微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途的製作方法

2023-08-13 00:14:46 2

專利名稱：微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途的製作方法
技術領域：
本發明特別涉及微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途，屬於非創傷性超聲治療的技術領域。
背景技術：
臨床腫瘤化療時，通過使用抗癌藥物及免疫調節劑等藥物直接攻擊腫瘤細胞來治療實體腫瘤，但是實際應用時，由於受到腫瘤脈管系統屏障的影響，難以取得滿意的療效。為使腫瘤區達到有效治療濃度必須加大藥物劑量，這往往伴隨著較大的毒副作用。因此增加腫瘤微血管通透性可以提高藥物在腫瘤區的蓄積以增加療效，從而減少藥量和毒副作 用。目前增加腫瘤血管通透性的方法主要有以下幾種I.腫瘤血管內皮、基底膜及腫瘤基質中可能存在一些潛在的提高血管通透性的靶部位。通過製作攜帶活化血管的載體分子，使之導至血管內皮或內皮下層組分可以提高藥物作用區域血管通透性。不足之處是特異性不強，在提高腫瘤血管通透性的同時，對正常組織血管活性也會不加選擇的盲目影響，可能導致血壓調節障礙、水腫等，嚴重影響患者的生活質量和生命。2.通過對給藥大分子進行修飾，改變其理化性質，有助於其穿過血管內皮進人腫瘤組織。例如人們發現蛋白用某些酐類進行溫和的化學修飾後，可增加原形蛋白藥物在淋巴系統的分布。這種電荷修飾方法可以用來選擇性增加血管內皮導向的藥物抗癌製劑與其他大分子藥物在腫瘤中的分布。不足之處是經過理化修飾後會改變多數藥物的活性，使藥物在腫瘤組織中代謝活動變化，治療效果不理想。3.局部穿刺腫瘤組織給藥，雖可使部分藥物進入腫瘤組織內部，但為創傷性手段，容易損傷周圍組織，而且可能會造成腫瘤細胞的轉移。4.有研究報導高頻率的超聲聯合微泡方法可暫時提高腫瘤血管內皮的通透性，。但是現有的研究中，都集中在聞頻超聲中，如聚焦超聲和治療超聲，這類聞強度超聲都存在以下問題頻率過高，容易對照射周圍組織造成損傷，照射時間太短，效果不理想；缺少病變監控系統，不能對病變區域進行實時、選擇性的超聲輻照。

發明內容
本發明的目的是提供微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途。為了解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途，所述微泡是超聲照影劑微泡，所述診斷級超聲的形式頻率範圍為I. 7 3. 0MHz，機械指數範圍為O. 8 I. 4。
所述微泡採用靜脈注射的給藥方式，微泡使用劑量為每公斤體重200 500 μ I。所述診斷超聲的輻照時間為5 10分鐘。本發明與現有技術相比具有以下有益效果I、本發明設計的診斷超聲輻照微泡誘導的超聲空化物理效應產生顯著的生物學效應，即聲孔效應，引起周圍血管內皮細胞被"超聲打孔"導致血管通透性增高，使藥物更容易通過內皮間隙進入細胞，提高腫瘤細胞內藥物的濃度，以減少藥量和毒副作用的發生，該方案安全有效，效果理想；2、超聲治療儀或者聚焦超聲功率較大，在提高血管通透性的同時往往會伴隨周圍細胞的損傷，診斷級超聲功率相對較小，在聯合微泡進行治療時對周圍正常組織活細胞造成的損傷較小；
3、使用診斷級超聲，並且能夠準確判斷病變的位置以及周圍結構，實現靶向性導入特點組織，在治療的同時能夠實時監測，減少周圍正常組織產生破壞；4、本發明是首次提出微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途，可能為將來超聲聯合微泡技術在安全、經濟的基礎上最大可能提高腫瘤區藥物的生物學效應提供實驗依據。本發明治療方法如下選用診斷超聲聞頻探頭顯不最佳腫瘤部位，周圍組織結構，並觀察血供情況，超聲成像顯示最佳腫瘤影像後即在體表處標記；經靜脈注射所需微泡的情況下，經診斷超聲顯示在微泡灌注高峰期時，選擇低頻診斷超聲探頭輻照超聲造影劑灌注的腫瘤組織選擇4Ρ1探頭，調節頻率和ΜΙ，用設定參數的治療超聲定點照射腫瘤區。治療效果評價程序腫瘤區屏障開放程度，可以用微血管示蹤劑伊文思藍示蹤定量，一般情況下伊文思藍進入血液系統後，與血液中血紅蛋白結合成大分子物質，不會滲透到血管外反映。屏障開放後，伊文思藍可以滲透到腫瘤組織中，進行腫瘤組織中EB含量測定和螢光顯微鏡觀察。


