價值高，有益於人體健康；菜籽餅粕中硫甙的含量應低於30μmol/g，這樣的餅粕毒性低，蛋白含量高，胺基酸組成平衡，是優質的飼料蛋白源。而普通油菜中其芥酸和硫甙的含量可分別高達40％和100μmol/g以上，造成普通菜籽油芥酸含量高，營養價值低，餅粕因硫甙降解產物對畜禽有毒而難於用作飼料。因此雙低油菜是目前油料發展的方向。然而，要發展雙低油菜，能否快速有效地進行芥酸硫甙含量的測定是一項急需解決的配套措施，否則就無法將雙低油菜與普通油菜分開收購、單獨加工，難以實現雙低油菜的優質優用。就硫甙的測定來說，目前已存在有硫甙的液相色譜測定方法，但該方法不僅程序複雜，耗時長，費用高，而且需要在實驗室藉助昂貴的儀器設備來進行，這顯然不適於在分布面廣、檢測量大的種植和收購現場使用；也存在有氯化鈀法測定硫甙的方法，雖測試方法較為簡便，但因測量誤差大、不穩定而不能實用。

發明內容
本發明所要解決的是針對現有技術存在的問題而提供一種簡便有效的油菜硫甙速測方法及其測試板，以促進雙低油菜的推廣和發展。
本發明油菜硫甙速測方法的技術方案為取1-5g菜籽樣品粉碎後，稱取0.20-0.80g置於具塞試管中，加入1.0-5.0ml蒸餾水，搖勻，發生硫甙降解反應，反應數分鐘後過濾，取20-80μl濾液置於硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液60-240μl反應數分鐘後，形成有色產物，由於溶液顏色深淺與樣品中硫甙含量有關，採用分光光度法並根據標準曲線用測量儀即可測定硫甙含量。
上述方案中，菜籽樣品粉碎後的細度為30-50目；磷酸二氫鉀水溶液的濃度為20-80mmol/L，製取方法為室溫下取分析純磷酸二氫鉀6.80g溶解後，定溶至1000ml，紫外線滅菌後，用瓶分裝；硫甙的測試結果用μmol/g表示。
本發明的硫甙測試板由下述方法製作而成稱取6.0-6.5mg顯色劑(Chrom G)用無水乙醇溶解後定溶10ml，取5-20μl置於測試板每孔，真空乾燥1-2小時後待用，稱取18.24-34.20g磷酸氫二鉀溶解後，定溶1000ml，用磷酸調pH6.0後備用，將硫甙測試酶(Gln MEN)溶於上述磷酸氫二鉀緩衝液，配製濃度為80-180U/ml，取10-50μl置於上述測試板每孔，冷凍真空乾燥2小時後即成。
本發明的測定硫甙的機理在於利用酶的專一性，使菜籽中硫甙與內源酶和特異性外源酶產生反應，反應後生成產物再與顯色劑反應形成有特徵吸收峰的有色產物，由於溶液顏色深淺與樣品中硫甙含量有關，採用分光光度法用一定波長單色光根據標準曲線用測量儀即可測定硫甙的含量。
本發明的優點在於1、測試方法簡便，測試速度快，可適於各種油菜籽品種的測試；2、測試費用低，速測儀的價格低，體積小，有助於該項技術的普及推廣；3、測定精度較高，誤差為±4μmol/g，達到了國際標準；4、對環境適應性強，便於在現場使用，實用性強，能有效促進雙低油菜的產業化發展。


圖1為本發明速測方法的流程框圖。
具體實施例方式
以下詳細說明本發明的實施例。
實施例1稱取2g華雙3號油菜菜籽樣品粉碎，細度40目，取0.50g於具塞試管，加入3.0ml蒸餾水並搖勻，發生硫甙降解反應，室溫下反應3-10分鐘後過濾，取50μl濾液置於硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液150μl，反應5-15分鐘形成有色產物，根據硫甙含量與形成有色產物間相關關係，用測量儀測出硫甙含量為27.5μmol/g。
實施例2取4g中雙5號油菜菜籽樣品粉碎，細度50目，取0.60g於具塞試管，加入3.6ml蒸餾水並搖勻，發生硫甙降解反應，室溫下反應8分鐘後過濾，取60μl濾液置於硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液180μl，反應9分鐘形成有色產物，根據硫甙含量與形成有色產物間相關關係，用測量儀測定硫甙含量為25.6μmol/g。
