從連香樹植物中提取的活性成分及其應用的製作方法

2023-07-28 13:56:36

專利名稱：：從連香樹植物中提取的活性成分及其應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種從連香樹植物中提取的活性成分及其應用，屬生物醫藥
技術領域：
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背景技術：
：蠟樣芽孢桿菌(fec/W^ce化^)屬於芽孢桿菌科，芽孢桿菌屬，是需氧性、有運動性、能產生芽孢的革蘭氏陽性菌。該菌在自然界分布極廣，存在於土壤、水、塵埃及澱粉製品和乳製品等食品中。其生命過程中能以孢子體形式存在，具有耐高溫、耐鹽鹼、耐擠壓、詞料加工對其損傷小等特性。研究表明，該菌能產生多種毒性物質，如腸毒素、溶血毒素等，由其引起的食物中毒涉及的食品種類很多，發生食物中毒潛在危險性大，這種由廣泛存在的細菌引起的人的疾病受到關注。迄今己發現的抗生素主要來源於植物和微生物，其中許多已廣泛用於治療各種微生物感染性疾病。近年來由於病原菌的耐藥性，原有的醫用抗菌素在減退，因此不斷開發新的抗生素受到重視。連香樹科(Cercidiphyllaceae)植物是第三紀的孑遺植物，分布於中國和円本。連香樹科植物木材紋理直，結構細，可供建築、製作家具等用；樹皮及葉含鞣質，可提制栲膠；新葉帶紫色，秋季葉變黃色或紅色，可作園林觀賞樹種。連香樹(a^cW*/y;//Mw乂印om'c"wSieb.etZucc.)屬連香樹科植物，原產地中國，主要作為綠化觀賞樹種。經文獻檢索，未見有關連香樹具有抗蠟樣芽孢桿菌活性的公開報導。
發明內容本發明的目的是從植物產生的代謝產物中，篩選出對人體病原細菌蠟樣芽孢桿菌(^j"7^scerei/s)具有強烈抑制作用的活性成分，作為製備抑制人體病原細菌蠟樣芽孢桿菌製劑的應用。本發明是這樣實現的1、活性成分的製備本發明的活性成分經如下步驟得到a.將連香樹的枝或葉用水洗乾淨後放入烘箱，在6(TC溫度下烘烤12小時；b.將烘烤後的連香樹枝或葉切碎，分別放入三角瓶內，用100%甲醇浸泡，在45。C的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次浸泡提取的時間為4小時，第三次浸泡提取的時間為8小時；c.將三次浸提的提取液合併後，在6(TC溫度下濃縮後得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，製備成濃度為10mg/ml的活性成分；或在8CTC水浴加熱1小時後，用甲醇溶解，製備成濃度為10mg/ml的活性成分。2、製備試驗用的病原細菌蠟樣芽孢桿菌將蠟樣芽孢桿菌接種於LB液體培養基(牛肉膏3克，蛋白腖10克，氯化鈉5克，自來水1000ml，pH7.0-7.2)中，於37。C，180rpm培養24小時備用。做活性時將LB培養基(牛肉膏3克，蛋白腖10克，氯化鈉5克，瓊脂18克，自來水1000ml，pH7.0-7.2)倒入9cm的平板中，待培養基凝固後，取200Pl蠟樣芽孢桿菌菌液用塗布棒均勻塗布在培養基表面製成病原菌平板。3、試驗方法紙片擴散法在無菌操作臺上用微量注射器將樣品注入紙片(做四個劑量，1.5mg/disc,lmg/disc，0.5mg/disc，0.lmg/disc)，用電吹風將紙片吹乾待溶劑揮發後，置於塗布過蠟樣芽孢桿菌的LB平板上，37"培養24小時後，觀察抑菌結果，測量抑菌圈的大小(含紙片的直徑O.7cm)。同時在紙片上加入提取過程中使用過的溶劑甲醇作為對照，並做空白紙片對照。整個實驗重複3次，取3次試驗結果的平均值。將試驗獲得的活性浸膏在8(TC水浴加熱1小時後，用甲醇溶解製備成濃度為10mg/ml的活性成分，用同樣的方法做抑菌試驗。本發明的活性提取物對人體病原菌蠟樣芽孢桿菌具有較強的抑制作用，可作為製備抑制人體病原細菌蠟樣芽孢桿菌製劑的應用，可開發為新的醫用抗生素。