一種從甜杏仁中提取甜杏仁油及其分離蛋白的方法

2023-07-27 04:12:11 3

專利名稱：一種從甜杏仁中提取甜杏仁油及其分離蛋白的方法
技術領域：
本發明涉及油脂及蛋白提取技術領域。具體的說，本發明涉及甜杏仁中提取甜杏 仁油及其蛋白的技術領域。
背景技術：
杏仁為薔薇科落葉喬木植物杏或山杏等果實的種仁，按果味差異可分為甜杏仁和 苦杏仁兩種，我國杏仁資源豐富，主要產於新疆、甘肅、陝西、山西等地。杏仁除了食用外， 還有更為廣闊的開發前景，含豐富的蛋白質、脂肪、糖類、胡蘿蔔素、B族維生素、維生素C、 維生素P以及鈣、磷、鐵、硒等營養成分，其中蛋白質含量為24%-27%，杏仁油脂含量高達 50%左右，杏仁營養豐富，每IOOg杏仁中蛋白質含量為24g，其蛋白質富含各種胺基酸。甜 杏仁作為我國特有的資源，出口創匯率居全國土特產品之首。甜杏仁多用於食品，研究表 明，甜杏仁具有良好的健康功效，它不僅能增進心臟健康，降低膽固醇含量，不增加體內脂 肪，而且是一種很好的藥用兼植物蛋白源食品，杏仁其營養價值豐富，中含有50%-60%的 油脂，含蛋白質25%、粗脂肪50%左右。是一種木本油料資源。其中甜杏仁中含有人體必 需的8種胺基酸，是一種優質的植物蛋白資源，甜杏仁油中含 有大量不飽和脂肪酸，以油 酸和亞油酸為主，佔脂肪酸總量的90%以上，是一種很好的保健食用油。甜杏仁中主要含 有豐富的蛋白質和脂肪，其中杏仁中的杏仁油含有對人體有益的不飽和脂肪酸的含量可達 95%以上，還包括人體所需的必需脂肪酸，對降低血脂和血清膽固醇的含量，軟化血管，擴 張動脈以及高血壓、冠心病等心血管疾病的預防和治療有較好的作用，是新一代保健食品 和化妝品的重要原料。杏仁蛋白是一種優質的植物蛋白，含人體需要的18種胺基酸，可作 為一種蛋白質營養強化劑和添加劑，緩解蛋白質資源的缺乏。另外，杏仁油在-io°c保持澄 清，_20°C下不凝結，可作精密儀器的潤滑油、化妝品的基油、醫藥用油、高級塗料等。目前， 關於杏仁分離蛋白提取的報導還比較少，但是對於植物分離蛋白，尤其是大豆分離蛋白的 研究報導國內外較多，有關甜杏仁基礎性研究以及深加工的開發利用還未受到重視，目前 在市場上的加工產品較為單一，還沒有深加工的產品。因此，對我國杏仁資源進行深加工研 究和開發，將我國豐富的杏仁資源優勢轉化為產業優勢，具有重要意義。目前，大多數生產廠家對杏仁的利用僅在杏仁油提取方面，而提取方法都是採取 傳統的溶劑法和壓榨法，提取技術也較為落後；尤其是提油後的餅粕中含有的優質蛋白質， 長期以來一直被用作飼料、肥料或被當成殘餘物廢棄，這不僅造成了營養資源的極大浪費， 也使得杏仁未能得到綜合利用。因此，尋求一種既能夠得到高品質的杏仁油的同時，又能得 到高品質蛋白的新技術、新方法，使杏仁能夠被充分利用，為企業增效、創收，是目前急需解 決的問題。目前國內已應用超臨界CO2萃取的方法得到甜杏仁油，但其蛋白質仍未得到有效 利用。由於超臨界CO2萃取的萃取壓力高，萃取效率低，並需要較長的循環次數，增加了成 本，從而限制了其大規模的工業應用。國外水酶法已應用於油菜籽、大豆、玉米胚芽、葵花 籽、花生、椰子、橄欖、鱷梨、棉籽、棕櫚等物質的提油中，國內已有對大豆、玉米胚芽、油菜籽和花生等油料進行水酶法提油的報導。但是水酶法提油易引起乳化問題，成為制約本領域發展的技術瓶頸。

發明內容
由於溶劑提取法存在安全性和環保性的問題，而壓榨法所得的甜杏仁原油品質差 且所得蛋白變性，不能夠被利用，為了使提取方法具有安全性和環保性，且保證甜杏仁油及 其蛋白能夠被綜合利用，本發明選擇了水解酶法對甜杏仁油及其蛋白進行提取。目前，國內 已有對扁桃、大豆、玉米胚芽、油菜籽和花生等油料進行水酶法提油的報導，但並未有採用 纖維素酶和蛋白酶這兩種複合酶對杏仁中的甜杏仁進行水解酶法的相關報導。本發明的目的在於提供了一種從甜杏仁中提取甜杏仁油及其分離蛋白的方法。本發明在現有技術基礎上，選擇和優化最佳生產工藝參數和生產技術，得到高品 質的杏仁油和蛋白，解決了如何綜合利用杏仁的問題。本發明提供了一種從甜杏仁中提取甜杏仁油及其分離蛋白的確證和定量方法。本發明的技術方案通過對酶品種的篩選，選擇一定配比的纖維素酶和蛋白酶這 兩種複合酶，並採用單因素和正交試驗優化，選擇出適宜的固液比、酶添加量、酶解PH值、 水解溫度和水解時間，最終得到提取率為78. 6%的甜杏仁油和含量為91. 6%的分離蛋白。