一種高靈敏度層析試紙條的製備及應用的製作方法

2023-08-11 16:02:21 2

本發明涉及一種層析檢測裝置，屬於生化分析領域，具體涉及一種可對樣品進行富集的層析裝置，可實現對痕量待測物的高靈敏度檢測。

背景技術：

免疫層析技術是將免疫標記技術與層析分離技術相結合的一種新型檢測技術，該技術誕生於80年代初期，可以定性或半定量的對樣品實施檢測。當前市場上常見的免疫層析試紙條為長方形條狀，通常以單面膠PVC板為底板，層析膜、膠體金墊、樣品墊和吸水墊依次在底板上組裝而成。測試時將該試紙條一端浸入樣品溶液中，樣液即沿著試紙條向前移動，當移動至層析膜上的檢測帶和質控帶時，若樣品中含有待測成分，在特異性相互作用下，檢測帶和質控帶呈現相應的顏色，若試紙條上僅質控帶顯色，則說明樣品中不含待測成分。

免疫層析試紙條因具有快速、直觀、無需特殊設備、操作簡單的特點，在大樣品的快速篩查中有著廣泛應用。但是，對於僅含痕量待測物的樣品，這種市場上常見的免疫層析試紙條因缺少對痕量待測物的富集，在檢測速度和靈敏度方面受到極大的挑戰。

技術實現要素：

本發明針對上述現有產品的不足，公開了一種高靈敏度層析試紙條的製備方法和應用，目的在於實現對低濃度樣品的高靈敏度檢測。為了達到上述目的，本發明採用如下技術方案：

提供一種新型高靈敏度層析試紙條的製備方法和應用，所述層析試紙條包括單面膠PVC板，層析膜、膠體金墊、樣品墊和吸水墊，其中膠體金墊上結合有檢測抗體標記的納米金顆粒，層析膜上有檢測區和質控區，檢測區上包被捕獲抗體或抗原，質控區上包被二抗。該層析試紙條可裝入配套卡殼中使用(圖1)，主要用於微量蛋白質、核酸、糖等生物大分子、小分子化合物及細胞和亞細胞成分等的分析檢測。

本發明提高樣品檢測靈敏度的原理是，通過構建層析膜中間窄上下寬的結構，使樣品在進入檢測區前層析過程中通道逐漸變窄，從而在到達檢測區時單位面積的待測物數量增多，起到樣品富集的作用，進而增強檢測信號，靈敏度得以提升。

進一步地，層析膜中間窄上下寬的結構可為對稱的雙邊凹陷結構，也可為非對稱的單邊凹陷結構，所述凹陷的形狀可調。

進一步地，層析膜上的檢測區和質控區可為線狀也可為點狀或任意其他形狀，檢測區可以有一條線(點)或多條線(點)，可以檢測一種或多種待測物，檢測區位於層析膜的狹窄處，質控區位於檢測區上方，可在狹窄區也可在寬闊區。

作為本發明的優選方案，層析膜整體呈細長啞鈴狀(圖3)，中間狹窄區與兩邊寬闊區均呈長方形結構，寬闊區長方形的寬度大於狹窄區長方形的寬，狹窄區與兩邊的寬闊區以斜線相連。狹窄區寬度在0.1-10mm之間，長為10mm左右，寬闊區的長在0.5-30mm範圍內，寬在0.2-20mm之間。

作為備選方案，層析膜整體呈現短粗啞鈴狀(圖4)，中間狹窄區與兩邊寬闊區均呈長方形結構，寬闊區長方形的寬度大於狹窄區長方形的寬，該狹窄區與兩邊的寬闊區間以斜線相連。質控區位於檢測區上方，質控區若為帶狀，所述質控區條帶寬度可以等於或略小於寬闊區長方形的寬，狹窄區寬度在0.1-10mm之間，長為10mm左右，寬闊區的長在0.5-25mm範圍內，寬在0.2-20mm之間。

作為備選方案，層析膜整體呈現「工」字形結構(圖5)，中間狹窄區和兩邊的寬闊區均為長方形，狹窄區和寬闊區直接相連，狹窄區寬度在0.1-10mm範圍內，長為10mm左右，寬闊區的長約為0.5-30mm，寬在0.2-20mm之間。

