一種公共衛生場所空氣採樣中和培養基的製作方法

2023-07-24 01:37:26 1

本發明涉及培養基製備技術領域，具體為一種公共衛生場所空氣採樣中和培養基。

背景技術：

公共衛生場所空氣的微生物受到消毒劑的化學成分影響，首先解決公共場所空氣中消毒作用的多種化學物質成分是關鍵核心部分，並且需要嚴格掌握其作用時間。這項技術是根據公共衛生場所中空氣消毒劑與微生物接觸一定時間之後，空氣中的微生物發生變化評價空氣消毒劑效果，以至於比較市面銷售的各種空氣消毒劑(包括室內空氣消毒劑)及開發更有效地空氣消毒劑的開發與生產。目前為止，除去空氣中殘留消毒劑化學成分的方法已有很多，例如來源於中國期刊網2016年7期《心理醫生》，於2016年8月發表的殘餘消毒劑的清除方法，針對消毒劑中存在的酸、鹼的成分，即選用吸附、稀釋、離心、過濾等方法來除去殘留化學成分。但是這些方法存在局限性，稀釋方法的缺點是若標本中存活的菌數已經較少，經過再稀釋後會使標本中的細菌大幅度降低，導致在檢測室檢驗不出，致使假陰性的結果發生，過濾法使用過程相對比較複雜，對操作人員的技術要求較高，這些方法都比較簡單，局限性比較大，目前方法中使用較多的是化學中和法，現在中和劑種類有很多，但針對不同消毒劑和細菌，至今尚無理想的中和劑來進行處理，所以如何採取空氣樣本中不含殘餘消毒劑多種化學物質是這項技術的將解決核心部分，才能使空氣品質檢測方法更準確、可靠。為此，我們選用新型空氣採樣中和培養基技術，全面去除殘留的空氣消毒劑各種化學成分，以培養空氣中存在的細菌來考察對公共空氣中進行消毒的空氣消毒劑的效果高低，以至於評價公共衛生環境中的空氣品質。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供一種公共衛生場所空氣採樣中和培養基，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種公共衛生場所空氣採樣中和培養基，該種公共衛生場所空氣採樣中和培養基的製備方法步驟如下：

s1：選取材料：選取卵磷脂20-30g，吐溫-8020-60g，組氨酸2-10g，硫代硫酸鈉2-10g，巰基乙酸鈉1-2g，葡萄糖30-40g，胰蛋白腖20-30g，瓊脂40-50g，氯化鈉17g；

s2：過濾、溶解：將步驟s1選取的材料依次通入到活性炭過濾器內進行空氣前過濾處理，然後將卵磷脂、吐溫-80、組氨酸、硫代硫酸鈉和巰基乙酸鈉添加在加熱裝置中加熱攪拌，攪拌時間25-35分鐘，溫度設置在80℃，溶解後形成溶液一，然後將葡萄糖、胰蛋白腖、瓊脂和氯化鈉添入到加熱裝置內，攪拌混合10-20分鐘，溶解後形成溶液二，然後將溶液一內溶解的混合溶液加入到溶液二，攪拌混合10-16分鐘，靜置冷卻10-20分鐘最後將得到的混合料中加入80-120毫升的水充分攪拌10-20分鐘，至各成分全部與水溶解均勻，溶解後形成培養基；

s3：調整ph：取與標準管同口徑的試管三支，於第一、三管各加入欲測定ph的的培養基5ml，並於第一管中加入0.2g/l的酚紅0.25ml作為測定管，充分混勻，在第二管加入蒸餾水5ml，標準管為ph標準比色管，然後精確緩慢的將矯正溶液向測定管進行矯正，直至顏色通過ph試紙測定後與標準管相同為止，顏色呈淡紫色，其ph值調節為7，每加一滴後都需要充分混勻，比色後再加第二滴準確記錄加入的量；

s4：過濾澄清：將步驟s2中的培養基導入到容器內，以高壓100-110kpa蒸汽融化10分鐘後，靜置高壓鍋內過夜12小時，次日將培養基傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培養基；

s5：分裝：向步驟s4中清晰的培養基加熱融化，溫度為120-130℃，時間為1小時，然後靜置培養基30分鐘，使得培養基內溫度冷至50℃左右，以無菌手續倒入滅菌平皿內，平皿倒入的培養基約13-15mol/l，輕搖平皿底，使培養基平鋪於平皿底部，待凝固後備用；