本發明具體提供了一種從甜杏仁中提取甜杏仁油及其蛋白的製備方法通過將甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，置於酶解罐中，按W/V計，固液比1 (3 5) 加入去離子水，迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫，用NaOH 調節PH值7-9，按比例加入佔甜杏仁質量-3%的蛋白酶和纖維素酶的複合體，在35 55°C進行酶解反應1 3小時後，並迅速升溫到85 100°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅 速冷卻至室溫，將已經失活的酶解液在3000 5000r/min下離心5 15min，得到的上層清 油即為甜杏仁油，再通過脫酸、脫臭，脫蠟工序對甜杏仁油進行精煉，得到精煉甜杏仁油。再 取離心後的上清液，調節PH值至4. 5，再在3000 5000r/min下離心5 15min，取沉澱層 水洗1 3遍，將收集的沉澱進行冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉。本發明採用的水酶法提油是一種新穎的提油技術，其工藝是在機械破碎的基礎 上，採用能降解植物油料細胞壁的酶，或對脂多糖、脂蛋白等複合體有降解作用的酶作用於 油料，使其中的油脂釋放出來，最終利用油水比重的不同而將油和非油成分分離。本發明中，加入的複合酶為纖維素酶和蛋白酶的混合體，其中蛋白酶優選中性蛋 白酶或鹼性蛋白酶，纖維素酶和蛋白酶都可以通過市場任意獲得，酶的活力需在萬u/g以 上，酶的總添加量為1%，其中添加纖維素酶和蛋白酶比例按照W/W為1 1或2 3。本發明中具體在測定甜杏仁原料成分以及實現本發明具體方案中涉及到測定 都採用本領域熟知的技術水分測定方法依照GB/T5009. 3-2003，脂肪測定方法依照GB/ T5009. 6-2003採用索氏提取法；蛋白質測定方法依照GB/T5009. 3-2003採用2300型全自 動凱式定氮系統；灰分測定方法依照GB/T5009. 4-2003採用幹法灰化法；粗纖維含量的測 定採用重量法；分離蛋白的得率採用2300型全自動凱式定氮系統。通過實施本發明具體的發明內容，可以達到以下效果1、本發明通過採用酶解法同時提取甜杏仁油和蛋白，增加其附加值，使其變廢為 寶同時因本發明利用蛋白酶可將大分子蛋白質水解成小分子肽，增加游離氨基的含量，提高了蛋白得率，並對其乳化現象起到改善，從而增加游離油得率；因此本發明的甜杏仁油的 可達78.6%，提取的分離蛋白含量可達91.6%，脂肪為6.2%，根據大豆蛋白的行業標準規 定一級大豆蛋白的純度需達到80%以上(幹基)，所以本發明所製備的杏仁蛋白明顯高於 一級蛋白的標準。2、本發明所得到的甜杏仁油品質明顯優於溶劑法和壓榨法所得的油品質(理化 性質)，且精煉過程僅需經過3S程序(脫酸、脫臭、脫蠟)即可達到國家一級標準的食用油， 比傳統的提取方法後的精煉程序少了脫膠和脫色這兩步。3、此外，目前已有很多研究證明了蛋白水解產物有多種生物活性(如抗氧化，抗 腫瘤)，因此本發明對甜杏仁利用水酶法提油技術可以同時得到品質較好的油及杏仁水解 蛋白，提高了杏仁產品的附加值。


圖1所示為水酶法提取甜杏仁油及其蛋白的工藝流程圖。圖2所示為單一酶製劑對甜杏仁提取率的影響，圖中，1.空白對照；2.果膠酶； 3.纖維素酶4.木瓜蛋白酶；5.中性蛋白酶；6.鹼性蛋白酶。圖3所示為複合酶對提油率的影響，圖中，1.纖維素酶+中性蛋白酶(1 1)； 2.纖維素酶+鹼性蛋白酶(1 1) ；3.纖維素酶+中性蛋白酶(2 3) ；4.纖維素酶+鹼 性蛋白酶(2 3) ；5.果膠酶+纖維素酶+中性蛋白酶(1:1:1) ；6.果膠酶+纖維素酶 +中性蛋白酶(1:2:1)。圖4所示為酶添加量對提取率的影響。圖5所示為料液比對提取率的影響。圖6所示為酶解PH值對提取率的影響。圖7所示為酶解時間對提取率的影響。圖8所示為酶解溫度對提取率的影響。
