一種利用羊角月牙藻檢測水中全氟辛烷磺酸毒性的方法與流程
2023-07-05 06:48:21
本發明涉及檢測技術領域，具體是一種利用羊角月牙藻檢測水中全氟辛烷磺酸毒性的方法。
背景技術：
全氟辛酸是一種全氟有機酸，具有疏水和疏油特性，在碳氧化合物表面能使氟化物具有極高的表面活性，且耐高溫和耐強氧化劑，化學結構遠較其他表面活性劑穩定，因此被廣泛用於數百種化學工業、機械工業和日用全氟化工產品中。20世紀50年代夥計、醫藥品和化妝品，以及電子產品的生產和化學鍍膜領域。其大量生產和使用已在全球生態系統中造成了嚴重的環境累計和持久性汙染，成為嚴重威脅生態環境和人類健康的安全隱患。2005年，美國環境保護書(epa)見pfoa列為可以致癌物質。由於該類物質的極性和遷移性使其可以在不降解情況下進入海洋或地下水中，對水體中生物體構成威脅。
急性毒性數據顯示，pfoa類物質半致死濃度遠高於環境中的實際含量。因此，關於pfoa的低劑量、長期慢性毒性研究更具有現實意義。目前，人類對pfoa等全氟化合物有機化合物對水體重的生物體的毒性影響主要集中在大型植物、兩棲動物、魚類、蚌類和大型溞類。這些模式和非模式的生物生長周期均在兩周以上，試驗周期長，浪費資源。羊角月牙藻因其生長迅速，易於實驗室培養，國內外均已將羊角月牙藻作為化學品、農藥登記中環境試驗的模式生物，廣泛應用於生命科學、毒理學、環境科學和農業科學等領域。
技術實現要素：
針對上述現有技術中的不足之處，本發明旨在提供一種簡便、靈敏、系統的利用羊角月牙藻檢測水中全氟辛烷磺酸毒性的方法，該方法方便、快速、成本低廉。
為解決上述技術問題，本發明一種利用羊角月牙藻檢測水中全氟辛烷磺酸毒性的方法，包括以下步驟：
1)羊角月牙藻的培養
羊角月牙藻用l9培養基進行培養，每2～4天轉接一次，至少連續轉接三次，確保其處於對數生長期，在23±1℃、4440～8880lux持續光照條件下培養；
2)生長抑制試驗
將全氟辛烷磺酸設為5個濃度梯度，分別為2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0及128.0mg/l，每個梯度設置3個平行，另設1個空白對照組，在每個三角瓶中分別加入50ml配製好的2倍試驗液濃度及50ml濃度為4×107cells/l的藻液，試驗在23±1℃，持續光照條件下進行，採用概率單位法分別計算72herc50值；
3)不同濃度全氟辛烷磺酸對羊角月牙藻增長率的影響
利用72h生長率抑制百分率評價不同濃度全氟辛烷磺酸對羊角月牙藻生長抑制的影響，72h後，觀察每個處理下羊角月牙藻藻細胞濃度，處理組，藻類生長率的抑制百分率的計算公式為：
ir是處理組藻類生長抑制百分率，μc是空白組生長率的平均值，μt是處理組生長率的平均值，
其中μ的計算公式為：
μj-i是在時間點j到時間點i之間的平均生長率，xi是在時間點i時的藻生物量，用細胞數表示為個/ml，xj是在時間點j時的藻生物量，用細胞數表示為個/ml。
優選的，在步驟3)中所述濃度為8.0、16.0及32.0mg/l。
本發明的利用羊角月牙藻檢測水中全氟辛烷磺酸毒性的方法克服了目前測定水中pfoa生物毒性中周期長、操作複雜的困難，提供了一個簡便、靈敏、系統的檢測水中全氟辛烷磺酸(pfoa)毒性的方法，該方法方便、快速、成本低廉。
附圖說明
圖1為本發明中不同濃度的全氟辛烷磺酸對羊角月牙藻生長率的影響。
具體實施方式
下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。
實施例1
本發明的利用羊角月牙藻檢測水中全氟辛烷磺酸毒性的方法，包括以下步驟：
1)羊角月牙藻的培養
羊角月牙藻用l9培養基進行培養，每2～4天轉接一次，至少連續轉接三次，確保其處於對數生長期，在23±1℃、4440～8880lux持續光照條件下培養；
2)生長抑制試驗
將全氟辛烷磺酸設為5個濃度梯度，分別為2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0及128.0mg/l，每個梯度設置3個平行，另設1個空白對照組，在每個三角瓶中分別加入50ml配製好的2倍試驗液濃度及50ml濃度為4×107cells/l的藻液，試驗在23±1℃，持續光照條件下進行，採用概率單位法分別計算72herc50值；
3)不同濃度全氟辛烷磺酸對羊角月牙藻增長率的影響
利用72h生長率抑制百分率評價不同濃度全氟辛烷磺酸對羊角月牙藻生長抑制的影響，72h後，觀察每個處理下羊角月牙藻藻細胞濃度，處理組，藻類生長率的抑制百分率的計算公式為：
ir是處理組藻類生長抑制百分率，μc是空白組生長率的平均值，μt是處理組生長率的平均值，
其中μ的計算公式為：
μj-i是在時間點j到時間點i之間的平均生長率，xi是在時間點i時的藻生物量，用細胞數表示為個/ml，xj是在時間點j時的藻生物量，用細胞數表示為個/ml。
由急性致死實驗篩選合適的處理劑量，結果得知：全氟辛烷磺酸(pfoa)半數抑制濃度為54.0mg/l，無可觀察效應濃度noec為8.0mg/l，可觀察效應濃度loec值為16.0mg/l，選擇72h-ec50值以下noec值以上考察不同pfoa濃度對羊角月牙藻生長抑制率的影響。
實施例2
以濃度為16.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液來代替實施例1中的步驟3中8.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液，其他條件同實施例1；試驗表明，與對照相比，16.0mg/l得全氟辛烷磺酸(pfoa)藻細胞濃度增長量稍低於空白對照組。
實施例3
以濃度為32.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液來代替實施例1中的步驟3中16.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液，其他條件同實施例1；試驗表明，與對照相比，32.0mg/l得全氟辛烷磺酸(pfoa)藻細胞濃度增長量顯著於空白對照組。
顯然，所描述的實施例僅僅是本發明的一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬於本發明保護的範圍。