用於測定藍細菌毒素的存在或不存在的方法和試劑盒的製作方法

2023-07-16 02:49:26 2

專利名稱：用於測定藍細菌毒素的存在或不存在的方法和試劑盒的製作方法
用於測定藍細菌毒素的存在或不存在的方法和試劑盒與相關申請的交叉參考
本申請要求於2008年10月31日提交的美國臨時申請號61/110，021的利益且是其的繼續申請。該申請的內容特別地整體引入本文作為參考。關於聯邦贊助的研究或開發的聲明本申請的發明不由聯邦或州基金或撥款進行。聯合研究協議的參與者名稱本申請的發明不在聯合研究協議下進行。序列表的提及
本申請不具有任何核酸、肽或蛋白質序列。
背景技術：
本發明的實施方案涉及用於檢測由藍細菌產生的毒素的試劑盒和方法。藍細菌通常在地面淡水中發現。毒性藍細菌水華是難對付的，在那方面此種水華可能引起毒素在供水中釋放。主要藍細菌毒素包括環肽、生物鹼和脂多糖。例如但並非限制，構成藍細菌毒素的主要環肽是結瘤蛋白、微囊藻素-LR、微囊藻素RR和微囊藻素YR。關於結瘤蛋白的式在下文闡述
式1
關於微囊藻素LR的式在下文闡述式權利要求
1.一種測定樣品中藍細菌毒素的存在或不存在的方法，其包括步驟在固相提取設備上製備潛在包括藍細菌毒素的水樣品，以形成保留或濃縮的毒素樣PPR，使所述保留或濃縮的毒素樣品在流動相中洗脫或重構，以形成樣品提取物； 將所述樣品提取物置於在6，000-15，000磅/英寸2的壓力下用具有1-3微米平均粒度的顆粒裝填的層析柱頭上，以形成潛在包括藍細菌毒素的保留樣品，如果所述樣品提取物包含此種藍細菌毒素的話；在有機溶劑的梯度下從所述層析柱中洗脫來自潛在包括藍細菌毒素的所述保留樣品的化合物，以形成包括藍細菌毒素的至少一種洗脫的化合物，如果所述樣品提取物包含此種藍細菌毒素的話；和將潛在包括藍細菌毒素的所述洗脫的化合物置於質譜儀中以形成質譜，並且由所述質譜測定所述藍細菌毒素的存在或不存在。
2.權利要求1的方法，其中所述質譜儀形成藍細菌毒素的一種或多種片段，並且所述片段的所述光譜用於鑑定且測定所述藍細菌毒素的存在或不存在。
3.權利要求3的方法，其中將所述樣品提取物置於層析柱頭上，洗脫且將所述藍細菌毒素置於質譜儀中的所述步驟在小於15分鐘的時間段內執行。
4.權利要求1的方法，其中所述粒子選自橋接乙基雜化物和高強度矽石。
5.權利要求1的方法，其中所述粒子具有小於2微米的平均直徑。
6.權利要求1的方法，其中所述樣品提取物通過在弱陰離子交換樹脂上提取生物鹼藍細菌毒素形成。
7.權利要求1的方法，其中所述樣品提取物通過在弱陽離子交換樹脂上提取環肽藍細菌毒素形成。
8.權利要求1的方法，其中所述提取藥液筒具有包括聚合物二乙烯基苯-N-乙烯吡咯烷酮共聚物的粒子。
9.一種用於就藍細菌毒素的存在或不存在執行樣品分析的試劑盒，其包括 用於校準且促進通過質譜法鑑定一種或多種藍細菌毒素的標準，用於形成樣品提取物的樣品製備設備，柱，其用於使所述樣品提取物的化合物分離和在應用梯度後釋放所述藍細菌毒素，如果存在的話，從而使得所述藍細菌毒素釋放至質譜儀用於鑑定。
10.權利要求9的試劑盒，其中所述柱具有1-3微米的粒度。
11.權利要求10的試劑盒，其中所述粒子具有選自橋接乙基雜化物和高強度矽石的層析表面。
12.權利要求11的試劑盒，其中所述柱具有6，000-15，000磅/英寸2的操作壓力。
全文摘要
本發明的實施方案涉及用於檢測由藍細菌產生的毒素的試劑盒和方法。方法和試劑盒的特徵在於用弱陽離子和陰離子交換樹脂的樣品製備步驟和在4,000-15,000磅/英寸2下操作的小粒子分析柱。
文檔編號C08H1/00GK102264803SQ200980152962
公開日2011年11月30日 申請日期2009年10月28日 優先權日2008年10月31日
發明者A. 奧爾勒 S. 申請人:沃特世科技公司