圖I是不同處理組的皮下移植瘤模型的SD大鼠腫瘤組織EB含量的變化示意圖；圖2是雷射共聚焦觀察不同處理組腫瘤組織內EB外滲圖，a :空白對照組腫瘤組織EB分布圖像；b :單純微泡組腫瘤組織EB分布圖像；c :單純診斷超聲輻照組腫瘤組織EB分布圖像；d :診斷超聲聯合微泡組組腫瘤組織EB分布圖像；圖3是蛋白質印跡法檢測各實驗組P-選擇素蛋白與內參蛋白濃度對比圖；圖4是蛋白質印跡法檢測各實驗組P-選擇素蛋白表達的改變示意圖。
具體實施例方式將48隻已建立Walker-256皮下移植瘤模型的SD大鼠隨機分為以下四組空白對照組A ;單純微泡劑組B ;單純診斷超聲輻照組C ;診斷超聲聯合微泡組D。給單純微泡劑組和微泡聯合診斷超聲組的大鼠尾靜脈注射微泡造影劑300 μ Ι/kg，再給四組皆注射伊文氏藍(Evens Blue,EB)指示劑，選擇頻率為1·75ΜΗζ,機械指數(mechanical index,Ml)為I.4的診斷超聲持續照射腫瘤區7min。使用分光光度計和標準曲線法測量大鼠腫瘤組織內EB含量變化，雷射共聚焦顯微鏡觀察EB外溢情況以證實大鼠移植瘤微血管通透性的改變。同時採用透射電鏡觀察血管內皮細胞及細胞連接的相關變化；蛋白質印記法檢測P-選擇素蛋白(血管內皮細胞完整性的生物標誌物)的相關變化。結論I、如圖I、圖2所示，單純診斷超聲輻照組C、單純微泡組B、空白對照組A腫瘤組織的EB含量兩兩相比差異無統計學意義(P < O. 05)，雷射共聚焦觀察可見紅色光斑主要集中在血管壁，血管周圍組織紅色光斑不明顯，說明單純超聲輻照和單純微泡組血管通透性無明顯增加，EB外滲不明顯。而微泡聯合診斷超聲組D腫瘤組織內EB含量為約為對照組的5倍，雷射共聚焦觀察可見紅色光斑主要集中在血管壁和周圍組織，EB外滲明顯，表明微泡聯合診斷超聲可以顯著提高腫瘤微血管通透性。2、應用透射電鏡觀察大鼠移植瘤血管內皮細胞變化，結果發現微泡聯合診斷超聲組腫瘤血管內皮細胞腫脹，細胞連接可逆性中斷。 3、如圖3、圖4所示,微泡聯合診斷超聲組P-selectin蛋白明顯高於其餘各組,說明腫瘤血管內皮細胞完整性受損，內皮細胞之間的連接狀況與對照組相比明顯減弱，說明腫瘤微血管通透性明顯提高。以上所述的僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本領域的技術人員來說，在不脫離本發明結構的前提下，還可以作出若干變形和改進，這些也應該視為本發明的保護範圍，這些都不會影響本發明實施的效果和專利的實用性。
權利要求
1.微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途，其特徵在於，所述微泡是超聲照影劑微泡，所述診斷級超聲的形式頻率範圍為I. 7 3. ΟΜΗζ，機械指數範圍為O. 8 I. 4。
2.如權利要求I所述微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途，其特徵在於，所述微泡採用靜脈注射的給藥方式，微泡使用劑量為每公斤體重200 500 μ I ο
3.如權利要求I所述微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途，其特徵在於，所述診斷超聲的輻照時間為5 10分鐘。
全文摘要
本發明公開了微泡在製備用於聯合診斷級超聲作為提高腫瘤微血管通透性藥物的用途，所述微泡為超聲照影劑微泡，所述診斷級超聲的形式頻率範圍為1.7～3.0MHz，機械指數範圍為0.8～1.4，所述微泡採用靜脈注射的給藥方式，微泡使用劑量為每公斤體重200～500μl，所述診斷超聲的輻照時間為5～10分鐘，微泡的該用途適用於提高腫瘤微血管的通透性，能安全、靶向性導入特點組織，並且可以利用這一效應實現非創傷性藥物釋放或基因轉染。
文檔編號A61P43/00GK102836119SQ20121030552
公開日2012年12月26日 申請日期2012年8月21日 優先權日2012年8月21日
發明者王龔, 卓忠雄, 何芬, 譚偉華, 何穎 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院