s6：滅菌：將步驟s5中凝固的培養基以後高壓蒸汽進行滅菌，溫度為115℃，時間為15-30min；

s7：檢定和保存：培養基製成後須經檢定方可使用，檢定時將培養基放37℃溫箱內培養24小時，制好的培養基放在4-6℃冰箱內備用。

優選的，所述步驟s2中的加熱裝置為電爐。

優選的，所述步驟s3中的矯正液為過酸或過鹼溶液，且過酸或過鹼溶液採用0.1mol/l鹽酸溶液或者0.1mol/l氫氧化鈉。

優選的，所述步驟s4中的容器為鋁鍋或者廣口搪瓷容器。

優選的，所述步驟s5中的平皿的內徑為九釐米。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：該種公共衛生場所空氣採樣中和培養基中和劑中的卵磷脂可中和季銨化合物，吐溫-80可中和酚類化合物，硫代硫酸鈉可中和具有氧化性的防腐劑如碘和氯，巰基乙酸鈉可中和含汞防腐劑，組氨酸可中和醛類防腐劑，上述物質按比例混合後對殘留公共衛生場所空氣消毒劑具有切實可靠的中和作用，能與殘留公共衛生場所空氣消毒劑發生化學反應，生成對實驗微生物沒有殺滅或抑制其生長的作用、對培養成分沒有破壞作用、對物理性狀沒有影響的中和產物，對相應殘留公共衛生場所空氣消毒劑具有切實可靠的中和作用。

附圖說明

圖1為本發明工作流程圖；

圖2為本發明一般培養基處理後的細菌濃度示意圖；

圖3為本發明培養基處理後的細菌濃度示意圖；

圖4為本發明細菌在培養基處理前後對照圖。

具體實施方式

下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。

實施例一

一種公共衛生場所空氣採樣中和培養基，該種公共衛生場所空氣採樣中和培養基的製備方法步驟如下：

s1：選取材料：選取卵磷脂20g，吐溫-8020g，組氨酸2g，硫代硫酸鈉2g，巰基乙酸鈉1g，葡萄糖30g，胰蛋白腖20g，瓊脂40g，氯化鈉17g；

s2：過濾、溶解：將步驟s1選取的材料依次通入到活性炭過濾器內進行空氣前過濾處理，然後將卵磷脂、吐溫-80、組氨酸、硫代硫酸鈉和巰基乙酸鈉添加在加熱裝置中加熱攪拌，攪拌時間25分鐘，溫度設置在80℃，溶解後形成溶液一，然後將葡萄糖、胰蛋白腖、瓊脂和氯化鈉添入到加熱裝置內，攪拌混合10分鐘，溶解後形成溶液二，然後將溶液一內溶解的混合溶液加入到溶液二，攪拌混合10分鐘，靜置冷卻10分鐘最後將得到的混合料中加入80毫升的水充分攪拌10分鐘，至各成分全部與水溶解均勻，溶解後形成培養基；

s3：調整ph：取與標準管同口徑的試管三支，於第一、三管各加入欲測定ph的的培養基5ml，並於第一管中加入0.2g/l的酚紅0.25ml作為測定管，充分混勻，在第二管加入蒸餾水5ml，標準管為ph標準比色管，然後精確緩慢的將矯正溶液向測定管進行矯正，直至顏色通過ph試紙測定後與標準管相同為止，顏色呈淡紫色，其ph值調節為7，每加一滴後都需要充分混勻，比色後再加第二滴準確記錄加入的量；

s4：過濾澄清：將步驟s2中的培養基導入到容器內，以高壓100kpa蒸汽融化10分鐘後，靜置高壓鍋內過夜12小時，次日將培養基傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培養基；

s5：分裝：向步驟s4中清晰的培養基加熱融化，溫度為120℃，時間為1小時，然後靜置培養基30分鐘，使得培養基內溫度冷至50℃左右，以無菌手續倒入滅菌平皿內，平皿倒入的培養基約13mol/l，輕搖平皿底，使培養基平鋪於平皿底部，待凝固後備用；

s6：滅菌：將步驟s5中凝固的培養基以後高壓蒸汽進行滅菌，溫度為115℃，時間為15min；

s7：檢定和保存：培養基製成後須經檢定方可使用，檢定時將培養基放37℃溫箱內培養24小時，制好的培養基放在4℃冰箱內備用。

實施例二

一種公共衛生場所空氣採樣中和培養基，該種公共衛生場所空氣採樣中和培養基的製備方法步驟如下：

s1：選取材料：選取卵磷脂25g，吐溫-8040g，組氨酸6g，硫代硫酸鈉6g，巰基乙酸鈉1.5g，葡萄糖35g，胰蛋白腖25g，瓊脂45g，氯化鈉17g；

s2：過濾、溶解：將步驟s1選取的材料依次通入到活性炭過濾器內進行空氣前過濾處理，然後將卵磷脂、吐溫-80、組氨酸、硫代硫酸鈉和巰基乙酸鈉添加在加熱裝置中加熱攪拌，攪拌時間30分鐘，溫度設置在80℃，溶解後形成溶液一，然後將葡萄糖、胰蛋白腖、瓊脂和氯化鈉添入到加熱裝置內，攪拌混合15分鐘，溶解後形成溶液二，然後將溶液一內溶解的混合溶液加入到溶液二，攪拌混合13分鐘，靜置冷卻15分鐘最後將得到的混合料中加入100毫升的水充分攪拌15分鐘，至各成分全部與水溶解均勻，溶解後形成培養基；