具體實施例方式下面，舉實施例說明本發明，但是，本發明並不限於下述的實施例。另外，在下述的 說明中，如無特別說明，％皆指m/m質量百分比。本發明中設備和材料有AL204-1C電子分析天平(梅特勒託利多儀器有限公司)；數顯恆溫水浴鍋(上海 博迅實業有限公司)；TD5A-WS臺式低速離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)；320型精 密酸度計(梅特勒託利多儀器有限公司)；FW100型高速萬能粉碎機(北京市永光明醫療儀 器廠)；85-2A控溫磁力攪拌器(常州市國立試驗設備研究所)；DHG — 9070型電熱恆溫鼓 風乾燥箱(上海_恆科技有限公司)；冷凍乾燥設備。新疆甜杏仁市購；複合酶中纖維素酶與蛋白酶通過市購，本發明中採用的中性 蛋白酶或鹼性蛋白酶(生產廠家南寧龐博生物工程有限公司)本發明中涉及到的主要試 劑氫氧化鈉、鹽酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、正己烷均為分析純，本領域常用試劑。本發明中選用的所有試劑和儀器 都為本領域熟知選用的，但不限制本發明的實 施，其他本領域熟知的一些試劑和設備都可適用於本發明以下實施方式的實施。
實施例一甜杏仁油及其蛋白的製備工藝參見附圖1，從甜杏仁中提取甜杏仁油及其蛋白的製備步驟如下
(1)將IKg乾燥、粉碎後的甜杏仁，置於酶解罐中。(2)向甜杏仁中加入離子水，固液比按甜杏仁質量去離子水體積比為1 5，迅 速升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用NaOH調至pH值為 7. 0，進行酶解溫度35°C，在此條件下，按照複合酶(纖維素酶+中性蛋白酶)甜杏仁比為 1 100的質量比加入酶，複合酶中纖維素酶中性蛋白酶質量比為1 1，酶解攪拌1小 時，再迅速升溫到85 100°C，維持lOmin，進行滅酶處理。於3000r/min離心lOmin，取上 層清油。(3)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)X 100 %，根據計算式測定甜杏仁油的提取率為60. 2 %。(4)將所得的甜杏仁油進行鹼煉、脫臭、脫蠟工藝後，既得精製甜杏仁油。(5)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於3000r/min離心15min， 取沉澱層水洗1遍。收集沉澱。(6)將收集後的沉澱經冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉。(7)根據GB/T5009. 5-2003將所得的杏仁分離蛋白採用全自動凱式定氮系統測 定、進行讀數，杏仁分離蛋白為88. 3% ；根據GB/T5009. 6-2003採用索氏提取裝置進行索氏 抽提對蛋白中脂肪進行測定，通過計算出所得蛋白中油的質量與實際油中的質量比即可得 結果脂肪含量為8.3%。實施例二 甜杏仁油及其蛋白的製備工藝參見附圖1，從甜杏仁中提取甜杏仁油及其蛋白的製備步驟如下(1)將IKg甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，置於酶解罐中。(2)向甜杏仁中加入固液比(甜杏仁質量去離子水體積)1 4的去離子水， 迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用NaOH調至pH值為 8.5，進行酶解溫度50°C，在此條件下，按照(纖維素酶+鹼性蛋白酶)甜杏仁為1 100 的質量比加入酶，酶解攪拌2小時，(纖維素酶鹼性蛋白酶=2 3)再迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，進行滅酶處理。於4000r/min離心lOmin，取上層清油。(3)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)X 100 %，根據計算式測定甜杏仁油的提取率為68. 5 %。(4)將所得的甜杏仁油進行鹼煉、脫臭、脫蠟工藝後，既得精製甜杏仁油。(5)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於4000r/min離心lOmin， 取沉澱層水洗3遍。收集沉澱。(6)將收集後的沉澱經冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉。(7)根據GB/T5009. 5-2003將所得的杏仁分離蛋白採用全自動凱式定氮系統測 定、進行讀數，所得杏仁蛋白含量為78. 8%，；根據GB/T5009. 6-2003採用索氏提取裝置進 行索氏抽提對蛋白中脂肪進行測定，通過計算出所得蛋白中殘油的質量與實際油中的質量 比即可得結果脂肪含量為9. 2%。實施例三甜杏仁油及其蛋白的製備工藝參見附圖1，從甜杏仁中提取甜杏仁油及其蛋白的製備步驟如下