實施例3為本發明硫甙測試板的實施例稱取6.2mg顯色劑(Chrom G)用無水乙醇溶解後定溶10ml，取10μl置於測試板每孔，真空乾燥1-2小時後待用，稱取22.8g磷酸氫二鉀溶解後，定溶1000ml，用磷酸調pH6.0後備用，將硫甙測試酶(Gln MEN)溶於上述磷酸氫二鉀緩衝液，配製濃度為100U/ml，取20μl置於上述測試板每孔，冷凍真空乾燥2小時後即成。
權利要求
1.一種油菜硫甙的速測方法，其特徵在於取1-5g菜籽樣品粉碎後，稱取0.20-0.80g置於具塞試管中，加入1.0-5.0ml蒸餾水，搖勻，發生硫甙降解反應，反應數分鐘後過濾，取20-80μl濾液置於硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液60-240μl反應數分鐘後，形成有色產物，採用分光光度法並根據標準曲線用測量儀即可測定硫甙含量。
2.按權利要求1所述的油菜硫甙的速測方法，其特徵在於菜籽樣品粉碎後的細度為30-50目。
3.按權利要求1或2所述的油菜硫甙的速測方法，其特徵在於磷酸二氫鉀水溶液的濃度為20-80mmol/L。
4.按權利要求3所述的油菜芥酸的速測方法，其特徵在於稱取2g菜籽樣品粉碎，細度40目，取0.50g於具塞試管，加入3.0ml蒸餾水並搖勻，發生硫甙降解反應，室溫下反應3-10分鐘後過濾，取50μl濾液置於硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液150μl，反應5-15分鐘形成有色產物，根據硫甙含量與形成有色產物間相關關係，用測量儀測出硫甙含量。
5.按權利要求3所述的油菜芥酸的速測方法，其特徵在於取4g菜籽樣品粉碎，細度50目，取0.60g於具塞試管，加入3.6ml蒸餾水並搖勻，發生硫甙降解反應，室溫下反應8分鐘後過濾，取60μl濾液置於硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液180μl，反應9分鐘形成有色產物，根據硫甙含量與形成有色產物間相關關係，用測量儀測出硫甙含量。
6.一種油菜硫甙的速測測試板，其特徵在於它由下述方法製作而成稱取6.0-6.5mg顯色劑(Chrom G)用無水乙醇溶解後定溶10ml，取5-20μl置於測試板每孔，真空乾燥1-2小時後待用，稱取18.24-34.20g磷酸氫二鉀溶解後，定溶1000ml，用磷酸調pH6.0後備用，將硫甙測試酶(GlnMEN)溶於上述磷酸氫二鉀緩衝液，配製濃度為80-180U/ml，取10-50μl置於上述測試板每孔，冷凍真空乾燥2小時後即成。
全文摘要
本發明涉及一種用於對油菜籽中硫甙含量進行速測的方法及其測定所用的測試板,它的應用能有效促進雙低油菜的推廣和發展,以提高油菜有內在品質。本發明油菜硫甙速測方法的技術方案為:取1－5g菜籽樣品粉碎後,稱取0.20－0.80g置於具塞試管中,加入1.0－5.0ml蒸餾水,搖勻,發生硫甙降解反應,反應數分鐘後過濾,取20－80μl濾液置於硫甙測試板,加入磷酸二氫鉀水溶液60－240μl反應數分鐘後,形成有色產物,由於溶液顏色深淺與樣品中硫甙含量有關,採用分光光度法並根據標準曲線用測量儀即可測定硫甙含量。本發明測試方法簡便,測試速度快,費用低,可適於各種油菜籽品種的測試;測定精度較高,對環境適應性強,便於在現場使用,實用性強。
文檔編號G01N21/77GK1341851SQ0113350
公開日2002年3月27日 申請日期2001年9月28日 優先權日2001年9月28日
發明者李培武, 張文, 周霞, 李光明, 楊湄, 吳渝, 汪雪芳, 吳宣誠, 仝乘風, 胡樂華, 甘東生, 孟子園, 陳小媚, 丁小霞, 陳洪, 謝立華 申請人:中國農業科學院油料作物研究所