s3：調整ph：取與標準管同口徑的試管三支，於第一、三管各加入欲測定ph的的培養基5ml，並於第一管中加入0.2g/l的酚紅0.25ml作為測定管，充分混勻，在第二管加入蒸餾水5ml，標準管為ph標準比色管，然後精確緩慢的將矯正溶液向測定管進行矯正，直至顏色通過ph試紙測定後與標準管相同為止，顏色呈淡紫色，其ph值調節為7，每加一滴後都需要充分混勻，比色後再加第二滴準確記錄加入的量；

s4：過濾澄清：將步驟s2中的培養基導入到容器內，以高壓105kpa蒸汽融化10分鐘後，靜置高壓鍋內過夜12小時，次日將培養基傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培養基；

s5：分裝：向步驟s4中清晰的培養基加熱融化，溫度為125℃，時間為1小時，然後靜置培養基30分鐘，使得培養基內溫度冷至50℃左右，以無菌手續倒入滅菌平皿內，平皿倒入的培養基約14mol/l，輕搖平皿底，使培養基平鋪於平皿底部，待凝固後備用；

s6：滅菌：將步驟s5中凝固的培養基以後高壓蒸汽進行滅菌，溫度為115℃，時間為22.5min；

s7：檢定和保存：培養基製成後須經檢定方可使用，檢定時將培養基放37℃溫箱內培養24小時，制好的培養基放在5℃冰箱內備用。

實施例三

一種公共衛生場所空氣採樣中和培養基，該種公共衛生場所空氣採樣中和培養基的製備方法步驟如下：

s1：選取材料：選取卵磷脂30g，吐溫-8060g，組氨酸10g，硫代硫酸鈉10g，巰基乙酸鈉2g，葡萄糖40g，胰蛋白腖30g，瓊脂40-50g，氯化鈉17g；

s2：過濾、溶解：將步驟s1選取的材料依次通入到活性炭過濾器內進行空氣前過濾處理，然後將卵磷脂、吐溫-80、組氨酸、硫代硫酸鈉和巰基乙酸鈉添加在加熱裝置中加熱攪拌，攪拌時間35分鐘，溫度設置在80℃，溶解後形成溶液一，然後將葡萄糖、胰蛋白腖、瓊脂和氯化鈉添入到加熱裝置內，攪拌混合20分鐘，溶解後形成溶液二，然後將溶液一內溶解的混合溶液加入到溶液二，攪拌混合16分鐘，靜置冷卻20分鐘最後將得到的混合料中加入120毫升的水充分攪拌20分鐘，至各成分全部與水溶解均勻，溶解後形成培養基；

s3：調整ph：取與標準管同口徑的試管三支，於第一、三管各加入欲測定ph的的培養基5ml，並於第一管中加入0.2g/l的酚紅0.25ml作為測定管，充分混勻，在第二管加入蒸餾水5ml，標準管為ph標準比色管，然後精確緩慢的將矯正溶液向測定管進行矯正，直至顏色通過ph試紙測定後與標準管相同為止，顏色呈淡紫色，其ph值調節為7，每加一滴後都需要充分混勻，比色後再加第二滴準確記錄加入的量；

s4：過濾澄清：將步驟s2中的培養基導入到容器內，以高壓110kpa蒸汽融化10分鐘後，靜置高壓鍋內過夜12小時，次日將培養基傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培養基；

s5：分裝：向步驟s4中清晰的培養基加熱融化，溫度為130℃，時間為1小時，然後靜置培養基30分鐘，使得培養基內溫度冷至50℃左右，以無菌手續倒入滅菌平皿內，平皿倒入的培養基約15mol/l，輕搖平皿底，使培養基平鋪於平皿底部，待凝固後備用；

s6：滅菌：將步驟s5中凝固的培養基以後高壓蒸汽進行滅菌，溫度為115℃，時間為30min；

s7：檢定和保存：培養基製成後須經檢定方可使用，檢定時將培養基放37℃溫箱內培養24小時，制好的培養基放在6℃冰箱內備用。

由圖2可知一般的培養基對消毒劑中和不充分，抑制細菌的生長，導致細菌濃度不能夠增加，由圖3可知，根據實施例一、二、三的實驗結果總結得出：最佳實施方案為實施例二，實施例二中的中和培養基相對實施例一和實施例二的中和培養基其微生物的回收率明顯較高，而實施例一和三種細菌生長的速度還是有所抑制，增長速度較慢，所以該中和劑可消除空氣消毒劑對檢測結果的幹擾，更好的殘留公共衛生場所空氣消毒劑中的微生物數量，提高殘留公共衛生場所空氣消毒劑中的微生物檢測的準確性。。

儘管已經示出和描述了本發明的實施例，對於本領域的普通技術人員而言，可以理解在不脫離本發明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發明的範圍由所附權利要求及其等同物限定。