(1)將IKg甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，置於酶解罐中。(2)向甜杏仁中加入固液比(甜杏仁質量去離子水體積)1 3去離子水，迅速 升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用NaOH調至pH值為9. 0，進 行酶解溫度55°C，在此條件下，按照(纖維素酶+中性蛋白酶)甜杏仁為1 100的質量 比加入酶(纖維素酶中性蛋白酶=2 3)，酶解攪拌3小時，再迅速升溫到85 100°C， 維持lOmin，進行滅酶處理。於5000r/min離心5min，取上層清油。(3)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)XlOO %，根據計算式測定甜杏仁油的提取率為77. 9%。(4)將所得的甜杏仁油進行鹼煉、脫臭、脫蠟工藝後，既得精製甜杏仁油。
(5)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於5000r/min離心5min，取 沉澱層水洗2遍。收集沉澱。(6)將收集後的沉澱經冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉。(7)根據GB/T5009. 5-2003將所得的杏仁分離蛋白採用全自動凱式定氮系統測 定、進行讀數，所得杏仁蛋白含量為91. 6%，；根據GB/T5009. 6-2003採用索氏提取裝置進 行索氏抽提對蛋白中脂肪進行測定，通過計算出所得蛋白中油的質量與實際油中的質量 比即可得結果脂肪含量為6. 2%,由此可說明所製備的油脂和蛋白得率較高，殘油含量較 低。實施例四酶製劑的選擇添加量的確定(1)分別取12份500g的甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，分批置於酶解罐中。(2)向每份甜杏仁中加入固液比(甜杏仁質量去離子水體積)1 (3-5)的去離 子水，迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用NaOH調至pH 值為7-9，在35-55°C下進行酶解，在此條件下，參見附圖2和3，按照酶甜杏仁為1 100 的質量比，在每份中分別加入果膠酶、纖維素酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、鹼性蛋白酶，纖 維素酶+中性蛋白酶(1 1)，纖維素酶+鹼性蛋白酶(1 1)，纖維素酶+中性蛋白酶 (2 3)，纖維素酶+鹼性蛋白酶(2 3)，果膠酶+纖維素酶+中性蛋白酶(1 1 1)， 果膠酶+纖維素酶+中性蛋白酶(1 2 1)和不加酶，分別酶解攪拌3小時，再迅速升溫 到85 90°C，維持lOmin，進行滅酶處理。於3500r/min離心5min，取上層清油。以上比例 均為w/wo(3)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)X100%，根據計算式測定各甜杏仁油的提取率。(4)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於3500r/min離心lOmin， 取沉澱層水洗2遍，將收集收集沉澱冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉，並測定其蛋白得率。參見附圖2、3可以看出，酶製劑選擇纖維素酶與中性蛋白酶2 3進行復配，所得 的甜杏仁油及其蛋白的得率最高，分別可達72. 4%和91. 1%。實施例五酶添加量的確定(1)分別取10份500g的甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，分批置於酶解罐中。(2)向每份甜杏仁中分別加入固液比(甜杏仁質量去離子水體積)1 (3-5)的 去離子水，迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用NaOH調 至PH值為7-9，在35-55°C下進行酶解，在此條件下，按照纖維素酶中性蛋白酶2 3比例分別加入複合酶甜杏仁為 1 200、1 100,3 200,1 50,1 40,3 100,7 200、