具體實施例方式本實施例所用的連香樹植物，採自中國科學院昆明植物研究所植物園內。實施例一連香樹的枝用水洗乾淨後後放入烘箱，在6(TC溫度下烘烤12小時。將10克烘乾後的枝切碎，放入三角瓶內，用100ml100%甲醇浸泡，在45。C的水浴鍋上提取。第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次和第三次的浸泡提取時間分別為4小時和8小時。將三次浸提的提取液合併後，在60。C溫度下濃縮得0.521克浸膏。該浸膏用甲醇溶解，製備成濃度為10mg/ml，用於做活性測定。同時做對照，結果見表l。表1連香樹枝的提取物對蠟樣芽孢桿菌的抑菌作用tableseeoriginaldocumentpage5結果表明本發明提取的活性成分對人體病原細菌蠟樣芽孢桿菌有明顯的抑菌活性，提取物在lmg時就出現強的抑菌活性，抑菌圈的大小為1.2cm，0.1mg時也出現抑菌活性，但活性較弱，抑菌圈的大小為0.8cm。實施例二基本同實施例一，不同之處是所用的材料為連香樹的葉。10克葉提取得到1.234克浸膏，用甲醇溶解，製備成濃度為10mg/ml，用於做活性測定。同時做對照，結果見表2。表2連香樹葉的提取物對蠟樣芽孢桿菌的抑菌作用tableseeoriginaldocumentpage5與枝的提取物相比，葉的提取物的量較大，抑菌活性較枝的提取物弱些。但葉的提取物的抑菌活性也具有明顯的抑菌作用，1.5mg時抑菌圈的大小為1.2cm。實施例三基本同實施例一，不同之處是提取的浸膏在8(TC水浴加熱1小時後，用甲醇溶解，製備成濃度為10mg/ml做活性。同時做對照，結果見表3。表3連香樹枝的提取物經高溫處理後對蠟樣芽孢桿菌的抑菌作用tableseeoriginaldocumentpage6一沒有抑菌圈出現結果表明，經過高溫處理後的樣品與未經高溫處理的樣品具有同樣的抑菌活性，說明該活性成分對熱穩定。權利要求1、一種從連香樹植物中提取的活性成分，其特徵在於該活性成分經如下步驟得到a.將連香樹的枝或葉用水洗乾淨後放入烘箱，在60℃溫度下烘烤12小時；b.將烘烤後的連香樹枝或葉切碎，分別放入三角瓶內，用100％甲醇浸泡，在45℃的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次浸泡提取的時間為4小時，第三次浸泡提取的時間為8小時；c.將三次浸提的提取液合併後，在60℃溫度下濃縮後得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，製備成濃度為10mg/ml的活性成分；或在80℃水浴加熱1小時後，用甲醇溶解，製備成濃度為10mg/ml的活性成分。2、權利要求1所述從連香樹植物中提取的活性成分的應用，其特徵在於該活性成分作為製備抑制人體病原細菌蠟樣芽孢桿菌製劑的應用。全文摘要本發明涉及一種從連香樹植物中提取的活性成分及其應用，屬生物醫藥
技術領域：
。該活性成分經如下步驟得到a.將連香樹的枝或葉用水洗乾淨後放入烘箱，在60℃溫度下烘烤12小時；b.將烘烤後的連香樹枝或葉切碎，分別放入三角瓶內，用100％甲醇浸泡，在45℃的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次浸泡提取的時間為4小時，第三次浸泡提取的時間為8小時；c.將三次浸提的提取液合併後，在60℃溫度下濃縮後得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，製備成濃度為10mg/ml的活性成分；或在80℃水浴加熱1小時後，用甲醇溶解，製備成濃度為10mg/ml的活性成分。本發明提取的活性成分，作為製備抑制人體病原細菌蠟樣芽孢桿菌製劑的應用，可開發為新的醫用抗生素。文檔編號A61K36/185GK101385747SQ200810058980公開日2009年3月18日申請日期2008年9月27日優先權日2008年9月27日發明者劉芳芳,張克勤,李國紅申請人:雲南大學