作為備選方案，層析膜整體類似於啞鈴形(圖6)，兩邊寬闊區呈長方形結構，兩邊的寬闊區中間以兩條內凹的弧線連接，弧線之間的區域構成狹窄區，狹窄區中間最小寬度在0.1-10mm之間，長為10mm左右，寬闊區的長約為0.5-30mm，寬在0.2-20mm之間。

作為備選方案，層析膜整體為條狀(圖7)，中間有一個或者多個三角豁口，豁口深度為試紙條寬度的1/3-3/4，試紙條的寬度在0.2-20mm之間，檢測區位於三角豁口處，質控區位於其上有或者沒有豁口的位置。

作為備選方案，層析膜的單邊凹陷結構可為三角豁口狀，豁口的下斜邊始於層析膜的底部，所述豁口的最大凹陷處與試紙條側邊的距離可調，檢測區位於三角豁口上斜邊頂端或豁口處或其下方，質控區位於檢測區上部。

作為備選方案，層析膜的單邊凹陷結構可為圓弧狀，圓弧始於層析膜的底部終於頂部，所述圓弧的最大凹陷處與試紙條側邊的距離可調，檢測區位於圓弧最大凹陷處的上方或下方，質控區位於其上。

與現有技術相比，本發明專利提供了高靈敏度富集免疫層析試紙條的製備方法，該試紙條具有如下優點：(1)通過設置狹窄區間快速富集樣品中的待測成分，大大提高了樣品的檢測靈敏度；(2)檢驗過程不需要特殊設備，操作簡單，可實現大樣品的快速篩查。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，根據這些附圖獲得的其它附圖都屬於本發明保護的範圍。

圖1是富集免疫層析試紙條的結構示意圖

圖2是塑料卡殼結構圖

圖3是富集免疫層析試紙條的層析膜結構1

圖4是富集免疫層析試紙條的層析膜結構2

圖5是富集免疫層析試紙條的層析膜結構3

圖6是富集免疫層析試紙條的層析膜結構4

圖7是富集免疫層析試紙條的層析膜結構5

圖8是富集免疫層析試紙條的層析膜結構6

圖9是富集免疫層析試紙條的層析膜結構7

具體實施方式

下面將結合本發明的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬於本發明保護的範圍。

本發明實施例提供一種高靈敏度富集免疫層析試紙條的製備和應用，能夠對痕量待測物進行高靈敏度快速檢測。以下分別進行詳細說明。

實施例1 富集免疫層析試紙條的組裝

所需材料：PVC膠板、樣品墊、吸水墊、塑料卡殼(圖2)、玻璃纖維膜、原始層析膜購自上海金標生物科技有限公司；膠體金墊、富集免疫層析膜(圖3-圖X)由本實驗室自行製備。

操作步驟：①按圖1所示將富集免疫層析膜、膠體金墊、樣品墊、吸水墊在PVC膠板上組裝好；②將組裝好的免疫層析試紙條放入塑料卡盒內，調整位置使試紙條的T線C線位於卡殼窗口處。

實施例2 FABP的檢測

所需材料：FABP抗原，購自Hytest、富集免疫層析試紙條(圖8)及常規FABP層析試紙條由本實驗室自行製備

操作步驟：①將待測樣品配製成一系列的濃度梯度；②將樣品由吸水墊處加入，以未做形狀處理的常規FABP層析試紙條作為對照；③等待10min，觀察實驗結果。

實驗結果：未做形狀處理的常規FABP層析試紙條檢測靈敏度下限為0.5ng/ml，同等實驗條件下，富集免疫層析試紙條檢測下限為0.1ng/ml。

以上對本發明實施例所提供的一種高靈敏度富集免疫層析試紙條進行了詳細介紹，該試紙條對樣液的定量或半定量分析可配合後續多種不同類型如可見光、化學發光、螢光、拉曼等的檢測儀器和分析組件進行。本發明裝置檢測的目標物可以是蛋白質、核酸、糖等生物大分子、小分子化合物及細胞和亞細胞成分等，可用於臨床診斷、檢驗檢疫、食品安全檢測、司法鑑定、毒品檢測等領域。

本文中應用了具體個例對本發明的原理及實施方式進行了闡述，以上實施例的說明只是用於幫助理解本發明的方法及其核心思想；本同時，對於本領域的一般技術人員，依據本發明的思想，在具體實施方式及應用範圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內容不應理解為對本發明的限制。