1 25的質量比，分別酶解攪拌3小時，再迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，進行滅酶處 理。於3500r/min離心5min，取上層清油。(3)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)X100%，根據計算式測定各甜杏仁油的提取率。(4)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於3500r/min離心lOmin， 取沉澱層水洗2遍，將收集收集沉澱冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉，並測定其蛋白得率。在複合酶配比為2 3，料液比為1 3，酶解pH值在7，酶解時間在3h，酶解溫度 在50°C的條件下，進行酶添加量的單因素實驗，參見附圖4可以看出，酶添加量在的條 件下，油脂與蛋白的率分別可達68. 9%和88. 4%。 實施例六料液比的選擇(1)分別取8份500g的甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，分批置於酶解罐中。(2)向每份甜杏仁中分別加入固液比(甜杏仁質量去離子水體積)1 1、1 2、 1 3、1 4、1 5、1 6、1 7、1 8的去離子水，分別迅速升溫到85 90°C，維持 IOmin,經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用NaOH調至pH值為7_9，在35_55°C下進行酶解， 在此條件下，按照纖維素酶中性蛋白酶2 3比例加入複合酶甜杏仁為1 100的質 量比，酶解攪拌3小時，再迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，進行滅酶處理。於3500r/min 離心5min，取上層清油。(3)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)X100%，根據計算式測定各甜杏仁油的提取率。(4)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於3500r/min離心lOmin， 取沉澱層水洗2遍，將收集收集沉澱冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉，並測定其蛋白得率。在複合酶配比為2 3，酶添加量為1%，酶解pH值在7，酶解時間在3h，酶解溫度 在50°C的條件下，進行料液比的單因素實驗，參見附圖5可以看出，料液比在1 4的條件 下，油脂與蛋白的率分別可達69. 01%和90. 4%。實施例七酶解pH值的確定(1)分別取9份500g的甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，分批置於酶解罐中。(2)向每份甜杏仁中分別加入固液比(甜杏仁質量去離子水體積)1 (3-5)的 去離子水，迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用NaOH將每 份的PH值分別調至為5,5. 5、6、6· 5、7、7· 5、8、8. 5、9，並分別在35_55°C下進行酶解，按照纖 維素酶中性蛋白酶23比例加入複合酶甜杏仁為按照纖維素酶中性蛋白酶23 比例分別加入複合酶甜杏仁為1 200、1 100,3 200,1 100的質量比，酶解攪拌 3小時，再迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，進行滅酶處理。於3500r/min離心5min，取 上層清油。(3)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)X100%，根據計算式測定各甜杏仁油的提取率。(4)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於3500r/min離心lOmin， 取沉澱層水洗2遍，將收集收集沉澱冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉，並測定其蛋白得率。在複合酶配比為2 3，酶添加量為1%，料液比為1 4，酶解時間在3h，酶解溫度在50°C的條件下，進行酶解pH值的單因素實驗，參見附圖6可以看出，酶解pH在7.5的 條件下，油脂與蛋白的率分別可達72. 5%和90. 8%。實施例八酶解時間的確定(1)分別取7份500g的甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，分批置於酶解罐中。(2)向每份甜杏仁中分別加入固液比(甜杏仁質量去離子水體積)1 (3-5)的 去離子水，迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用NaOH將 每份的PH值分別調至為7-9，在35-55°C下進行酶解，按照纖維素酶中性蛋白酶2 3比 例加入複合酶甜杏仁為1 100的質量比，分別酶解攪拌111、1.511、211、2.511、311、3.511、411， 再迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，進行滅酶處理。於3500r/min離心5min，取上層清 油。(3)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)XlOO%，根據計算式測定各甜杏仁油的提取率。(4)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於3500r/min離心lOmin， 取沉澱層水洗2遍，將收集收集沉澱冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉，並測定其蛋白得率。在複合酶配比為2 3，酶添加量為1%，料液比為1 4，酶解pH值在7. 5，酶解 時間在3h，酶解溫度在50°C的條件下，進行酶解時間的單因素實驗，參見附圖7可以看出， 酶解時間在3h的條件下，油脂與蛋白的率分別為72. 08%和90. 8%。實施例九酶解溫度的確定(1)分別取7份500g的甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，分批置於酶解罐中。(2)向每份甜杏仁中分別加入固液比(甜杏仁質量去離子水體積)1 (3-5)的 去離子水，迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用NaOH將 每份的PH值分別調至為7-9，分別選擇在30 V、35°C、40 V、45°C、50 V、55°C、60 V下進行酶 解，按照纖維素酶中性蛋白酶2 3比例加入複合酶甜杏仁為1 100的質量比，分 別酶解攪拌3h，再迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，進行滅酶處理。於3500r/min離心 5min，取上層清油。(3)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)X100%，根據計算式測定各甜杏仁油的提取率。(4)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於3500r/min離心lOmin， 取沉澱層水洗2遍，將收集收集沉澱冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉，並測定其蛋白得率。在複合酶配比為2 3，酶添加量1%，料液比為1 4，酶解pH值在7. 5，酶解時 間3h的條件下，進行酶解溫度的單因素實驗，參見附圖8可以看出，酶解溫度在4°C條件下， 油脂與蛋白的率分別可達72. 38%和91. 4%。實施例十水解酶影響因子的確定(1)以酶添加量、料液比、酶解時間和酶解溫度作為4個主要影響因素，進行4因素 3水平的9組正交優化試驗。(2)分別取9份500g的甜杏仁乾燥後用粉碎機粉碎，分批置於酶解罐中。(3)向每份甜杏仁中分別加入固液比(甜杏仁質量去離子水體積)1 3、1 4、 1 5的去離子水，迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，經滅酶處理後迅速冷卻至室溫。用 NaOH將每份的pH值分別調至為7. 5，分別在40°C、45°C、50°C下進行酶解，按照纖維素酶中性蛋白酶2 3比例加入複合酶甜杏仁為1 200、1 100,3 200的質量比，分別 酶解攪拌2. 5h、3h、3. 5h，再迅速升溫到85 90°C，維持lOmin，進行滅酶處理。於3500r/ min離心5min，取上層清油。(4)甜杏仁油提取率的測定提取率=(所得油脂質量/所用原料中的油脂重 量)X100%，根據計算式測定各甜杏仁油的提取率。(5)再取離心後的上清液，用HCL將上清液調至pH4. 5，於3500r/min離心lOmin， 取沉澱層水洗2遍，將收集收集沉澱冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉，並測定其蛋白得率。 甜杏仁及其分離蛋白的正交試驗結果
由上表可以得出，通過正交試驗，當酶添加量為1%，料液比為1 4，酶解時間為 3h，酶解溫度為45°C時，油脂和分離蛋白得率可達78. 6%和91. 6%。實施例i^一現有技術採用過水酶法提取杏中的油脂及其水解蛋白，選擇植物水解酶和果膠酶 復配酶解後，再與Alasase鹼性蛋白酶復配，蛋白得率分別為72. 58%,82. 35%，但此法使 用的酶種類多，酶解時間較長，溫度較高，並且需要進行兩次酶解和鹼提，步驟較多，這些都 對蛋白品質造成了影響，同時也大大提高了生產成本且不利於投入工業化生產。本發明選擇纖維素酶和蛋白酶(2 3)作為複合酶，在酶添加量為1%，料液比為 1 4，酶解pH為7.5，酶解時間為3h，酶解溫度為45°C的條件下，油脂和蛋白得率分別可達
78. 6%和91. 6%，其所得的油脂提取率與蛋白得率都優於現有技術報導；而且本發明步驟 簡短，可在較短的酶解時間和較低的酶解溫度下，使用較少的酶品種且僅需進行一次酶解， 更利於進行工業化生產。
權利要求
一種從甜杏仁中提取甜杏仁油及其蛋白的方法，其特徵在於，將甜杏仁乾燥、粉碎，置於酶解罐中，按W/V計，固液比1∶(3～5)加入去離子水，迅速升溫到85～90℃，維持10min滅酶、冷卻至室溫，用NaOH調節pH值7-9，按比例加入佔甜杏仁質量1％-3％的蛋白酶和纖維素酶的複合體，在35～55℃進行酶解反應1～3小時後，並迅速升溫到85～100℃，維持10min滅酶、冷卻至室溫，將酶解液在3000～5000r/min下離心5～15min，得到的上層清油即為甜杏仁油；再取離心後的上清液，調節pH值至4.5，在3000～5000r/min下離心5～15min，取沉澱層水洗1～3遍，將收集的沉澱進行冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉。
2.如權利要求1所述的從甜杏仁中提取甜杏仁油及其蛋白的方法，其特徵在於，所述 的蛋白酶和纖維素酶的複合體中，按W/W計，添加纖維素酶和蛋白酶比例為1 1。
3.如權利要求1所述的從甜杏仁中提取甜杏仁油及其蛋白的方法，其特徵在於，所述 的蛋白酶和纖維素酶的複合體中，按W/W計，添加纖維素酶和蛋白酶比例為2 3。
全文摘要
本發明公開了一種從甜杏仁中提取甜杏仁油及其蛋白的方法，通過將甜杏仁乾燥、粉碎，置於酶解罐中，按W/V計，固液比1∶(3～5)加入去離子水，在85～90℃維持10min後滅酶、冷卻，調pH值7-9，加入佔甜杏仁質量1％-3％的蛋白酶和纖維素酶的複合體，在35～55℃進行酶解反應1～3小時後升溫到85～100℃，維持10min後滅酶、冷卻，將已經失活的酶解液離心得到的上層清油即為甜杏仁油；再取離心後的上清液，調節pH值至4.5，再經離心取沉澱層水洗，將收集的沉澱進行冷凍乾燥製成杏仁蛋白粉。採用本發明甜杏仁油的可達78.6％，提取的分離蛋白含量可達91.6％，脂肪為6.2％，具有廣泛的應用價值。
文檔編號A23D9/02GK101856050SQ20101015664
公開日2010年10月13日 申請日期2010年4月27日 優先權日2010年4月27日
發明者周建中, 方華, 楊海燕, 王英, 王青, 逄煥明, 郭金喜, 陳士利, 馬燕, 高蕾 申請人:新疆農業大學